细菌生长曲线-

细菌生长曲线- 实 验 报 告 课程名称:生物工艺学实验 实验名称:大肠杆菌生长曲线测定 专 业:___生物工程__________ 学 号:________ 姓 名:____________ 实验地点:_________________ 实验日期:_________________ [实验目的和要求] 1(了解光电比浊计数法的原理。 2(了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲线的方法。 [实验器材] 1(菌种 大肠埃希菌(E.coli)1~18h液体培养物或菌悬液。或者上次实验诱变得到的菌种。 2(培养基 营养肉汤培养基，生理盐水 3(其它:721型光电比色计、1ml无菌移液管、摇床等。 [实验原理和方法] 原理:细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图得到的曲线。 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个时期。 细菌培养物在生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高。细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度(OD值)，表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进而反映出其相对生长量。 步骤: 1(接种、培养 采用无菌操作技术用移液管向每个100ml营养肉汤培养基的三角瓶中试管准确加入大肠埃希菌悬液3ml，轻轻振荡混匀，另设一空白对照组(不加大肠埃希菌悬液)。 将接种后的9组三角瓶置于摇床上，37?,220r/min，振荡培养。间隔一定时间，即0、1、2、3、4、5、6、7、8、9~18小时后，从摇床上将取下其中一瓶三角瓶培养物(标记时间)，置4?冰箱保存。 2(吸光度测定 每组取9支干净小试管，从不同时间培养菌液中摇匀各取3ml，将大肠埃希菌培养液进行适当稀释，使光密度在0.1~0.65之间，以没有接种的空白对照组液体培养基调零点，在600nm波长，1cm比色杯中依次进行测定OD值。测定从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。 经稀释后测定的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液的实际OD值。 3(绘制生长曲线 以光密度(OD值)为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制大肠埃希菌的生长曲线。 [实验数据和结果] OD值 时间 培养时长 19日 16:300/ 18:302-0.08 20:205.67-0.135 20日 8:5016.170.188 10:1017.50.204 12:1019.50.243 13:2220.70.281 15:3022.830.369 16:3023.830.45 17:5025.160.454 19:3026.830.42 讨论:本次实验结果并不理想，主要有以下几个方面: 1、由于空白对照有可能被污染，含有大量杂菌，在以此为标准进行调零后测得的OD值有几个是负值。 2、由于实验实在下午开始，在前16小时仅取了两次样，前半部分曲线缺乏足够数据 3、OD值的测量分为两批，使用了两台不同的分光光度计，其中上午使用的仪器有一定问题，前4个数据可能有较大误差 4、最后一瓶培养液中发现有大量白色物质，现状类似于鸡蛋汤汤中的蛋花，可能是混入了杂菌，此组数据不可靠，因此特意留做最后一组，以减少对实验影响。 评语及成绩: 教师 (签署)