实验 血药法测定扑热息痛片的生物利用度[1]

实验 血药法测定扑热息痛片的生物利用度[1] 实验二 血药法测定对乙酰氨基酚片的生物利用度 一、实 验 目 的: 1 掌握血药法测定固体口服制剂生物利用度的原理及方法。 2 掌握药动学参数的求算。 3 熟悉生物利用度在药物评价中的意义。 4 了解血清生物样品的处理方法。 二 、仪 器: 1(仪器: 具塞离心管10ml 3支;20ml 16支; 刻度吸管1ml 1支;5ml 3支;10ml 1支; 滴管2,3支; 玻璃漏斗3,4cm直径8个;5ml塑料离心管8支; 紫外,可见分光光度计 其他:滤纸、试管架、刀片、塑料夹、酒精棉球、脱脂棉、注射器、注射针头、兔盒等物件。 2(试药: ?0.12N氢氧化钡溶液:取分析纯氢氧化钡19克，加新鲜煮沸放冷的蒸馏水溶解并稀释至1000 ml，静置过夜，过滤即得。 ?2%硫酸锌溶液:取分析纯硫酸锌20克，加蒸馏水溶解并稀释至1000ml即得。 三 、实验内容: 1( 家兔空白血的采集: 取体重3kg左右家兔一只，心脏取血约30ml，于10ml具塞离心管中，37?水浴中保温1小时，以5000转/分的转速离心10 min，取空白血清供曲线制备用。 2( 标准曲线的制备: 精密称取扑热息痛对照品50mg，置100ml容量瓶中，以蒸馏水溶解，并添加至刻度摇匀，精密吸取10ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度摇匀即成100µg/ml的标准溶液，分别吸取1中“标准液取量”于20ml具塞试管中，分别加定量蒸馏水使成10ml，然后各加上述血清1ml混匀，再各加0.12N氢氧化钡4.5ml，混匀，放置2分钟，再分别加入2%硫酸锌溶液4.5ml，混匀，即现出明显乳状浑浊，用双层滤纸过滤，去初滤液，收集续滤液于10~15ml干燥具塞试管中，以1号管溶液作空白对照，于245nm处测定吸收度(A)，结果记录于表1。 3(家兔体内血药浓度的测定: ?血样品的采集: 取体重3kg的健康家兔一只，实验前二天下午禁食，实验当日晨耳静脉取血4ml，作为空白，然后即口服给予扑热息痛片，剂量为500mg/只，在给药后0.25、.50、1、2、3、4、5小时耳静脉采血4ml，供测定血药浓度用，喂药4小时后可以喂食，采血时间于表2。 ?血药浓度测定: 将采取的血样按前空白的处理方法处理后，精密吸取血清1 ml，加蒸馏水10ml，余下按标准曲线制备中“……再各加0.12N氢氧化钡溶液4.5ml”起进行操作，测得值记于表2。 The rectification measures: (LED Leadership: Luo Mingjun, rectification time: before September 25th, 1, long-term adherence) to solve the problem of lack of awareness of the harm of Party cadres the "four winds". To further strengthen education and guidance on the implementation of the central eight provisions, the provincial nine provisions of the county committee of the "ten provisions" extensive publicity, eliminate thoughtBarriers 表1 标准曲线测定结果 管 号 1 2 3 4 5 6 7 8 标准液取量 (ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8 血药浓度C (μg/ml) 0 40 80 120 160 200 240 280 HO (ml) 10 9.6 9.2 8.8 8.4 8.0 7.6 7.2 2 吸收度A 表2 血药浓度测定结果 兔重: 给药量: 给药时间: 编 号 0 1 2 3 4 5 6 7 采血时间 时间t (h) 空白 0.25 0.5 1 2 3 4 5 A值 血药浓度C (μg/ml) lgC 四、实验结果及数据处理: 1(标准曲线的回归分析及绘制: 以表1中吸收度A对标准曲线中血药浓度C直线回归，求得直线回归方程 A = a + bC，并计算相关系数r 。 以A为纵坐标，C为横坐标绘制标准曲线。测得样品A值，代入回归方程，计算出C值 A,a C, b 2(药时曲线的绘制: 表2中的实验数据，以浓度C对时间t作图，即得药物浓度经时变化曲线。 3( 消除速率常数k的求算:文献载扑热息痛的体内过程系一室模型，血管外给药一室模型动力学方程的解为: ,kt,ktaC,A(e,e) ? kFXa0A,其中 ，，Vk,ka ,ktae假设k>k，当t充分大时，?式中首先趋向于零，而可忽略，故?式可改写为: a ,kt C,A, ? e The rectification measures: (LED Leadership: Luo Mingjun, rectification time: before September 25th, 1, long-term adherence) to solve the problem of lack of awareness of the harm of Party cadres the "four winds". To further strengthen education and guidance on the implementation of the central eight provisions, the provincial nine provisions of the county committee of the "ten provisions" extensive publicity, eliminate thoughtBarriers ?式两端取对数: klgC,,t，lgA ? 2.303 用药时曲线中尾部近似于直线上的3点，即尾部数据，代入式?作直线回归，求出系 数: a =,,,,,, b = ,,,,,, -1则:k =,2.303 b A = Lg a 4( 半衰期t的计算: 1/2 t= 0.693/k 1/2 5( 药时曲线下面积AUC的计算: ?0? 将表2中时间t和浓度C代入下式即可求出AUC?0? C1nAUCCCtt,[(，)(,)]，,0,,(,1)(,1)aaaa k2 6(扑热息痛片相对生物利用度计算: 若已知扑热息痛片某一标准制剂(如半合成脂肪酸脂)的AUC=1093(μg)h)?0?-1ml)，则用下式可计算出扑热息痛片的相对生物利用度: AUC0,,样品F,，100%rel AUC0,,标准 五 思考: 1 血药法在生物利用度研究中的意义。 2 本实验血清样品处理的特点。 3 生物利用度在新药评价中的意义。 The rectification measures: (LED Leadership: Luo Mingjun, rectification time: before September 25th, 1, long-term adherence) to solve the problem of lack of awareness of the harm of Party cadres the "four winds". To further strengthen education and guidance on the implementation of the central eight provisions, the provincial nine provisions of the county committee of the "ten provisions" extensive publicity, eliminate thoughtBarriers