HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量

HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量 【摘要】目的建立HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量。 采用AgilentHypersil-ODS-C18柱(250mm×4.0mm,5μm),以甲醇 -水(70?30)为流动相;检测波长为274nm,流速为1.0mL/min。结果线 性范围为0.052,0.84μg(r,0.9999),平均回收率为99.94%(RSD, 1.63%)。结论本法简便、灵敏、准确,可用于该制剂的质量控制。 【关键词】参桂调经丸;丹皮酚;高效液相色谱法 Abstract: ObjectiveToestablishamethodofHPLCfordeterminingthePaeonolinShenguiTiaojingPill.MethodAgilentHypersil-ODS-C18(250mm× 4.0mm,5μ m)wasused,themobilephaseconsistedofmethanol-H2O(70? 30).Theflowratewas1.0mL/min.Thedetectingwavelengthwasat274nm.ResultsThemethodwaslinearattherangeof0.052,0.84μ gforPaeonol(r=0.9999).Theaveragerecoverywas99.94%.ConclusionThemethodissimple,sensitive,accurateandcanbeappliedtothequalitycontrolofPaeonolinShenguiTiaojingPill. Keywords:ShenguiTiaojingPill;Paeonol;HPLC 1 参桂调经丸是由党参(炙)、川芎(制)、牡丹皮等多味中药制成的中药制剂,具有温经活血之功效,临床用于月经不调、经前后虚冷腹痛、月经过多。本品收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十四册[1],原标准中无含量测定项。本品处方中牡丹皮具清热凉血、活血化瘀之功,为处方之主药,其主要成分为丹皮酚。笔者参考文献[2]建立了HPLC测定其中丹皮酚含量的方法。通过方法学研究,证明本法准确、灵敏、重现性好、专属性强,可用于本品的质量控制。 1仪器与试药 安捷伦Agilent1100高效液相色谱仪。丹皮酚对照品(批号110708-200506,由中国药品生物制品检定所提供);参桂调经丸(佛山冯了性药业有限公司提供,批号0405002、0111027、0111903、0201001、0211006、0212007)。甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。 2色谱条件 色谱柱:AgilentHypersil-ODS-C18(250mm×4.0mm,5μm);以甲醇-水(70?30)为流动相,流速为1.0mL/min;温度:室温;检测波长:274nm。理论塔板数按丹皮酚峰计算不少于3500。 2 3方法与结果 3.1溶液的制备 3.1.1对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1mL含15μg的溶液。 3.1.2供试品溶液的制备 取重量差异下的本品,剪碎,混匀,取1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精加70%甲醇50mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,33kHz)35min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 3.1.3阴性对照溶液的制备 按处方比例及工艺,制备不含牡丹皮的阴性对照样品,并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。按上述色谱条件,将上述3种溶液各进样10μL,采集色谱图,阴性样品在丹皮酚峰位置无干扰峰。结果见图1。 3 3.2线性关系考察 精密称取丹皮酚对照品约5mg置50mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,再分别精密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL置10mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,各进样10μL,照上述色谱条件测定峰面积。以进样量(μg)对峰面积积分值进行线性回归,得回归方程:Y,9855.792，2066694X,r,0.9999,线性范围为0.052,0.84μg。 3.3精密度试验 精密吸取同一对照品溶液l0μL,按上述色谱条件重复进样6次,丹皮酚峰面积积分值RSD,0.87%。 3.4稳定性试验 取同一份供试品溶液(批号0405002),按上述色谱条件,分别每隔1h进样,丹皮酚峰面积在12h内性质稳定,RSD,0.70%。 3.5重现性试验 取同一批供试品(批号0405002)6份,照供试品溶液制备方法制备,依法测定含量,结果RSD,1.00%。 4 3.6加样回收率试验 采用加样回收法,取已知含量的供试品(批号0405002)9份,每份1g,精密称定,其中3份分别精密加入0.4450μg/mL丹皮酚对照品溶液0.5mL,3份分别精密加入1mL,另3份分别精密加入2mL,混匀,其余按供试品溶液制备方法制备供试液,依法测定,计算回收率。结果见表1。表1回收率试验结果(略) 3.7样品测定 取不同批号的样品,按供试品溶液的制备方法制备,分别取供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪,各进样10μL,用外标法计算丹皮酚含量。5批样品含量测定结果见表2。表2参桂调经丸中丹皮酚含量测定结果(略) 4讨论 来用流动相配制的对照品溶液,测定其紫外吸收光谱,丹皮酚的最大吸收波长为274nm,故确定以此为HPLC的检测波长。 根据丹皮酚的溶解性,选用甲醇、50%甲醇、70%甲醇为提取溶媒, 5 提取方法选择超声处理,结果70%甲醇为提取溶媒提取效果最理想。超声时间选用25、30、35、40min,结果35min提取已完全。 本试验建立的方法简便,专属性及重现性好,结果准确可靠,可用于该制剂的质量控制和分析。 【参考文献】 [1]卫生部药典委员会.卫生部药品标准(中药成方制剂第十四册)[S].1997.97. [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.402. 6