山羊槽盘吸虫各发育期形态学观察及中间宿主的研究

山羊槽盘吸虫各发育期形态学观察及中间宿主的研究 山羊槽盘吸虫各发育期形态学观察及中间 宿主的研究 ? 22?《上海畜牧兽医通讯》2005年第5期 山羊槽盘吸虫各发育期形态学观察及中间宿主的研究* 徐洪忠叶万荣梅文华肖芳萍 (1贵州省畜牧兽医科学研究所贵阳5500052贵州省安顺市畜牧事业局畜禽品种 改良站561000 3贵州省遵义市兽药监察所遵义563002) 槽盘吸虫(Ogrnocotyle又名列叶吸虫)系背孔科(Noto— eotylidae)~lJ叶属(Ogmocotyle又名槽盘属),因虫体腹面从头 到尾中间凹陷,两边翘起,形似槽状,从而得名槽盘吸虫. Ogmoeotyle属系1933年1月由Skrjabin和SchuLz根据采自 前苏联西伯利亚雹(Capreoluspygargibetfordi)体内的新种吸 虫Ogmoeotylepygargi创立的新属,新种;1933年5月Yam— aguti在日本鹿(Sikaenippon)体内发现了另一种新吸虫,定名 为CymbiformaSikae新属,新种;1942年Bhaleao在印度的黄 牛,绵羊,山羊小肠内发现一新种吸虫,命名为Cymbiforma indica;1954年Price在美国小猫熊(Ailurusfulgens)体内发现 了一种新吸虫,定名为Ogrnocotyleailuri. Ogmocotyle在我国发现的有两种,包括印度槽盘吸虫 (Cgmocotyleindica又名印度列叶吸虫)(=Cymbiformaindi— ca)和鹿槽盘吸虫(OgmocotyleSikae,又名羚羊列叶吸虫)(= Cymbiformasikae).1940年朱佐治等在云南进行人畜寄生 虫调查时,在104头绵羊中查出有42头感染O.sikae,感染率 40.3%,强度过千;1959年邬捷在四川小熊猫小肠内发现0. indica寄生;1963年杨平报道甘肃山羊体内发现O.sikae; 1965年危粹凡在贵州绵羊,山羊体内发现O.indica和0. sikae,并报道羊大量感染后致羊体出血性脓性肠炎;1988年 向丕元等在四川羚牛体内检获O.sikae;1988年赖从龙等在 大熊猫粪便检获槽盘吸虫卵;1996年于三科等在陕西大熊猫 体内查获O.sikae;2002年肖芳萍等在贵州盘县黑山羊体内 查获O.indica,一群羊中0,indica的感染率达75%,感染强 度最高的达5839条;2003年徐洪忠等进行了槽盘吸虫的药 物防治试验,用硫双二氯酚和苯硫咪唑防治取得较好的效 果.以上试验研究大都是针对病原形态学,流行病学,致病 性及药物防治方面的研究,尚未见关于生活史方面的研究报 道.我们通过对可疑中间宿主的调查,螺类的人工饲养,病 原的人工孵化,中间宿主的人工感染及山羊的人工感染试 验,进行了生活史的初步研究,现将结果报告如下. 1材料与方法 1,1病原的采集:根据流行病学的调查结果,到疫区进行 山羊的槽盘吸虫粪检,粪检阳性的羊带回实验室宰杀,于真 胃后100crrt的十二指肠内采集虫体.虫体经活体镜检及染 色制片镜检鉴定.将虫体置于载玻片上,用手术刀切割成若 干小块,上加另一块载玻片,用力挤压,或将切成小块的虫体 放人研钵中加少量蒸馏水研碎,以获取虫卵. 1,2虫卵的孵化:虫卵在光照培养箱内采用不同的温度, 进行人工孵化试验,以研究虫卵孵化的适宜条件,并获取进 行下一步研究用的感染性毛蚴. *本项目为贵州省科学基金资助项目[黔基合计字(2001)3055号] 13可疑中间传播媒介的调查:到疫区常放牧病羊的草 地,山沟,水田,沟边,小溪旁等采集槽盘吸虫的可疑中间传 播媒介淡水螺类.采集的螺类进行生物学分类,然后进行解 剖,镜检观察,检查其体内是否有槽盘吸虫的蚴虫. 1.4中间传播媒介的饲养繁殖:根据在疫区采集的淡水螺 类的解剖调查结果,到非疫区采集淡水螺类,部分用于解剖, 调查是否有槽盘吸虫的蚴虫.在确定未检出槽盘吸虫的蚴 虫后,其余部分放入装有从非疫区采集的稻田泥土的木箱 中,模拟自然条件,定期放入加有复合多种维生素的面粉饵 料,进行人工饲养繁殖.繁殖出来的幼螺即时捡出分箱饲 养,直到第四代再用于病原毛蚴的感染试验. 1.5毛蚴感染中间传播媒介试验及槽盘吸虫在螺体内各 期螺虫形态学观察:用人工孵化的槽盘吸虫毛蚴按螺均10 个的量感染饲养繁殖到第四代的小土蜗(Cmlbapervia又名小 椎实螺)400个,扁卷螺(Planorbismtundatus)300个,耳萝卜 螺(Radixauricularis,又名大椎实螺)300个.分别于感染后 的5,10,15,25,35,45d解剖,每次解剖10个螺,以检查毛蚴 是否侵入螺体及在螺体内的发育情况,并进行蚴虫各发育期 的形态学观察. 1,6终末宿主的感染试验:在非疫区购入经粪检阴性的山 ,4头作感染试验,1头作对照.试前隔离饲养30d, 羊5头 每5d进行一次粪检,6次粪检均为阴性后用于感染试验. 试验羊每头喂给由中间传播媒介逸出的尾蚴及其所形成的 囊蚴共计60个.对照羊不喂尾蚴和囊蚴.于感染后的第 50d全部宰杀解剖,在真胃后100crrt的十二指肠中检查是否 有槽盘吸虫,检获的虫体进行计数和染色制片镜检鉴定. 2试验结果 2,1在疫区粪检阳性并屠宰解剖查获的虫体经活虫镜检 和染色制片镜检鉴定为印度槽盘吸虫(Ogmoctgleindica). 新鲜成熟虫体经手术刀切割,玻片挤压和研钵研磨后分离出 成熟的虫卵. 表1虫卵孵化成毛蚴所需的温度和时间 《上海畜牧兽医通讯》2005年第5期?23? 2.2虫卵的孵化条件试验结果见表1.由表1可见,虫卵 在有光照的培养条件下8?时发育停止,13?发育很慢,在 33d的观察期内未能发育成毛蚴;18?时发育缓慢,需33d 才发育成毛蚴;20?时发育加快,28天孵出毛蚴,以后随着温 度的提高,发育越来越快,在28?时仅需10天就孵出毛蚴. 但此后温度的升高则出现发育障碍,37?时卵不能发育, 39?及以上则很快死亡. 2.3在疫区放牧病羊的地方采集到的淡水螺,经生物学分 类分别为扁卷螺(Planorbisrotundatus),耳萝卜螺(Radixau— ricularis又名大椎实螺)和小土蜗(Galbapervia又名小椎实 螺).分别解剖三种螺,结果在小土蜗体内查到吸虫的蚴虫, 感染率9.4%(41/435),扁卷螺和耳萝卜螺体内未检获. 2.4到非疫区采集扁卷螺,小土蜗和耳萝卜螺,部分进行 解剖,在未检出槽盘吸虫的蚴虫后其余放入木箱中模拟自然 条件饲养繁殖,定期投放加有复合维生素的面粉作为饵料. 小土蜗又名小椎实螺,属软体动物门,腹足纲,肺螺亚纲,肺 螺目,基眼亚目,椎实螺科,土蜗属.为水陆两栖淡水螺类, 贵州各地均有分布.它适应性很强,从贵州东南部低海拔的 河谷地区,到西北部高海拔的高寒地区均有分布.贵州冬无 严寒,夏无酷暑,四季均能见到活螺,它可以成熟螺,幼螺在 水中或潮湿泥块下越冬.一年繁殖2,3代,3,4月越冬螺 开始产卵,6,8月第二代成熟产卵,9,10月第三代螺成熟 产卵,螺成熟产卵完毕后很快死亡,也有部分可存活1年左 右.每繁殖出一代新螺就捡出分箱饲养,经4个世代的繁 殖,获得大量用于下一步研究的干净螺. 表2毛蚴接种三种螺后的解剖结果 2.5经4个世代繁殖的螺,在解剖部分未检出槽盘吸虫蚴 虫后,按螺均10个毛蚴的量接种小土蜗400个,扁卷螺300 个,耳萝卜螺300个.定期解剖螺,结果见表2.由表2可 见,接种槽盘吸虫毛蚴后的45d内对三种螺共进行了5次解 .每次解剖每种螺10个,剖均在小土蜗体内查到槽盘吸虫 的蚴虫,在扁卷螺和耳萝卜螺体内均未查到槽盘吸虫的蚴 虫.槽盘吸虫各期蚴虫的形态:毛蚴长形,体表有纤毛,前端 稍宽有一吻突,后端窄;胞蚴卵圆形,内含小雷蚴和胚细胞; 母雷蚴长形,体内含有子雷蚴和大小不等的胚球;子雷蚴长 形,外形酷似母雷蚴,只是其体内含有尾蚴;尾蚴外形似蝌 蚪,有一个较大的头部和一条尾巴,头部与尾部的长度相近; 囊蚴为圆球形,有口吸盘. 2.6经槽盘吸虫粪检阴性的5头山羊,其中4头每头接种 人工培育的尾蚴和囊蚴共60个,1头作为对照.于接种后的 第50d全部宰杀,在真胃后100cm的十二指肠中检查槽盘 吸虫.分别在4头试验羊体内查获槽盘吸虫成虫23,34,28, 41条.对照羊未查获槽盘吸虫. 3讨论 整个试验均用印 3.1本次采集到的吸虫为印度槽盘吸虫, 度槽盘吸虫,试验结果是否适用于鹿槽盘吸虫有待进一步研究. 3.2通过对疫区可疑中间传播媒介的调查解剖,查明了小 土蜗是印度槽盘吸虫在贵州的中间传播媒介之一.是否还 有其他中间传播媒介有待研究. 3.3虫卯在有氧,有光照,有水的条件下,孵化温度在18, 30?之间,孵化成毛蚴所需时间为10,33d.低于13?时处 于发育停止状态,高于37?时则死亡. 3.4毛蚴接种三种螺的解剖结果与疫区采集螺的调查解 剖结果一致,进一步证实了小土蜗是印度槽盘吸虫在贵州的 中间传播媒介之一.同时也说明了槽盘吸虫能在小土蜗体 内完成从毛蚴,胞蚴,母雷蚴,子雷蚴,尾蚴的发育过程. 3.5山羊接种槽盘吸虫尾蚴和囊蚴后50d解剖,均查到数 量不等的印度槽盘吸虫成虫,证明从感染毛蚴到成熟为成虫 的时间在50d左右. 主要参考文献 [1]Yamaguti,s,.StudiesonthehelminthumfaunaofJap,partI,Trema— todesof,retilesandmammalsJap.J.Zool,1933,3:1,134 [2]Bhaleaoe,GD,.OntWOhelminthesofdomesticruminantsinIndia Parasitology.1942,34:133,137 [3]朱佐治等.云南昆明区内人体及兽体寄生虫调查.中华医学杂志, 1940,26(8):699--708 [4]Price,E.W.AnewTrematodaformthelesserPanda.AilurusfuJ. gensJourParasitology,40(5),Section2,1954,38,39 [5]邬捷.寄生于小熊猫的Ogmocotyleindica(Bhaleaoe1942)吸虫.动 物,1959,11(4):561,564 [6]SatyuYamaguti.Synopsisofdigenetictrematodesofvertebrates. Vo1.IKeigakupublishingeO.Tokyo,1971:716--717 (7]杨平.甘肃省某县黄牛,山羊及猪寄生蠕虫相调查中国兽医杂 志,1963,1(2):2,5 [8]危粹凡.羊体槽盘吸虫(Ogmo~tylosis)研究I病原形态分类.畜牧 兽医,1965,8(3):205--212 [9]齐普生等.中国草食家畜常见寄生蠕虫图鉴《专辑》.新疆畜牧业 科技,1983,4与1984,1合刊:17,19 [103杨学友等.小熊猫寄生虫与寄生虫研究进展,中国农业大学 增刊,1998:122 [11]肖芳萍等.山羊槽盘吸虫病的诊断.上海畜牧兽医通讯,2004,1: 46--47 (12]徐洪忠等.羊体槽盘吸虫病(Ogmocotylosis)的防治研究.上海畜 牧兽医通讯,2004,6:10,11 [13]北京农业大学.家畜寄生虫病.农业出版社,1993,97,98 [14]赵辉元.畜禽寄生虫与防制学.吉林:科学技术出版社,1996,303 , 305