藏红花提取液对慢性高眼压兔眼玻璃体谷氨酸浓度的影响

藏红花提取液对慢性高眼压兔眼玻璃体谷氨酸浓度的影响 藏红花提取液对慢性高眼压兔眼玻璃体谷 氨酸浓度的影响 InternationalJournalofOphthalmology,Vo1.6,No.5,Oct.2006 Teh029..82245172EmaihIJO.2000@163.comwww.1JO.ca 藏红花提取液对慢性 的影响 高眼?实验研究? 压兔眼玻璃体谷氨酸浓度 杨新光,张强,于敬妮,廉江平.,雷爱军 E仟ectofCrocussativusextractionthe concentrationofglutamicacidinthevit- reousbodyinrabbitswithchronicocular hypertension Xin—GuangYang,QiangZhang2,Jing-NiYu, Jiang-PingLian3,Ai-JunLei Foundationitem:ShaanxiProvincialTechniqueInnovationProject fNo.2004K10一G71 DepartmentofOphthalmoh)gy,theFourthHospitalofXianCity, Xian710004.ShaanxiProvince.China;DepartmentofOphthalmolo— gY,ChineseMedieineHospitalofYantaiCity,Yantai264002,Shan— dongProvince.China;DepartmentofPharmacy,People'sHospitalof ShaanxiProvince.Xi'an7l0068.ShaanxiProvince.China. Correspondenceto:Xin—GuangYang.DepartmentofOphthalmol— ogy,theFourthHospitalofXianCity,Xi'an710004,Shaanxi Province.China.yangxinguang62@hotmail.corn Received:2006-07-12Accepted:2006-08-28 Abstract .AIM:T0exploretheconcentrationofglutamicacidinvitre— OUSbodyofrabbitswithchronicocularhypertension(OHT) andtheinhibitioneffectofextractofCrocussativusonthe concentrationofglutamicacid. .ME『rHODS:Twentyrabbitswererandomlydividedintocon— trolgroup,OHTgroupandtwotreatedgroups,with5rabbits ineachgroup(5eyes).The3g/Lcarbomerintoanterior chamberofthe0HTgroupandthetwotreatedgroups.Rab— bitsintwotreatedgroupsweretreatedwithextractofCrocus sativuseveryday.High—performanceliquidchromatogIraphy (HPLC)wasutilizedtomeasuretheconcentrationofglutamic acidinvitreousbody. .RESULTS:Theconcentrationofglutamicacidinvitreous bodyofrabbitsintheOHTgroupweresignificantlyhigher thanthoseincontrolgroupandtreatedgroup(P<0.01).Sig— nificantdifierenceappearedbetweenthetreatedgroupIand 基金项目:中国陕西省科技创新项目(No.2004K10一G7) 作者单位:(710002)中国陕西省西安市第四医院眼科;: (264002)中国山东省烟台市中医医院眼科;(710068)中国陕 西省人民医院药剂科 作者简介:杨新光,男,医学博士,教授,主任医师,硕士生导师. 通讯作者:杨新光.yangxingtlang62@hotmail.corn 收稿日期:2006—07—12修回日期:2006—08—28 treatedgroupll(P<0.o1). .CONCLUSION:Higherconcentrationofvitreousglutamate damagingritinawasinducedbyOHT.ExtractofCrocus sativuscansignificantlyinhibitthevitreousglutamateconcen— tration. .KE,r,/\/0RDS:chronicintraocularhypertension;vitreous body;glutamicacid;high_.performanceliquidchromatogra.. phy;Crocussativus YangXGZhangQ,YuJN,LianJPLeiAJ.EffectofCrocussativus extractlonthe(oncentrationofglutami(.aridinthevitreousbodyin rabbitswithchronicneulal'hyperlension.IntJOphthalmolu YankeZazhi),2006;6(5):1025-1026 摘要 目的:探讨慢性高眼压后兔眼玻璃体谷氨酸浓度的变化 情况及藏红花提取液对谷氨酸浓度的抑制作用. :将新西兰白兔20只随机分为对照组,高眼压组, 治疗I组和治疗II组,每组均5兔5眼.高眼压组和治疗 I,II组兔眼前房注入3g/L复卡波姆溶液制作成慢性 高眼压模型.治疗I,II组免每日耳缘静脉推注50g/L藏 红花提取液.4wk后利用高效液相色谱仪测定各组兔眼 玻璃体中谷氨酸的浓度. 结果:高眼压组对照组,治疗组兔眼玻璃体谷氨酸浓 度有显着性差异(尸<0.01),日.治疗I组与治疗II组有显 着性差异(尸<0.01). 结论:慢性高眼压可导致玻璃体谷氨酸浓度升高,对视网 膜产牛损伤;藏红花提取液可着降低玻璃体中谷氨酸 的浓度,对这种视网膜功能损害起到保护作用. 关键词:慢性高眼压;玻璃体;谷氨酸:高效液相色谱仪; 藏红花 杨新光,张强,于敬妮,廉江平,雷爱军.藏红花提取液对慢性高眼 压兔眼玻璃体谷氨酸浓度的影响.际眼科杂志,2006;6(5): 1025—1026 0引言 兴奋性氨基酸(excitatoryaminoacidsEAAs)主要包括 谷氨酸和天门冬氨酸,是中枢神经系统的主要兴奋性递 质,也是视网膜神经元的主要兴奋性递质II.体内外的实 验均说明兴奋性氨基酸如果大量存在,势必对神经元产生 损伤.有实验证明高眼压可致视网膜谷氨酸上升,过量 的谷氨酸将对视网膜产生毒性作用,引起视网膜神经元 的死亡,而玻璃体谷氨酸含量受视网膜谷氨酸代谢的影响 1025 国际眼科杂志2006年1Q月第6卷第5期 电话:029—82245]72电子信箱:IJO.200— 0@16— 3.com 并反映其功能状况,因此我们对兔眼玻璃体中谷氨酸含量 的定量测定,来探讨藏红花提取液对视网膜的保护作用: 1材料和方法 1.1材料日本岛津公司LC一2010HT型高效液相色谱分 析仪,RF—IOAXL型荧光器;菲罗门科技C18反相 色谱柱(PC一1015),4.6ram×150ram,粒度5m.卡波姆一 940购自上海申兴制药厂,配制成3g/L复方卡波姆溶液 f含地塞米松0.25g/L)供实验用;速眠新沣射液由农牧大 学军事兽医研究所生产;藏红花南第四军医大学口腔医 院药剂科提供:每次称取藏红花15g,加蒸馏水煮沸 30min后过滤(2次),滤液减压浓缩,然后加3倍量 950mL/L乙醇沉淀24h,再过滤,滤液减压蒸馏回收乙 醇,稀释成100mL后装瓶,蒸汽灭菌30minII,实验使用时 再稀释成50g几的溶液. 1.2方法健康成年新西兰大白兔20只,体质量2.5, 3kg,制作高眼压模型前,眼底镜检查眼前节及眼底无异 常,5g/L的卡因眼液面麻醉后,Schiotz眼压计连续测量 眼压3d,1次,眼压低于17mmHg(1mmHg=0.133kPa) 的动物方可采用,随机平均分成4组,正常对照组,高眼 压组,治疗l组,治疗?组,共20只兔,20眼.慢性高眼 压模型以眼压>22mmHg,并能持续1wk为lfI:除正常 对照组外,其余各组均肌注速眠新0.1mIJkg全身麻醉, 5g/L的卡因点双眼行表面麻醉,角膜缘用lmL注射器穿 刺,形成一个小针孑L,然后在此小针孑L对侧的角膜缘穿 刺抽出房水约0.2mL,换针管注入约0.2mL的3g/L复方 卡波姆溶液,制作成慢性高眼压模型l.对照眼仅作前房 穿刺.固定新西兰大白兔,测量眼压,1次,如果高眼压 组和治疗组眼压低于22mmHg,则重复注入3g/L复方卡 波姆溶液,同时治疗I,?组耳缘静脉推注藏红花提取 液,1次,剂量分别为20mg/kg和80m~kg.4wk后取材. 将实验兔麻醉后,5g/L的托吡卡胺散瞳,以lmL注射器 经上方角膜缘后4mm直视下玻璃体腔穿刺,抽取后极部 玻璃体0.1mL,以生理盐水稀释至0.5mL.置1.5mLEp— pendoff管中,一70冷冻保存.采用邻苯二甲醛柱前衍 生化法l7I,高效液相色谱仪与荧光光度检测器测定样品 中的氨基酸.通过标准品的测定,采用外算法根据氨基 酸的色谱峰面积计算样品中的谷氨酸含量. 统计学处理SPSS统计软件进行两样本比较的成组 /检验 2结果 结果显示免眼玻璃体谷氨酸浓度:高眼压组 (5.526?0.830mg/L)与治疗I组(3-204?0.544mg/L1比较, /=5.231,P<0.01;高眼压组(5.526?0.830mg/L)与治疗? 组(1.350?0.24lmg/L)比较,,=10.804,P<O.0l;高眼压组 (5.526?0.830mg/L)与正常对照组(0.646?0.158mg/L)比 较,,:12.914,P<O.0l;治疗I组(3.204?0.544rag/L)与治 疗?组(1.350?0.241mg/L)比较,,=一6.968.P<0.01;治疗 I组(3.204?0.544mg~1与正常对照组(0.646?0.158mg/L1 比较,/=10.108,P<0.01;治疗?组f1.350?0.241mg/L)与 正常对照组(0.646?0.158mg/L)比较,,:5.46l,P<0.0l. 由以上统计结果我们可以看出,藏红花提取液可明显降 低玻璃体中谷氨酸的浓度,并有明显的量效关系. 3讨论 谷氨酸(G1u)是视网膜的组成成分之一,正常情况 下,谷氨酸作为兴奋性神经递质主要存在于视网膜神经 末梢的突触囊泡内,视网膜神经细胞和神经胶质细胞的 高效吸收系统可控制突触间隙的谷氨酸浓度,从而使视 网膜神经厄免受损伤,而在缺血,缺氧条件下,能量耗 竭,视网膜神经元释放谷氨酸增加而重摄取减少,以及 死亡细胞崩解溢出大量谷氨酸,于是细胞间隙谷氨酸浓 度迅速增加I,高浓度的谷氨酸通过刺激突触后神经元 细胞膜上的对应受体,导致神经元损伤]q-12j.许多研究证 实青光眼,高眼压,视神经损伤,缺氧均能引起玻璃体谷 氨酸浓度升高:因此,抑制谷氨酸的兴奋性毒性成为青 光眼视神经保护的主要途径之一藏红花在我国被列为 珍稀名贵中药材.藏红花具有很强的活血化瘀和散郁开 结的功效,一直被用于临床,几乎无毒副作用,藏红花生 药中的主要成分有藏红花酸,藏红花素约15g/kg,藏红花 酸二甲酪,藏红花苦素,挥发油为4,13g/kg,此外还含有 桉脑,蒎烯,多种维生素和硫胺素等化合物,有实验证明 藏红花提取物特别是藏红花素能有效抑制氧自由基及黄 嘌呤氧化酶的活性,表现抗氧化生物活性,而本实验通 过对兔眼玻璃体中谷氨酸浓度的定量测定,发现藏红花 提取液能明显降低慢性高眼压兔模型眼玻璃体内谷氨酸 的浓度,其作用机制主要可能有以下几个方面:(1)维持 视网膜能量供给.缺血缺氧条件下,恢复视网膜血流灌 注和营养供给,能量的补充,可减少因能量耗竭而引起 的谷氨酸释放;(2)减少突触前膜谷氨酸释放,降低突触 间隙谷氨酸浓度;(3)降低细胞外谷氨酸浓度.谷氨酸合 成酶可加强细胞外谷氨酸代谢,降低细胞间隙谷氨酸浓 度,藏红花提取液可能通过诱导Miiller等细胞内的谷氨 酸合成酶,增强这些细胞吸收,清除细胞外谷氨酸的能 力,从而减少细胞外谷氧酸.通过以上途径,藏红花提取 液可显着降低视网膜及玻璃体中的谷氨酸浓度,但藏红 花提取液影响玻璃体中谷氨酸浓度的确切作用机制,还 有待进一步研究: 参考文献 1DowlingJE.(吴淼鑫.杨雄里,译)视网膜.I海:l海医科大学版社,1989: 73—96 2胡田渊.兴奋性氨基酸.北京:北京医科大学m版}1:,1999:525—538 3l千平宝,蒋幼芹.黄佩刚,陈主初.兔实验性急性高眼压模型视网膜符氨酸 的变化.中华眼科杂志,2000:36:378—380 4曹春林.中药药剂学.f:海:1-.海科学技术?版社.1986:367—376 5王吕鹏,杨新光.晓娟,李养军.兔慢性高眼』K模的建第四军医大学 .2004:25(7):606—609 6徐岩.陈祖基.宋沽贞.复方波姆诱发的兔高眼H{模j他兔高眼压 模型的比较研究.中华眼科杂志,2002:38(3):172—175 7叶惟泠邻苯二甲醛衔生化高效液相色谱法脑氨基酸生理. 1988:40:308—3l3 8宋革.视网膜神经细胞氨酸毒性的防护研究围外医学f眼科分册1. 2000:24(4):224—227 9DawsonTMNilrir『1xidPSVI1thasP.rolPasal1ansmitfPr/mPdialorinthPhrnin andendocrinestem.4nnu,如.1996:47:2l9-227 10OsborneNN.Neuroproteetioninrelationtore[inalisehemiaandrelevanceIo glau(,oma..(~h/ha/mo1.1999;43(suppl11:102—128 11SiesoBK.Pathophysiolo~,all(1h,ealmentoffooalrerebralisehemi.Partll: Mechanismsofdamageandtreatment,ums【f?.I992;77:337—354 12王永强.严宏.谷氨对视网膜缺血的损害机制和相关治疗策略国际眼科 杂志,2005:5(5):1OO6—1009