磷脂酰丝氨酸（PS）抗H

磷脂酰丝氨酸（PS）抗H 磷脂酰丝氨酸(PS)抗H 磷脂酰丝氨酸(PS)抗H 氧化是造成脑功能障碍,记忆力降低和形成老年性痴呆的诱因之一。磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)具有增加记忆、抗老年性痴呆的作用。PS是通过抗氧化发挥其作用的吗?本论文以动物脑和海马神经元为实验材料验证PS的抗氧化作用。 1、动物脑组织中PS的薄层分离测定以(VC氯仿):V(无水乙醇):V(三乙胺):V(水)=10:1 1.3:1 1.7: 2.7为展开剂,以0.3%的溴百里香酚水溶液(P?7)作为显色剂,对四种动物(牛、羊、鸡、鱼)脑组织中磷脂成分进行了薄层层析分离和扫描定量,每100g磷脂中PS的含量分别是20.5g,19.3g,1 8.7g,1 7.0g,该法分离,显色效果好。 2、动物脑PS的提取、分离、纯化采用有机溶剂萃取法,用9-12倍量的丙酮去除脑中95%的胆固醇,采用乙醚(或正已烷)从脑中提取99%的总磷脂,按乙醚液:Na2CO3溶液(PH=10)=1:1,4,搅拌均匀,二次冷冻,二次静置分层,底层的黄色溶液即为PS,经薄层分析检验知为单一成分。 3、动物脑PS的脂肪酸种类分析对上述四种动物脑提取的PS分别进行甲酯化、然后用GLC分析,结果:冷冻干燥原料提取的PS比烘干脑原料提取的PS含更多的不饱和脂肪酸,四种动物脑均含有饱和脂肪酸(14:0,18:0),单不饱和脂肪酸(16:1,18:1),n-3多不饱和脂肪酸(18:3n,20:5n,22:5n,22:6n)和n-6多不饱和脂肪酸(18:2 n,20:2 n,20:3n,20:9 n,22:4 n,22:5 n),而以鱼脑中多不饱和脂肪酸为最高达5 2.24。 4、PS抗H2O2引发的鼠脑功能障碍有关记忆和脑功能障碍的研究人们普遍接受Morris(1984)的水迷宫实验。以Wistar雄性幼鼠为实验动物,动物分为8组:空白对照(A)组;15mg H2O2/kg/次/天(B)组,30 mg H2O2/kg/次/天(C)组,和30 mg PS/kg/次/天(D)组。和二个组先分别给15 mg H2O2/kg/次/天(E)组,30 mg H2O2/kg/次/天(F)组,6h后依次分别给同量的PS。另二个组先给15 mg PS/kg/次/天(G)组和30mg PS/kg/天(H)组,6h后依次分别给同量的H2O2,H2O2和PS稀释成0.3ml左右,腹腔注射,实验结果如下: ?D和A组相比,D组游泳时间最短(P0.05),距离最短(P0.05)。B、C和A组相比,B、C组游泳时间最长(P0.01)游泳距离最长(P0.01) E、F、G、H各组和A组相比,游泳时间较长,距离较长(P0.01)。 ?HE染色后观察海马细胞。根据Satoru,等(1999)的死亡细胞分级(%)级别,A、D组为1级,B、E、F、H各组为2级,C组为3级。 ?鼠脑中成分的变化 (1)脂褐素含量(u/g组织)A组219.2? 7.5,C组42 2.6?8 7.2,B、E、F、G、H组脂褐素含量在249.8?8 2.5和34 3.6?7 2.3之间。而D组为9 3.7?3 8.5,表明了H2O2的氧化作用和PS的抗氧化作用。 (2)MAO-B活化,A组为45,C组为100,D组为35。B、E、F、G、H各组在29-72之间,表明H2O2能引起脑单胺氧化酶升高,PS能降低单胺氧化酶的活性。 (3)Ach含量。A组为1 4.3? 3.22,C组为 8.76? 1.88,D组为1 7.89? 3.71。B、E、F、G、H各组Ach在1 1.56? 2.13到1 4.3? 3.22之间。表明H2O2能降低Ach含量,PS能升高Ach含量。 5、PS抗H2O2引发的鼠海马神经元凋亡新生大鼠(24h内)的海马神经元,加入 1. 5、15,150mg/L的PS预保护细胞24h后以10-2g/L H2O2刺激24h取样测定细胞凋亡率。分别为2 7.17? 2.05,1 6.17? 2.21和3 7.17? 2.45。表明了PS的抗凋亡作用。用Confocal测细胞内Ca2+浓度,分别为 4.03? 1.24,2 4.50? 2.12和-(15? 3.02)表明PS影响神经元的Ca2+浓度,但过高浓度可能有损害作用。本论文创新点: 1、从动物脑组织提取分离,纯化PS的方法和薄层分析方法。 2、从水迷宫实验及其鼠脑成分分析,H2O2能够造成脑氧化损伤。PS能抗H2O2引发的鼠脑受氧化损伤形成的功能障碍。 3、PS能抗H2O2氧化引发的海马神经元凋亡,这种拮抗作用与Ca2+有关。 中文摘要6-8英文摘要8-10名词缩写10-11第一篇 文献综述磷脂酰丝氨酸(PS)研究进展11-45第一章 神经细胞中PS 的合成与代谢11-29第一节 神经细胞中PS 的合成11-15第二节 神经细胞PS 的代谢15-17第三节 PS 在神经细胞信号中的作用17-29第二章 PS 在细胞生物学中的作用29-41第一节 PS 对脑和神经细胞的影响29-32 1、对脑神经递质通路的作用29-30 2、对动物学习过程的影响30-3 1 3、对中枢电生理活动的影响31-32第二节 PS 在细胞凋亡中的作用32-4 1 1、凋亡中的PS 的外翻32-34 2、PS 外翻和磷脂不对称性的破坏和凋亡细胞的吞噬是必需的34 3、PS 与凋亡细胞的识别与清除34-41第三章 PS 的应用41-45第一节 PS 的临床应用41第二节 PS 的其他方面的应用41-45 1、PS 在制备脂质体中的应用42 2、模仿凋亡小体的作用42-43 3、PS 可作为乳化剂43 4、用于抗代谢紊乱制剂的制备43-45第二篇 研究论文45-115第一章 动物脑PS 的提取纯化及鉴定45-64第一节 动物脑组织中 PS 的薄层分离测定45-5 1 1、引言45 2、材料和方法45-47 3、结果47-49 4、讨论49-50 参考文献 50-51第二节 动物脑 PS 的提取分离纯化51-60 1、引言5 1 2、材料和方法51-52 3、结果52-56 4、讨论56-58 参考文献 58-60第三节 动物脑 PS 的脂肪酸种类分析60-64 1、引言60 2、材料和方法60 3、结果60-62 4、讨论62 参考文献 62-64第二章 PS 抗H_2O_2引发的鼠脑功能障碍的研究64-88第 一节 水迷宫实验64-77 1、引言64 2、材料和方法64-66 3、结果66-74 4、讨论74-75 参考文献 75-77第二节 PS 抗H_2O_2氧化引发的鼠脑中成分变化分析 77-88 1、引言77 2、材料和方法77-80 3、结果80-82 4、讨论82-84 参考文献 84-88第三章 PS 抗H_2O_2氧化引发的大鼠海马神经元凋亡的研 究88-115第一节 大鼠乳鼠海马神经元的原代培养88-9 1 1、引言88-89 2、材料和方法89-90 3、结果90 4、小结90-91第二节 PS 抗H_2O_2氧化引发的海马神经元凋亡 91-115 1、引言91-93 2、材料和方法93-95 3、结果95-112 4、讨论112-113 参考文献 113-115发表论文和授权的专刊 115-116Abstract116-130Acknowledgements130-133致谢133