羊眼透明质酸的制备

羊眠透明质酸的制备 张彬 周武 南昌大学中德食品工程中心，南昌 330047 摘要 ：对 以羊眼为原料制备透 明质酸 的工艺进 行改进 ，改进后 的制 备工艺切 实可行 。生产周期缩短为原 来的一半 ，产 率明显提 高，产品质量可靠。 关键词 ：羊眼 ，透明质酸 ，制备 0．前言 透明质酸(hyaluronic acid)是一种酸性粘多糖 ，常与蛋白质结 合，以蛋白质复合物的形式存在于细胞间，对细胞的代谢和组织保 水起重要作用t’1。在人体的真皮层中，组成基质的主要成分也是透 明质酸等酸性粘多糖。目前，透明质酸已被广泛应用于医药、化妆 品等方面。透明质酸无致炎性及抗原性 ，是理想的“粘性手术”材 料，对提高眼科 、骨科手术效果起重要作用；用于化妆品能使皮肤 面光滑、柔嫩，有延迟或防止皮肤老化的功能。 近年来，国内对从羊眼提取透明质酸的研究时有报道四，但提 取工艺较繁琐，产率较低。为此，对羊眼提取透明质酸分离工艺进 行改进，通过实验证实改进后的工艺能快速 、高效提取透明质酸。 1．与设 备 1．1 材料 羊眼，由江西修水龙腾实业有限公司提供 ； 氢氧化钠(纯)，市医药公司采购； 三氯乙酸(分析纯)，市医药公司采购； 去离子水，自制； 溴化十六烷基吡啶 (分析纯)，市医药公司采购； 无水乙醇，市医药公司采购； 1．2 设备 真空泵， 冷冻离心机， 抽 滤器 ， 组织粉碎器， 真空干燥箱， 2．实验 2．1 工 艺路 线 [绞碎，浸取，离心] [离心] NaOH，pH=7 羊眼玻璃体 —————— 匕清液 —————— 清液 — — 去离子水，60~C NaCI，5％三氯乙酸 l％CPB 离心 冷冻抽滤 调节PH至碱性 透明质酸复合物 ———’杭淀物 ———．密鲁液————叼．4Ⅱ ／l NaC1， 40℃ 95％乙醇 ，离心 脱水 透明质酸沉淀物 ———一+透明质酸 干燥 2．2 操作步骤 1)墁提 ：用解剖剪把羊眼绞碎，取出羊眼玻璃体 ，用等重量的 去离子水于60℃浸提两次，每次30分钟，合并两次浸提液。(或用等 重量的0．05mol／l氢氧化钠溶液于60℃浸提两次，每次30分钟，合并 两次浸提液)。 2)除蛋白质：向浸提液中加入氯化钠，使浸取液中氯化钠含量 达到0．Itool／1，然后使用高速离心机离心沉淀蛋白质，取上清液。 (如果是用0．05mol／1氢氧化钠溶液浸提，则需将浸提液用盐酸溶液 调到中性 )。 3)沉淀透明质酸复合物 ：上清液用碱液调到中性 ，加入l％溴化 十六烷基吡啶(CPB)形成透明质酸——CPB沉淀物。 4)解离：透明质酸一CPB沉淀物用0．4mol／1氯化钠溶液于40℃解 离两次，将不溶物过滤除去，取上清液。 5)沉淀 ：把上述上清液用氢氧化钠溶液调PH值至碱性，加入3 倍95％的乙醇，立即产生大量絮状沉淀。待沉淀基本完全后，用盐酸 溶液调到中性，再静置一段时间，然后用离心机离心收集沉淀。 6)干燥：把所得透明质酸沉淀物烘干，得透明质酸。 7)检测：透明质酸样品用红外光谱仪检测，本产品送到江西分 析化学中心检测，分析结果如下图所示。 8)精制：把带有颜色的透明质酸用去离子水溶解 ，加入少量碱 液，冷冻抽滤除去大部分CPB后，加入漂白土吸附 ，脱去溶液颜色及 除去残留的蛋白质、核酸、CPB等杂质，干燥得精制透明质酸。 3．结果与讨 论 维普资讯 http://www.cqvip.com 食品科技 FO0D SCIENCE＆ TECHNOLOGY 3．1 产品收率 玻璃体重1．2g，透明质酸干重为0．06g， 透明质酸的收率=(O．06+．1．2)xi00％=5％ 3．2 质 量检 测结 果 外观：以去离子水浸取的产品为白色无定形粉末，以0．05moW1 NaOH浸提的产品为黄色无定形粉末 ，均无臭，无味。未脱色时 ，产 品为浅黑色。 红外光谱分析 ：将实验所得产品的红外光谱图与清华大学李 润所作的谱图比较伪，波谱峰在几个大范围内与对照谱图基本一 致，通过使用化学分析，此产品有很多——_oH结构，且有C=O 与C=N及N—H结构，表明产品存在酰胺基结构，且有CC0一与O— H的结构，表明存在糖醛酸的解离羧基和多羟基结构。而在小范围 内几个不同峰表明，由于样品在分析时还未脱色，且样品中含有少 量溴化十六烷基吡啶和蛋白质的干扰，所得峰中有蛋白质等物质 的吸收峰。 圈l 自羊眼提取小样的红外吸收光谱圈 4．结论 改进后的工艺精简了先用丙酮沉淀，然后再溶解除去蛋白质 操作，以及先制得粗品再精制的步骤，采取直接用三氯乙酸除蛋白 质和直接制精品的方法。对两种浸提透明质酸的方法，通过产验证 实，用0．05mo~l氢氧化钠提取更完全，而且在碱性条件下乙醇沉淀 蛋白质非常快。 通过实验，用活性炭吸附明显不行，颜色会越来越深 ，而用漂 白土吸附效果很好。并且漂白土吸附操作应放在CPB沉淀透明质酸 之后，因为残留的CPB会影响透明质酸的颜色，漂白土吸附可除去 残留的CPB。 改进后的制备工艺切实可行，生产周期缩短为原来的一半．产 率明显提高，产品质量可靠。所得透明质酸可用于配制化妆品等。 参考文献： 1．王凤山，凌沛学，生化药物研究，人民卫生出版社，1997，291— 295 2．朱广华，透明质酸制备方法及应用研究的进展，中国医药工 业杂志，1996．2(8)381—384 3．李润等，羊眼透明质酸制备工艺的改进，中国医药工业杂志， 1999．30(7)，289—291 Preparation of Hyaluronic Acid from Sheep Eyes Zhang Bin Zhou Wu Sino-German Food Engineering Certer of Nanchang Universi． ty，Nanchang，330047 Abstract：A new process for preparation of hyaluronic acid from sheep eyes was progressed． Compared with the traditional process， the method shorted the proction period and increased the yield up．The quality of the product W88 also improved． Keywords：sheep eyes，hyaluronic acid，preparation 维普资讯 http://www.cqvip.com