一种植物来源的糖蛋白具有肿瘤抗原性的研究_NoRestriction

一种植物来源的糖蛋白具有肿瘤抗原性的研究_NoRestriction 经典论文 博硕论文 论文 河北医科大学 硕士学位论文 一种植物来源的糖蛋白具有肿瘤抗原性的研究 姓名:高峰 申请学位级别:硕士 专业:外科学 指导教师:王增林王瑞 20040301 硕 士 论 文经典论文 博硕论文 论文 中文摘要 一种植物来源的糖蛋白具有肿瘤抗原性的研究 摘 要 目的:肿瘤作为一种长期威胁人类健康的疾病，目前尚 没有早期诊断及治疗的有效手段。近,,年来，基础免疫学 的发展，特别是新的研究方法的出现，使人们能够有效的筛 选肿瘤抗原，为肿瘤的早期诊断及免疫治疗提供了一个新的 思路。但这些抗原多属自身抗原，普遍存在免疫原性低，易 引起免疫耐受等缺陷。根据生物进化理论:自然界的生物在 由低级向高级特种进化的过程中，不同种属的同类基因现 为一定的同源性，而且种属之间的同源关系越远其免疫原性 越强。所以我们设想可以利用种与种之间同源的蛋白质、基 因、或肽段制成肿瘤疫苗，可能会提高肿瘤抗原的免疫原性， 和克服自身的免疫耐受。本试验旨在探讨一种从低等植物中 提取的糖蛋白——郑氏植物蛋白(,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,) 的肿瘤抗原活性。 方法:,(淋巴 士 论 文 件下，受到非特异性有丝分裂细胞增殖试验,淋巴细胞在体外培养条 硕 原或特异性抗原刺激后，诱导 其转化成淋巴母细胞，细胞的,,,合成增加，,,,合成 所需要的前体物质，如胸腺嘧啶(,,,)亦相应增加，,,, 掺入细胞量的多少与细胞增殖程度有关，从而反映出淋巴细 胞的转化程度。据此，我们将正常人、癌前病变患者、不同 分期的食管癌患者淋巴细胞与,,,及氚(,,)标记的,,, 在体外培养,,小时后，测定各组淋巴细胞的放射性(;,, 值)，并计算刺激指数(,，)以该植物蛋白是否对食管经典论文 博硕论文 ?畚?中文摘要 癌患者淋巴细胞具有特异性激活作用，进而证明其是否具有 肿瘤抗原活性。,(细胞毒性,细胞(,,,)是机体重要的抗 肿瘤效应细胞，可直接杀伤带有致敏抗原肽(,,,分子的肿 瘤细胞。绝大多数,,,是,,,，,,,‘,,,，细胞，它们对靶 细胞的识别与杀伤受,,,(，类分子限制:少数为 ,,,，,,,，,,,’细胞，其对肿瘤细胞的识别和杀伤受,,,( ，，类分子的限制。因此，外周血淋巴细胞(,,,)中,,,，、 ,,,，的表达水平可能与,细胞的识别和和效应功能有关。 根据这一原理，我们将食管癌患者的,,,与,,,共同体外 培养，以直标法用荧光标记的小鼠抗人,,,，、,,,，、,,,， 单克隆抗体(,,,)标染培养前后的,,,，用流式细胞仪 测定其各类,,抗原的表达率，以期验证,,,的肿瘤抗原 活性，并进一步了解其作用机制。,(肿瘤细胞增殖实验将 食管癌的原代肿瘤细胞与,,,及,,(,,,在体外培养，测定 ,,,对肿瘤细胞的促增殖作用，从另一方面验证其肿瘤抗原 活性。 结果:,(,,,对食管癌和癌前病变患者外周血淋巴细胞 有特异性刺激作用，对正常人外周血淋巴细胞无刺激作用。 硕 士 论 文 对正常人、癌前病变、早期食管癌、中晚期食管癌患者外周 血淋巴细胞的刺激指数分别为,(,,?,(,,、,(,,?,(,,、,(,, ?,(,,、,(,,?,(,,;后三者与正常人比较均有显著性差异 (,,,(,,)。 ,(食管癌患者,,,经,,,刺激后,,,，、,,,，细胞百 分率与刺激前相比有明显提高(,,,(,,)，,,,，细胞百分比 无明显变化，,,,刺激前后,,,，、,,,，、,,,，细胞百分 率无明显变化。经典论文 博硕论文 论文 中文摘要 ,(,,,对食管癌的原代肿瘤细胞增殖有很强的促进作 用(,,,(,,)，对正常组织细胞无刺激作用。,,,,对正 常组 织细胞及肿瘤细胞均无刺激作用。 结论:以上结果显示该植物蛋白具有肿瘤抗原活性，可 以诱导产生特异性抗肿瘤免疫应答。该蛋白对肿瘤的早期 诊断及特异性主动免疫治疗有重要的意义。 关键词:植物蛋白;肿瘤抗原活性;淋巴细胞转化试验: 肿瘤细胞增殖;淋巴细胞亚群;流式细胞技术 硕 士 论 文 ,经典论文 博硕论文 论文 英文摘要 , ,,,,, ,, ,,,,, ,,,，,,, ,,,，,，,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,，, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,:,,, ,,,,,, ,, , ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,’, ,,,,,,, ,,, , ,,,, ,,,,(,,,,, ,, ,, ,,,,;,,,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,(，, ,,, ,,,, ,, ,,,,,，,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,; 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,,出,,(,, ,经典论文 博硕论文 论文 英文摘要 ;,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,,,,(,,,),,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,(,,, ,,, ,, ,,,,,(,,, ;,,,,, ,,,, , ,,,,,,,, ,, ,,, ,,, ,, ;,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,;,,,,,, ,, ,,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,(,, ,,, ;,,;,,,,,,(,, ,,, ,，，,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,,,;,,,;,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,;,,,(,(,,,,,,,,; , ,,,,,,;,,,(,,,),, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,;, ;,,,(，, ;,, ,,,,;,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ;,,, ,,,;, ;,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,—,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,(,,,, ,,, ,,, ,,,，,,,‘,,,，;,,,,，,,,,, ,,,,,, ,,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ;,,, ,, , ,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,—， ,,,,;,,,(,,, ,,,,,,,, ,,, ;,,,, ,, ,,,，,,,，,,,。，,,,,, ;,,,;,,, ,, ,,,;,,, ,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ;,,, ,, ,,,,,,;,,, ,, ,,,—，， ,,,, ,,,，,,;,,,(,,(,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,，,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,;,,, ;,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,, ,,,, ,,, ,,,;,,,,,,, ,, , ;,,, ,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,,;,,,,( 硕 ,;;,,,,,, ,, ,,,, ,,,,;,,,,，,, ;,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,, 士 ;,,;,, 论 文 ,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,,,(,,,，、,,,,(,,,，,,, ,,,,,—,,,，,,,,;,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ;,,,,,,,,,,,(,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,(,,,, ,, ,,,，、,,,，、,,,，,,也, ,,,,,;, ,, , ;,,,,，,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,;,,,,,, ,, ,,, ,(,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ;,,,:,, ;,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ;,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,;,,，,,, ,,, ,,—,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,，经典论文 博硕论文 论文 英文摘要 ,,,,,,,,,,, ,,,’, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,, ;,,,，,, ;,, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ,;,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,( ,,,,,,,:,(,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,(;,,,,;) ;,,;,, ,,,,,,,,’,,,,,,;,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,(,,, ,， ,, ,,,,,;,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,(,(,,士,(,,) ,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,(;,,,,;)(,(,,?,(,,),,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ;,,;,, ,,,,,,,,(,(,,土,(,,),,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,(,(, ,士,(,,)(,,,(, ,)( ,(,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,;,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,，,,, ,,,;,,,,,, ,, ,,,，、,,,， ;,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,,:,,,，，, ;,,,’, ,,,;,,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,,,,,, ;,,,,,:,,, ,,,;,,,,,, ,, ,, ,，、,,,，、,,,，, ?, ,,,, ,,,,,,, ,,;, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,( ,(,,, ,,,, ,,,,, ,;;,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ;,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,;,,，,,, ,, ,,,,’, 硕 士 ,,,, ,,,,,,,,,,, 论 ,,,,;, ,, ,;,,,(,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 文 ,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,;, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,, ,,, ,, ,,,,,, ;,,,( ,,,;,,,,,,,:,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ;,,,,;,,,,,,,;, ,, ,,,,, ;,,,,, ,,,,,,, ,,, ;,, ,,,;,, ,,,;,,,; 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,(,(, ,,,,’,液洗涤后，用含,,,小牛血清的,,,，一,,,, 培养液调整成细胞浓度为,×,,,,,,的细胞悬液; ,(,,,将细胞悬液加入,,孔培养板中，,,, , ,,孔，试验组 分另，,,,入,,, ,和,,, ,郑氏植物蛋白，阳性对照组加入 硕 士 ,,, , , , ,,孔，各组均做,个复孔，加,,,，(,,,,培养 论 文 液将各孔体积调至,,, ,, ,; ,(,(,置培养板子,,,,、,,,,,培养箱中培养,,小时后， 每,,,,入,,—,,,,, , ,，继续培养,,小时; ,(,(,培养结束后用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维 滤纸上，用生理盐水, ,,淋洗两次，再用,,,,,氯醋酸, ,,固定细胞，最后用无水乙醇, ,,抽滤脱色: ,(,(,将滤纸片取下，于,, ,,烘干，置入闪烁测量瓶内， 加入二甲苯闪烁液, ,,避光数小时后，用液闪仪测量各经典论文 博硕论文 论文 研究论文 ;,,值; ,(,(,计算刺激指数，并列表,: 刺激指数(,，),(试验孔;,,均值一闪烁液本底) ,(对照孔;,,均值一闪烁液本底) ,(,淋巴细胞表面,,抗原表达 在无菌条件下取受试者静脉血,,,，肝素抗凝，加淋巴 细胞分离液,,,，采用梯度密度离心法分离出淋巴细， ,,,,’,液洗涤后，将淋巴细胞分装到,、,两个试管备用; ,(,(,(，,管加,,,液,,,,,，充分混匀，,,,,,,,,,离心 ,,,,,; ,(,(,(,弃去上清，留液,,,加,,,液至,(,,,，将样本分 别加入,支小试管，每管,(,,,，标记为,、,、,管，,,,,,,,,, 离心,,,,: ,(,(,(,弃去上清，分别留液,,,,, ,， ,、,管分别加入 ,,,，,,,，免疫荧光抗体和,,,，,,,，免疫荧光抗体各, , , ,， ,，振荡, ,秒使之充分混合; ,(,(,(,将标本,管加,,,液,, , 置于,,,下孵育,,分钟; 硕 ,(,(,(,孵育结束后，各加,,,液,,,漂洗，,,,,,,,,,离心 士 论 文 ,,,,,，反复三次: ,(,(,(,将样本送流式细胞仪检测: ,(,(,(,将,管的淋巴细胞用含,,,小牛血清的,,,,培养液 调整细胞浓度为, , ,,,个,,,;接种于,,孔培养板，每孔 ,(,,,设加,,,组及加,,,组，每组设两复孔，分别加 入,,,,,“,，,,,,,弘, ,，置,,,,、,,,,,培养箱培养 ,,小时: ,(,,,(,将细胞.