【doc】基因工程人干扰素—α2a抗柯萨奇病毒的实验研究

【doc】基因工程人干扰素—α2a抗柯萨奇病毒的实验研究 基因工程人干扰素—α2a抗柯萨奇病毒的 实验研究 苏州医学院1999;19(4)/, '{,361 j7r,(牛) 6/J多基NT程入干扰素一以a抗柯萨奇病毒的实验研究 ?t2,3 院生物技栅耋拿/了?/215007)7苏州医学院生物技术研究所(二二等,一兰.亨.吕海 涛李丽娥董宁征,?' 罗扰素在Wish细咆上500IU/ml可以抗3io4,50IU/ml可以抗2log4,5lU/ml可以抗 1【og4何萨奇病毒的效应. 茎蓉糯于中图法分类392_j33Cox3. 治疗病毒性感染中,干扰素是目前公认的首选药物.市 售干扰素品种,如a,8,7和人白细胞干扰素等多种,a型干扰 素又存在Ctlb~a:,a:等多个亚型,同时又有各种品牌. 我们在体外进行了不同来源基因工程干扰素一o2a(IFN — o2a)抗柯萨奇病毒(CoxB3)的研究.如下. 1材料和方法… 1.1材料:何萨奇病毒133(Nancy侏,由上海医科大学中山 医院杨英珍教授提供),在Wish细胞上繁殖,并在Wish细胞 上用微量TCID50法测定.其效价TCID5o为4一.人羊噗 (Wish)细胞,为本室保存.用含10%小牛血清的RPMI1640 传代培养.基因工程人IFN一a:万复洛为3×10IU/支, 上海万兴生物制品公司采用酵母发酵法纯化制备(批号为 980518);罗扰素为3×10IU/支,上海罗氏制药公司分装瑞 士产品(批号为2191954). i.2方法 i2.1干扰素效价统一标定:干扰素效价测定采用vsV病 毒在Wish细咆上的半量病变抑制法,结果用国家干扰毒卞示 准品(【94】卫生标字0025)进行统一校正后使用. 122微量细胞病变抑制法抗柯萨奇病毒实验:在96孔板 上,将不同浓度(500.50和5IU/m1)的上述两种IFN—o2a各 50"1.分别加入至50bdWish细胞悬液中.37?,5%cch培养 6h.在加入不同滴度(4,,4.)的Coxg3病毒100I/:iL,继 续培养,观察细胞圆缩,脱落,破裂的CPE.每个稀释度均设 复孔,同时设有病毒对照,细胞对照组.待细胞对照正常,病 毒对照在4病毒稀释度的CPE达(++)时.观察不同浓度 干扰素组的病毒效价,并判定上述两种IFN—o2a的抗柯萨 奇病毒作用. 2结果 在Wish/Vero/Wl一38/Hela/Has五个细胞对CoxB3病 毒的敏感性比较中,发现Wish细胞和Vero细胞最敏感,鉴 于Wish细胞为人源性.故我们选用Wish细胞进行了干扰素 抗柯萨奇病毒的实验研究,其结果见附表. 结果表明,国产万复洛IFN—a2a和瑞士产罗扰素IFN — a2a一样在Wish细胞上500IU/玎d可以抗3log4.50IU/玎d 可以抗2log4.5Iu/玎d可以抗?og4TCID50的柯萨奇病毒 感染细胞,这两种基因工程IFN—o2a在Wish细胞上抗柯萨 奇病毒的效果一样.经本实验效价测定,这两种基因工程 IFN—a2a不仅出厂所标定的效价与本室测定的结果一致, 附表万复洛和罗扰索基因工程IFN—o2a抗 柯萨奇病毒效应 而且溶解后于4?存入1个月后效价也基本稳定.说明制品 内保护剂对干扰素起了保护作用.但稀释看效价不稳定.不 宜长时存放.此外,反复冻融后干扰素效cfr下降明显.使用 时对此应加以注意. 3讨论 柯萨奇病毒常导致呼吸道感染,畅道感染,无菌 性脑膜炎,心肌炎,心包炎等,也是诱发先天性心畦 病的高危因素之一].小儿和青壮年易感,且多累 及心脏?引.约20%的病毒性心脏病由柯萨奇病毒 引起,病毒性心肌炎中病毒持续感染可发展为扩张 性心叽病【. 国外干扰素抗柯萨奇病毒的研究多限于人白细 胞干扰素的实验研究【6.8].近年证实,人白细胞干 扰素抗柯萨奇病毒效应优于进口基因工程干扰 素】.我们的实验从细胞水平证实,在基因工程 IFN一a中,国产万复洛和瑞士罗扰素抗柯萨奇病 毒感染的能力无明显差异.此结果为干扰素治疗柯 萨奇病毒病提供依据,且为临床使用国产干扰素提 供参考. 参考文献 1汤建平,等.羧甲基茯苓多糖对人外周血淋巴细胞分泌a — IFN和7一IFN的调节作用及中间体制备.中国生比 (下转第363页) 苏州医学院1999;19(4) Vp18 . . VB51' 囊嚣j:.,': . ?黟 vii20 FL1 可 呈 n 呈 N 2 u_ 一 2 0 42 tube4 vii5.3 VB7 ? ? . ' . 谚Vii3 FL1 一 2 0 0 4一 tube2 Vlj9 Vn17 : 嚣'? ?, --- ' ,蠢一?-? :0VB16 FL144 tube5 VB52 Vp2 ' ? - , , d, 瓣"尊V FL1 4 q 附图21种特异性VB单抗7组 ,可以检测63.6%的TCR.~基因参考文献 抗,科学地分为7组 库水平,具有简便,快速,特异性等优点,易于在临床 1MarialuisaSensiandGiorgioParn~iani?AnalysisofTCRUS? 实验室中推广应用.同时,检测了20例正常人外周g"humrs姐nesseSsg?orpec" 血TCR基因re#g7k~.',建立了正常值,为临床提供im"p."s?n.l_OgyT.y,9': 了参考.2~T- … ce log llreg T enerat , ion:allrepertoarenot 1998年lI (上接第361页) 药物杂志,1998;19(2):69 2陆德源,主编医用微生物学北京:人民卫生出版社, l996 3CoxsackieBVirusinfectionduring1965.AreporttOthedi一7 rectorofpublichealthlaboratory'servicefromvariouslabora— toriesintheUnitedKingdom.BrMedj,1967;4:575 4湖北沙市卫生防疫站,等.一次急性心肌炎暴发.中华医8 学杂志,1980;60:345 5C,onaldiPG,eta1.PersistentinfectionofhumanvascLl1aren. dothelialceHsbygroupBCox~ckievirUSes. JInfectDis. 1997;175(3):693 6KishimotoC,eta1.Pre,'entionofmurineC,~xsackieB3Vira1 30Et收稿) myocarditisandassociatedlymphoidorganatrophywith re. combinanthumanleucocyteinterferonalphaA/DCardiovac Res,1998;22(10):762 YangYZ?DykeJV,,EffectofhumaI1leukocyteinterferonon Coxsackie,'irusinfectedra1bea~ingheartce11sIncu1ture_ ChungKuoYaoLiHsuehPao, 1985;6(2):102 HeimA?etalCulturedhumanmyocardia1fibroblastsofpe- diatricoriginnaturalhumaninterferon—alphaismo reeffec. tlVethanrecombinantinterferon—alpha2aincarrier—svate Coxsackie,irusreplication. JMolCellCardio1.1995:27 (10):219 (1998年10月6日收稿) .一n.一I]I_.一..一2