【doc】慢性阻塞性肺疾病患者气道胆碱能M2受体功能状态

【doc】慢性阻塞性肺疾病患者气道胆碱能M2受体功能状态 慢性阻塞性肺疾病患者气道胆碱能M2受体 功能状态 l58 北京医科大学 JOURNALOFBEIJINGMEDICALUNIVERSITYVol32No2Apt2000 ,rf慢性阻塞性肺疾病患者气道 胆碱能M2受体功能状态 \/ 姚婉贞,刘亚,韩翔,王国扬,柳晓芳,陈亚红'_——,', (北京医科大学第三医院呼吸内科,北京100083) ? [关键词】受体.胆碱能;用力呼吸量;ii阻塞性倩理生理学^12锄为巳(二 [摘要】目畸:了解慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepa】m【?】arydisease,COPD) 患者^受体的功能.方娃: 健康对照组10例,COPD组8倒.所有受试者随机先后进入组织胺气道激发试验一匹罗卡品气道预处理后组织胺 激发试验组和匹罗卡品气道预处理后组织胺激发试验一组织胺气道激发试验组,两次激发试验间隔7d.并划出荆量 一 反应曲线.观察用药前后1S用力呼气量,D血,R值的变化.格亲:正常组匹罗卡品气道预处理后U血增加195% (P<001),COPD组匹罗卡品气道预处理前后FEV1,D,R值差异均无显着性.结论:COPD患者^受体功能 下降. [中图分类号】RM1.5[文献标识码]A[文章编号]1000-1530(2000)02—0158—03 Studyollthechronicobstructivelmlmonarydisease: M2-receptorinpatientswithchronicobstructivepalmonarydisease YAOWma-Zhen,LIUYa,HANXiang.WANGGuo-Yang,LIUXiac~Fang (Del~rtrrmntofRespiratoryMedicine,theThirdHospital,BdjingMedicalUniversity CHENYa-Hong Beijing100083,China) KEYSReceptors,cholinergic;Forcedexpiratoryvolume;Lungdiseases,obstructive/ physiopahol ABSrRAC'I'Objective:ToinvestigatetheMzreceptor(Mz— R)functioninpatientswithchronic obstruetivepalmonarydisease(COPD).Methods:10healthyvolunteersand8patientswithCOPD weDeincludedinthestudy.Theywererandomlydividedintotwogroups:1.BPT(bronchial provokativetest)一BPTafterinhalingpilocarpine;2.Brafterinh~dingpilocarpine— BPT.Therewasa 7-day—intervalbetween,thetwoBPTsThechangeOfFEV1,andRvalueduringpro— pilocarpine andpost—pilocarpinewerecalculated.Results:ninvolunteerswas195%higherduringpost— pilocarpinethanthatofpro— pilocarpine(P<0.O1).FherewasnosignificantchangeofFFVl,n andRvalueinpatientswithCOPDduringpro—pilocarpineandpost— pilocarpine(P>005) Conlasion:TherewasaairwayM2一RdysfunctioninpatientswithCOPD. (JBe~iingMed[Iniv,2000,32:158—16o) 胆碱能神经在调节气道张力方面起重要作用. 气道胆碱能神经功能亢进在慢性阻塞性肺疾病 (chronicobstructivepalmonarydiseases,COPD)的发 病过程中起重要作用_1J,但气道胆碱能神经功能亢 进的机制尚未完全阐明.胆碱能受体在人气道至少 可分为3个亚型即M受体,?【2受体及M3受体. 其中^受体位于胆碱能神经末梢突触前膜,此受 体兴奋可以抑制乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)的释 放,减低ACh与M3受体结合所致的平滑肌收缩, 起反馈保护作ffjc21.因此M2受体功能低下势必引 起胆碱能神经功能亢进.本研究目的是了解COPD 病人气道M2受体功能状态,以探讨M2受体在 COPD发病机制中的作用. 1对象与方法 1.1试验对象 (1)健康对照组:10例,其中男5例,女5例,年 龄(27?6)岁,所有受试者均无吸烟史;(2)COPD ) 一 \,\ 姚豌贞.等慢性阻塞性肺疾病患者气道胆碱能^受体功能状态 组:8例,男6例,女2例,年龄(6o?15)岁,吸烟3 例,不吸烟5例,均符台1997年全国呼吸病学会制 定的COPD诊断J.所有病人均为病情相对 稳定期(即有轻微咳嗽,少量白痰或稍感气短,无发 热,黄痰或气短加重至少2个月或以上)COPD组 1s用力呼气量与用力肺活量比值(forcedexpiratory volumeinO/fiesecondtoforcedvitalcapacity,FEVl/ FVcj大于50%.所有受试者均在6周内无感冒 史,检查前3d停一切平喘药及抗过敏药,2月内未 使用糖皮质激素类药物.所有受试者无心肺功能不 全,高血压及甲状腺机能亢进,妇女无妊娠. 1.2试验方法 所有受试者随机进入以下两组:(a)组织胺气道 激发试验一匹罗卡品气道预处理后组织胺气道激发 试验;(b)匹罗卡品气道预处理后组织胺气道激发试 验一组织胺气道激发试验.两次激发试验间隔7d. 应用6200Aurobox型体积描计仪进行肺功能 测定,采用SmlRosenthal气道反应雾化发生器进 行雾化吸入.匹罗卡品(M:毒蕈碱受体激动剂)45 rag溶于1.8ml生理盐水中,约需10min完成雾化 吸入,组织胺激发试验采用计量法进行,每吸雾化量 00055nag,每吸时间0.6S,质量浓度依次为50, 25,6.25及3.125g?L一,由低剂量向高剂量进行. 1.3结果 由激发试验结果记录每次FEV及组织胺累积 量,画出剂量一反应曲线,由此曲线计算3个参数: (1)基础FE.V(单位I):为吸人生理盐水前3次 FEV1及吸盐水后2次FEV1的均值;(2)反应阈值 (q,单位.umo1):为FEVl呈线性下降时吸入组织 胺最低累积量,反映气道的敏感?性;(3)R值(单位L ?toolI1):为吸人单位组织胺剂量后FEV1下降值, 为组织胺剂量一反应曲线的斜率,反映气遭的反应 性. 1.4统计学分析 所有数据均以三?S示,各组匹罗卡品气道 预处理前后FEVI,DR值比较采用配对t检验 P<0.05视为有统计学意义. 2结果 2.1对照组用匹罗卡品气道预处理前后气道反应 性变化(表1) 表1所见,匹罗卡品气道预处理可使D显着 增大,较预处理前增加195%.说明气道敏感性显 着降低,而FEv1和R值即气道反应性无变化. 2.2COPD组用匹罗卡品气道预处理前后气道反 应性变化(表2) 表2所见,匹罗卡品气道预处理前后,FEVl, DR值均差异无显着性,说明气道敏感性和反应 性用药前后无变化. 寰11O例健康人吸^匹罗卡品前后气道反应性比较(=s) Table1om1Da?nDfairwayreqctivityin10healthyvolunteers duringpre-piloearpi~eandpost-pikratpine(x?s) *P<0.01.OOrl2par~withpost-pibcarplne;V.vdume;n amountofsubstance;n.molarvolume 襄28例慢性阻塞性肺病患者 暧八匹罗卡品前后气道反应性比较(;?) Table2Cganparisonofair'g~yreactivityin8patientswithCOPD dunngprepilocarpi,eandpost-pilocarpine(;=s) FEVL,V/LD,月/,ttrnolR.V/m?nm~ol pre-pilocarpinepost-pilocarpine:P>005:V,me;n arrgxmtofsub~tance:Vm.molar,~lume 3讨论 (J1]患者存在自主神经系统功能紊乱.迷走 神经张力的增加与患者气道痉挛及粘液过度分泌有 着密切关系.胆碱能神经主要是通过M受体和 M;受体引起气道平滑肌收缩和腺体分泌,而M2受 体起反馈性抑制作用一旦M2受体功能低下,势 必导致胆碱能神经功能亢进,发生支气管痉挛. 组织胺可以直接通过兴奋组织胺受体引起气道 平滑肌收缩,也可间接地通过兴奋迷走神经导致 ACh由副交感神经末梢释放而引起气道平滑肌收 缩.本研究观察了选择性兴奋M2受体对组织胺所 引起的支气管收缩反应的影响.结果表明,在正常 人,选择性M2受体兴奋剂匹罗卡品气道预处理可 抑制气道对组织胺的反应性,阈值浓度明显增加,说 明正常人气道Mz受体功能兴奋对组织胺诱发的支 气管痉挛有保护作用.COPD患者匹罗卡品气道预 处理前后气道敏感性和反应性无改变,表明COPD 患者M,受体功能低下. 目前有关COPD患者气道M2受体的研究尚未 见文献报道.Raaiimakers等于1983年对4例 ?PD患者和8例肺功能正常者的外周肺组织M 160 北京医科大学 JOURNALOFBEIIING.MEDICALUNIVERSITYVo1.32No2A.r2000 受体进行放射配基结合研究,发现COPD患者M受 体较正常人减少.本室以前研究结果表明,采用 SCh吸人法建立的COPD大鼠模型.气道和肺组织 M受体数量及功能与对照组差异无显着性.结合 本研究我们分析,COPD患者可能存在M2受体数 量的下降,而M受体和M3受体密度上调.这一观 点还需进一步证实. COPD患者M2受体功能障碍的发生机制尚未 阐明.根据目前的研究结果_4,病毒感染,臭氧, 抗原激发产生的炎性细胞及炎性介质(如嗜酸粒细 胞分泌的主要碱性蛋白和阳离子蛋白,TGF 忡n,[L-l~,IFNy等,免疫球蛋白E等)是引起 气道,受体功能障碍的主要因素,而肝素等多价 阴离子物质可恢复气道^,I2受体的功能_7j气道 Mz受体功能障碍造成胆碱能神经功能亢进.研究 COPD患者^,I2受体功能状态,可为临床上选择性 M受体拮抗剂的应用提供理论基础. 参考文棘 1NicholasJ,C,rc~MD,SkorodinMD,a/Cholinergic bronr~ortoneinCOPD[J]Chest,1989,96:984.987 2MinettePA.BmPJ.Prejuncticaaalinhibitorymu日carnjcreceptors oncholinagkmrvinhumanandguhaeapigairways[J]J却 Physiol,1988,64:2532.2537 3中华医学会呼嗳病学分会慢性阻塞性肺病()诊治 (Jg案)[J]中华结核与呼瑕杂志.1997,20:199203 4RonaldS/,OoughJ.williamL,e/Vir~s-ir,dueedairway obstructionandparasympothedchyperreaLJoasiveaessin丑d山tret[J]. AmJRespirCfitCareMed.1994.150:28-34 5FryerAD,AdsmkoD『,YostRI.a2Effectsofi~tory cells?neurca~Mzmu~a6nicreceptorfunctit~hatheIu_J]Life Sci,1999.64:449-455 6Masak&zaIIncubatic~thgEincreasecholhaergic inhunanairways,m[J].AmRespirCdt CareMed.1996,154:1272.1276 7PardI,Muda~rT.BennettJ,Theeffectofinhaled hep~rin[舶bronchialreactivkyto~diummetabisolphlteand methecholineinpatientswitha}日[J]EurRespirJ.1996.9:217- 219 (1999_03.04收稿) (本文编辑:周传敬王蕾) 4种与胸腺细胞发育相关的小鼠cDNA文库的建立 李燕,王宏,陈慰峰 (北京医科大学免疫学系,北京~00083) 为深入研究胸腺细胞与胸腺基质细胞间相互作用的机 制,我室制备了一系列抗胸腺基质细胞抗体.发现其中的两 株单抗PFi8—3和RS21—05显示出非常有意义的作用.为克 隆上述单抗识别分子的编码基因,我们成功地构建了分别来 自早期T细胞株a20,ConA活化胸腺细胞,胸腺上皮样细 胞株和胸腺树突状细胞株的4个高质量cDNA文库. 收集细胞,应用TRIZOL(gibco)提取总RNA,再用 polyATractmRNA分离试剂盒(pronaega)提取mRNA~采用 Uni—ZAPcDNA台成试剂盒(strotagene),合成双链cDNA,经 酶切处理,将cDNA定向连接在UniZAPR载体上.经包装 细胞包装成为噬菌体.转化宿主XL1—13]ueMRF'细胞,形成 初级文库.初级文库经转化进一步扩增,形成稳定cDNA文 库文库鉴定结果表明,所建文库库容在2×10pfu?ml以 上,含有插入片段的重组克隆占98%以上,平均插入片段大 于1.1kb,初步基因克隆工作已获得阳性结果= 选择a20早期T细胞株和ConA活化胸腺细胞建库是 因为前者有R显1C6识别分子高表达,对克隆参与早期T细 胞发育的分子有利;而后者是PF183识别分子高表达细胞, 有助于此凋亡相关分子的研究.选择胸腺上皮样细胞株和 胸腺树突状细胞株是因为它们代表两类不同的胸腺基质细 胞,并且这两个细胞株在既往的研究工作中显示出对胸腺发 育的许多不同作用.本研究利用Uni—ZAPXR载体系统建立 的噬菌体cDNA文库既可用于抗体克隆筛选,也可用于核酸 探针杂交筛选,为今后的基因克隆工作提供了更广泛的用 途.在建立高质量cDNA文库的基础上,用RS21C6McAh 从C320cDNA文库中克隆出该抗体所识别的抗原分子编码 基因,经Gent3ank查询为新基因.最近其全长cDNA序列已 被确定,并为Genl3ank所接受(另文报遭).其它新基因的筛 选和克隆工作正在进行之中. (1999.07-20收稿) (本文编辑:王营)