应用国产促卵泡素超排皮埃蒙特牛试验

应用国产促卵泡素超排皮埃蒙特牛试验 应用国产促卵泡素超排皮埃蒙特牛试验 20HeilongjiangJournalofAnimalReproductionVo1.15No.42007 应用国产促卵泡素超排皮埃蒙特牛试验 郝海生,朱化彬 (中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100094) 摘要:利用国产高活性促卵泡素(FSH)超排纯种皮埃蒙特肉牛,平均获可用胚胎6.45枚/头.其中,青年 母牛6-3枚/头,促卵泡素剂量控制在7.5,8.2mg;成年母牛6.5枚/头,促卵泡素剂量控制在8.2,9.2mg.间 隔50,60d,连续超排4次对超排效果无明显影响. 关键词:FSH;皮埃蒙特牛;超排 中图分类号:$823.3+6文献标识码:A文章编号:1005—2739(2007)04—0020—02 许多研究利用国产高活性FSH超排奶牛取得了 较为理想的效果,但是应用国产高活性FSH超排纯种 肉牛的研究较少.本试验旨在观察国产高活性FSH对 纯种皮埃蒙特牛进行超排处理的效果. 1材料与方法 1.1供体母牛的选择 生殖器官,发情周期正常,产后2个月以上,或满 l6月龄的健康纯种皮埃蒙特母牛. 1.2药品与器械 国产高活性促卵泡素(FSH)为中国科学院动物所 研制;前列烯醇(PG)和维生素ADE合剂为中国农业科 学院北京畜牧兽医研究所研制;PBS液是试验室配制; 胚胎保存液,冷冻液购自美国AB公司;采卵管购自法 国卡苏公司. 1.3供体母牛的同期发情 供体母牛为自然发情或者使用前列烯醇一次处理 的母牛. 1.4超排处理 供体母牛上次发情9,14d后,经直肠检查,对卵 巢上有功能性黄体者进行超排处理.肌肉注射FSH,每 日早晚各1次,连续4d,共注射8次,采用逐日降低剂 量的方法.青年牛总剂量在7.2,7.8mg,经产牛在 8.0,9.2mg.于注射FSH的第3d早晚同时肌肉注射 PG.如果供体母牛第5d早晨未见发情,再肌注0.1, 0.2mg.在供体母牛发情后的12,24,36h,分别进行人 工授精,输精量加倍. 1.5采卵 在供体母牛发情后的第7d(发情日为0d),用非 手术方法进行采卵,镜检,记录胚胎总数,可用胚胎数, 收稿日期:2007—03—19 作者简介:郝海生(1977一),男,北京人,助理研究员,在 职研究生. 项目名称:国家外专局引智项目(编号20060326006) 通讯作者:朱化彬(1965一),男,安徽固镇人,研究员,硕士. 将优质的胚胎提供给胚胎分割或性别鉴别实验处理 后,再分别移植给同期发情的受体母牛或进行冷冻低 温保存备用. 1.6胚胎质量鉴别 胚胎从集卵杯中检出后,移人到胚胎保存液中,在 解剖显微镜下观察胚胎,依据胚胎形态分为可用胚胎, 退化胚胎(8一l6细胞,停止发育的胚胎及未受精卵). 2结果与 2.1青年牛与经产牛的超排结果 表1表明,青年牛和经产牛的平均获胚胎数都在 7枚/头以上,二者差异不显着(P>0.05);可用胚胎数 在6枚/头以上,差异不显着(P>0.05o以上结果说明 利用国产FSH超排皮埃蒙特牛能够获得较好的效果. 表1青年牛与经产牛的超排结果 2.2不同剂量FSH对青年母牛和经产母牛超排结果 表2和表3表明,超排的青年母牛所得平均可用胚 胎数都在6枚/头以上,各剂量之间差异不显着(P>0. 05).超排成年母牛所得可用胚胎数差异较大,最低不到 平均5枚/头,最高能够到8枚/头.其中8.0,8.5mg剂 量组与8.5,9.0mg剂量组和9.0,9.5mg剂量组的所得 可用胚胎数差异显着(P<0.05),而在8.5,9.0mg剂量组 和9.0,9.5mg剂量组之间差异不显着(P>0.05o以上结 果说明,青年母牛FSH剂量控制在7.0,8.5mg,成年母 表2不同剂量FSH对青年母牛超排的结果 黑龙江动物繁殖第l5卷第4期2007年2l 牛的FSH剂量在8.5—9.5mg,超排能够取得较好的效 果. 表3不同剂量FSH对经产母牛超排的结果 2.3不同批号国产FSH超排皮埃蒙特牛的结果 表4表明,不同批号的国产FSH超排皮埃蒙特牛, 所得平均胚胎数在6.5枚/头以上,最多能够得到平均 8.5枚/头.除批号为030104和040501的国产FSH超 排所得平均可用胚胎数在5.5枚/头以上.其他批号的 FSH超排所得平均可用胚胎数都在6.0枚/头以上.各 批号之间的平均可用胚胎数差异不显着(P>0.05). 表4不同批号国产FSH超排皮埃蒙特牛的超排结果 2.4重复超排皮埃蒙特牛的结果 表5表明,利用国产FSH重复超排皮埃蒙特牛4 次所得平均胚胎数在7.0枚/头以上.平均可用胚胎数 最低都在5枚/头以上,且差异均不显着(P>0.05). 表5重复超排皮埃蒙特牛的结果 3讨论 3.1决定母牛超数排卵获取可移植胚胎的一个关键 因素是超排使用的促性腺激素(FSH)的剂量.由于目 前FSH主要是从动物脑垂体中提取,因此FSH商品制 剂同时含有FSH和LH的活性,FSH的主要生理功能 是促进卵巢的发育,而LH则促进排卵,使卵泡黄体化 和促进黄体细胞分泌孕激素.因此,商品FSH制剂中 FSH与LH活性比值大小就会影响母牛超排结果.试 验结果表明,当FSH与LH活性比值大于0.45时超排 效果较好. 经生物学和放射免疫测定,国产高活性FSH的 F/L比值分别为0.56和0.71,比粗制品(0.48和0.54) 高,与Donalolson等人测定的比值相近(0.68),所以在 奶牛,绵羊和黄牛超排中取得了较好的结果. 3.2从超排结果中可以看出,相比于进口FSH,国产 FSH超排皮埃蒙特牛虽然获取的胚胎数量较少,但是 可用胚胎率是高的.从以往的报道中也能够得出利用 进口FSH进行超排处理,其采集胚胎数量多,但是不 可用胚胎数也多.这可能是由于超排发情期间P4水平 上升较快,会使E峰提早出现,加速卵子的移动并提 早进入子宫,同时出现排卵的不同步,以及精子在超排 动物生殖道内运动力减弱,到达受精部位的精子数减 少也影响了精子在输卵管的运输,从而产生较低的受 精率.子宫环境也因受过高的P4水平影响而不利于胚 胎的存活,从而产生较高的退化率.Jensen等研究表 明,超排处理后3—6d,血浆中较低的P4和较高的 E2/P4比值有利于受精和胚胎发育,而相对较高的P4水 平和较低的E2/P4比值则不利于受精. 3.3超排皮埃蒙特牛的过程中,有5头牛的超排结果 不甚理想,经直肠检查,发现卵巢上存在直径较大的优 势卵泡.超排结果的不理想可能与优势卵泡的存在有 关系.牛有2或3个卵泡波,其特征是一批卵泡发育, 其中一个卵泡继续生长,其余则发生闭锁,当生长的卵 泡比同一波的其他卵泡直径大时,被称为优势卵泡.优 势卵泡的存在能减少和推迟生长卵泡的发育,导致排 卵率的降低,从而导致平均获胚胎数和平均利用胚胎 数都比无优势卵泡组少.无优势卵泡供体牛的超排效 果明显比有优势卵泡供体牛好.优势卵泡的存在会降 低排卵率和可用胚胎的数量,这可能是由于卵巢上卵 泡的存在使超排开始时卵巢上卵泡处于不同的生长发 育阶段,先发育的卵泡有可能成为优势卵泡,分泌雌二 醇进入卵巢静脉,作用于垂体减少FSH分泌,这样在外 源FSH逐渐供给减少的同时,内源FSH也开始减少从 而使得发育晚一些的卵泡得不到充足的FSH,影响其 生长发育,以至闭锁,有的甚至发生卵泡黄体化. 3.4一般地说,青年牛对超排的反应比经产牛差,但 是由于青年牛的子宫环境较好,所以可用胚胎较高.同 时青年牛由于子宫颈较细,采卵管通过子宫颈时比较 困难,因此,青年牛采卵时应用较细的采卵管(15号或 16号).