【doc】HPLC测定栓剂中甲硝唑和氟哌酸的含量

【doc】HPLC测定栓剂中甲硝唑和氟哌酸的含量 HPLC测定栓剂中甲硝唑和氟哌酸的含量 ? 药品检验? 7—7 HPLc测定栓剂中甲硝唑和氟哌酸的含量j,五7.2 ' 第三军压大学西南医院药荆科(重虎63..38)刘松青马文考/唐先哲孑J勇李静 摘要采用高鼓液相色谱法,以氟嚏酸为内标,在Bodapakc柱上,甲醇一磷酸盐缓冲液(25 :75)为流动相,其中含10mmol/LTBABr,llmmol/LHjPO4,J5mmol/LKH:PO1,pH一2.75,流速为 l_4ml/m[n,检测波长为278nm,洲定了拴荆中甲硝唑和氟豫酸含量.甲硝唑和氟哌醴的回收率分别为 101.6?0.7和100.7士1.2.末方法可用于栓荆的质量控制. 关键词里堕兰;墨墅};兰型;HPIc,i旅涤訇色 含甲硝唑和氟哌酸的阴道栓剂是我院治疗 妇科疾病的制剂,对细菌性阴道炎,滴虫性阴道 炎有较好疗效.栓剂中的甲硝唑和氟哌酸的测 定除受基质干扰外,相互之间也有干扰,难以用 非水滴定和紫外分光光度法测定其含量作者 采用高效液相色谱法,测定了栓剂中两种药物 的含量.本方法选择性好,灵敏,简便,结果准 确,为栓剂的质量控制提供了依据. 1仪器与试药 Waters810液相色谱仪,包括510泵,484 可变渡长紫外检测器,Baseline810计算机控 制及处理系统.色谱柱为~-BondapakC.柱 (3.9mm×300mm,10t~m). 甲硝唑(天津河北制药厂);氟哌酸(西南制 药二厂);氟啶酸(西南制药一厂);四丁基溴化 铵(TBABr)(纯,上海试剂一厂);甲醇为 色谱纯,磷酸,磷酸二氢钾均为分析纯. 2方法和结果 2.1色谱条件试验 在流速1.4ml/min,柱温31,32?,检测 波长278nm.灵敏度0.05AUFS,进样量20vl 时,在甲醇一磷酸盐缓冲液(25:75)体系中;考 查了改变TBABr浓度,甲醇比例及pH对甲硝 唑,氟哌酸及内标物氟啶酸容量因子k的影 响. 2.1.1流动相中TBABr浓度变化的影响:在 甲醇一磷酸盐缓冲液(25z75)体系中,只改变 TBABr浓度,各溶质容量因子k与TBABr浓 1994年12月幂29卷第12 度的关系如图l. 二=二二 翔1TBABr壤鹱的晕;:自 一 甲硝唑:×一氟哌酸}?一内标物 甲硝唑以正离子形式存在,不能与TBABr 形成离子对,故受TBABr浓度影响小.TBABr 10mmol/L范围内,流动相中 浓度在2.5, TBABr浓度较低,随着TBABr浓度升高,其在 固定相的吸附量上升.氟哌酸和内标物容量因 子k随之下降{而在lO,30mmol/'1范围内, 流动相中TBABr浓度较高,固定相吸附之 TBABr已趋于饱和,故k变化较小.. 2.1.2流动相pH值变化的影响:在甲醇一磷 酸盐缓冲液(25:75)体系中,用磷酸和氢氧化 钾调节流动相pH值,得各溶质容量因子k与 pH值的关系如图2. pH值改变对碱性化台物甲硝唑影响小. 对氟哌酸和内标而言,pH>5.75时,由于在 pH值处于低范围fpH<pKa)抑制了羧基的离 解,阻止了离子对的形成.k随pH值的增加呈 ??21525{255一Z56.25 /pH . 甲唑;×氟哌酸;?一内标物 缓慢上升的趋势;当pH>5.75时.pH>pKa, 羧基离子化趋势增加,促进了离子对的形成, 现为k值的急剧上升. 2.1.3流动相中甲醇比例变化的影响:在甲醇 一 磷酸盐缓冲液体系中,改变甲醇比例,得各溶 质容量因子k与甲醇含量关系如图3. 1j\\\35 \\M?H\ 图3甲醇比例的影响 一 甲硝唑F×氟哌酸}?内标物 甲硝唑离子化程度较大,容量因子k较 小,故受甲醇变化影响较小.氟哌酸和内标物随 甲醇浓度增加,溶质在流动相中的分配增加,容 量因子k呈明显下降趋势. 从以上实验结果,按分离的要求,找们选择 了流动相的参数:甲醇一磷酸盐缓冲液(25; 75),其中含10mmol/LTBABr,1lmmol/L HaPO{,15mmol/IKH2PO{,pH=2.75.在该色 谱条件下,甲硝唑,氟哌酸和内标物分离良好, -738? 结果见图4. 图4栓剂色谱雪 1甲硝唑}2内标物F3氟哌酸 2.2标准曲线制备 2.2.1对照品溶液的制备:精密称取甲硝唑和 氟哌酸适量,用0.01mol/L盐酸溶解,制成浓 度分别为200#g/ml和100/xg/ml的溶液. 2.2.2内标溶液的制备:精密称取氟啶酸适 量,用0.01mol/L盐酸溶解,制成浓度为 100/xg/ml的溶液. 2.2.3标准曲线的制备于10ml量瓶中,加 入0.5ml内标液,再分别加入甲硝唑和氟哌酸 对照品溶液各0.1,0.3,0.5,0.7,0.9,1.1.1.3 ml,加0.01mmol/L盐酸至刻度,摇匀,进样 201,分别读取峰面积比,用最小二乘法得回归 方程如下: 甲硝唑:c一5.332x一0.7797(r=0.9995) 氟哌酸:C一2.288X一0.0807(r=0.9995) 线性范围分别为:甲硝唑2.0,26.0 /~g/ml,氟哌酸l_o,l3.0~g/ml. 2.3样品处理 取栓剂10粒,精密称量,在水浴上温热熔 化.在不断搅拌下冷却至室温,精密称取适量 (约相当于甲硝唑140rag,氟哌酸70rag),置于 500ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸400ml,在50 , 60"C水浴中振摇,使药物溶解后取出,冷至室 温,置冰浴中冷却40rain,取出放至室温,加0.1 mol/L盐酸至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,精 密量取续滤液0.5ml置10ml量瓶中,加入内 标液0.5ml,用0.01mol/L盐酸稀释至刻度,摇 匀,即可进样. 2.4回收率试验 按处方比例精密称取1粒栓剂的基质,甲 硝唑和氟哌酸,熔化,制成模拟栓剂,分别配制 1994年l2月第29眷幂12 5粒,分别置于50oral量瓶中,照"样品处理项 下操作.进样2次,每次20I,分别计算出药物 与内标物峰面积比,按相应回归方程计算其含 量,求得回收率.甲硝唑回收率为101.6, RSD=0.7%(n一5);氟哌酸回收率1O0.7%, R.D—1.2%(n一5). 2.5重现性及稳定性试验 配制甲硝唑和氟哌酸混合梯度溶液(均含 内标液0.5m1),重复进样10次,根据峰面积比 求出含量,计算相对标准偏差,甲硝唑小于 1.3,氟哌酸小于1.5.上述样液于8?冰箱 中,连续测定2d,每次进样3次,计算相对标准 偏差,甲硝唑小于-1.8%,氟哌酸小于2.1,表 明样液2d内稳定,能满足分析的需要. 2.6检测眼前的测定 在本实验条件下,当信噪比R/N=3时,甲 硝唑和氟哌酸的检测限量均为]ng 2.7样品测定结果 取2个批号的栓剂,按"样品处理"项下操 作,进样,测定栓剂中甲硝唑,氟哌酸含量结果 见附表. 附表栓剂中甲硝唑和氰暖酸音量 (标示量百分含量=ks%,一3) 3讨论 3.1离子对试剂选择 试用了阳离子型和阴离子型离子对试剂进 行分离;当使用阴离子型离子对试剂时,如 SDS受其溶解度的限制,要求流动相中甲醇的 比例较高],使甲硝唑出峰太早,影响结果.阳 离子型离子对试剂用了TBABr和十六烷基三 甲基溴化铵,使用后者时,虽能较好分离,但由 于烷基碳链较长,平衡时间太长".,不适于快速 分析.故选用TBABr 3.2检测条件选择 在以流动相作介质时,甲硝唑和氟哌酸是 大紫外吸收波长分别为316nm和278nm.当选 用278nm为检测波长时,甲硝唑和氟哌酸检测 限量均为Ing;当选用316nm检测波长时,甲 硝唑灵敏度有所提高,但氟哌酸灵敏度大大下 降.固制剂中氟哌酸含量较低.故选定278nm 为检测波长. 参考文献 lBarthaA.VighG.Studyinionpairchromatography日. Retentionofpositiveandnegativeionandneutralsolutes inteti'ahuty]anlnlontuD2bromide—containingmethan0】 tere]uentsonI.ichrosorbRP一】8.JChromatogr.1983,265 ' I171. 2邹设怯,张玉奎,占佩章.与离f对试剂电荷相同时溶质和 中性溶质的保留值变化规律式的验证.色谱,1992,10(1) :I_ 3LowGKC,IMrthaA,Bi]lietAH,eta】.Stemtlcproce— dureforthedeterm[aation0fthe[Latuolthelu0es口r ortotheelectionofthemobilephaseparametersf.r opthimizationofre~rsed—pseion-pMrchromatographic separetions.JC^"mr,19fl9,478;21. |SchoenmakersPJ.Optimiza2ion0fChr~togra甜dcSelec— t1.ity.Aguide,~th0dm,n,_Amsterdam:Elsev er.1986:99 5BarthaA,VighG,BilhetAH.eta1.Studiesinreversed— phaseion—pairchromatography.?.Thero!eofthechain lengthofthepairingion.JChr~togr,1984,303I2P. (收稿:19?3—12--06) Determinationofmetronidazoleandnorfloxaeininsuppositoryby HPLC LIUSong—qing?MAWen—xiu.TANGXian—zhe,SUNYong,LIJing(Depart珊 ,ofPhar~y,South westHospital,ThirdMilitary.~IadicalCollege?Chongqing630038) ABSTRACTAHPLCmethodwasestablishedf.rdeterminingtheconcentrationsofmetroni da— zoleandnorfloxacininsuppository.A~,-BondapakC】Bcolumn(3.9ram× 300ram,10gin)wasused withamobilephaseofmethanol— phosphatebuffer(25l75),whichcontainslOmmol/LTBABr, I994年12月第29卷第12期?'鸽 llmmol/IH3PO,15mmol/LKH2P0}andpH=2.75.Theinterna1standardwasusedas enoxacin.Theflowratewas1_4mI/rain.AUVdetectorat278nmwasused.Theretentiontimes ofmelronjdazo1enorfloxacinandinterna】 standardwere3.88min,7.10minand5.50rainrespec— tively.ThestandardcurvesofmetronidazoleandnorfloxacinwereIinearintheratlgefrom2.0 to 26.0tLg/ml(r一 0.9995)and1.0tO13.OtLg/ml(r-0.9995)respectively.Theaveragerecoveries were101.6?0.7(metronidazole)andi00.7?1.2(norfloxaein).Thismethodisrapid, sensitiveandspecific.Itissuitableforqualitycontrolofthesuppositorycontainingmetronida zole andnorfloxacin. KEYWORDSHPLC,metronidazole,norfloxacin,suppository 一 阶导数紫外分光光度法测定 乙酰螺旋霉素片剂含量R 锦州市药品检验所(锦州l2l...)李莉侯凤李卫国 7.2 7乒f 摘要采用一阶导敷光谱法测定乙酰螺旋霉g-片荆的合t-,平均回收率为 100.63,RSD为 0.47%(n--6),亏法简便,快速.可消陈赋开j荆干扰,适用于乙酰螺旋霉素的片剂洲 定. 关键词=堕生坠坚堂.兰羔童 己酰螺旋霉素片剂系大环内酯类抗生素药 物,其含量测定采用微生物法[中华人民共和国 卫生部部颁药品标准(试行).1989年版].操作 繁琐,费时,测得结果重现性不好,误差大,现采 用一阶导数法.操作简单,方便,结果可靠,且可 消除赋形剂的干扰. 1仪器与试药 岛津uV一240紫外分光光度计(日本);乙 酰螺旋霉素对照品(辽宁省药品检验所.批号: 910401,效价:1231单位/mg);乙酰螺旋霉素3 批(市售品,批号:911114,920220.930203). 2方法与结果 2.1导数光谱测定条件试验 2.1.1一阶导数光谱的测定:精密称取乙酰螺 旋霉素对照品适量.制成浓度为20~g/m1的溶 液,并按乙酰螺旋霉素片剂处方配制赋形剂溶 液与模拟片剂溶液于190~260nm波长范围内 测定一阶导数光谱(附图).由附图可见赋形剂 的一阶导数光谱与基线重台.因此利用一阶导 ?74g? 数法可消除赋形剂的干扰. 190Z6Ohm 附图一阶早数光谱雷 a,乙酰螵旋霉素片荆.b一赋形荆 2.1.2测定条件:根据附图选择210nm(峰) 与238nm(谷)为测定波长,以这两个波长峰, 谷问的距离——导数振幅值D为定量依据.测 定方式:ABS,上限0.4.下限一0.4;扫描速度: 快速}狭缝:lnm;Ak--4nm;扩展:5. 2.2标准盐线的测定 精密称取乙酰螺旋霉素标准品约20mg, 1994年12月第29卷第12