麻杏石甘汤传统汤剂与颗粒汤剂中苦杏仁苷含量差异原因的研究

麻杏石甘汤传统汤剂与颗粒汤剂中苦杏仁苷含量差异原因的研究 作者:武孔云 梁光义 贺祝英 靳凤云 李星 冯华 目的探讨造成麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂中苦杏仁苷含量差异的原因。 方法采用HPLC法测定不同方法制得的麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂液中苦杏 仁苷含量，选Diamonisl C18柱，流动相为水-甲醇(23?77)，检测波长为215nm 进行测定。结果麻杏石甘汤传统汤剂中苦杏仁苷含量为16.518 3 mg/g，延长煎煮 时间制得的传统汤剂中苦杏仁苷含量为22.063 9 mg/g，颗粒汤剂中苦杏仁苷含量 为22.215 0 mg/g。结论传统汤剂与颗粒汤剂中苦杏仁苷含量的差异是由于煎煮时 间不同造成的。 苦杏仁苷 麻杏石甘汤 高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveTo analyse the causes of different contents of amygdalin in traditional and granular decoctions of Maxingshigan Decoction. MethodsThe determination was carried out by HPLC with an ODS column and a mobile phase of water-methanol(23?77) at 215 nm.ResultsThe content of amygdalin was 16.5183 mg/g in the traditional decoction of Maxingshigan Decoction,22.0639mg/g in the traditional decoction made by prolonged boiling time and 22.2150 mg/g in granular decoction. ConclusionThe different contents of the decoctions of Maxingshigan Decoction may be caused by the different boiling time for Maxingshigan Decoction. Key words:Amygdalin; Maxingshigan decoction; HPLC 由于传统中药复方汤剂(传统汤剂)在使用上的不便等原因，近年来颗粒汤剂 被用于临床。传统汤剂是按处方配药，加水共煎而得;颗粒汤剂是将批量的单味中 药饮片分别加水煎煮、浓缩、干燥、分装，使用时按处方混合，开水冲服即得。传 统汤剂与颗粒汤剂的药效学、临床疗效方面的比较已经有了一些报道,1,，但有 关其化学组成方面的报道较少。麻黄杏仁甘草石膏汤(麻杏石甘汤)一方出自东汉 名医张仲景《伤寒论》一书，由麻黄6 g，苦杏仁9 g，甘草6 g，石膏24 g组成， 该方具有辛凉宣肺、清热平喘之功效，主治邪未解，肺热咳喘证。治疗咳喘症的 疗效至关重要，重用石膏能够使该方的疗效大大提高，使咳喘诸症更快得到缓解 ,2,。而麻黄与甘草的比例也宜恰当，据临证经验，取两者等量为宜，因为甘草 量大则牵制麻黄宣散之力，量小则恐麻黄宣散太过，两者配伍恰当，功专在肺，取 效则速,3,。我们在测定麻杏石甘汤传统汤剂及颗粒汤剂中苦杏仁苷含量的过程 中，发现麻杏石甘汤传统汤剂中苦杏仁苷含量为17.74 mg/g，颗粒汤剂中苦杏仁苷 含量为24.80 mg/g，两者经统计学有显著差异。本文报道不同汤剂中苦杏仁苷 含量产生明显差异原因的研究结果，对指导生产颗粒汤剂及其临床应用有一定意 义。 美国Agilent1100高效液相色谱仪;苦杏仁苷购自中国药品生物制品检定所 (批号820-200002);药材由贵州圣济堂制药有限公司提供，单味药浓缩颗粒由 贵州宏宇药业有限公司提供工艺参数，由贵阳中医学院植化实验室完全依照单味药 浓缩颗粒的制备工艺进行提取制备所得;药材经贵阳中医学院董丽莎教授鉴定，麻 黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf的干燥草质茎，甘草为豆科植物甘草 Glycxycrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎，苦杏仁为蔷薇科植物杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟种子，石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏Gypsum Fibrosum。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。 2.1 麻杏石甘汤汤剂制备 2.1.1 传统汤剂 称取药材麻黄6 g，苦杏仁9 g，甘草6 g，石膏24 g，加10倍量水常温浸30 min，煎煮保持微沸30 min，趁热过滤，滤渣加7倍量水煎煮保持微沸20 min，趁热滤过，合并两次滤液，药渣水洗3次，与滤液合并，减压浓缩，定容至50 ml容量瓶中，备用。 2.1.2 颗粒汤剂 各种颗粒按贵州宏宇制药有限责任公司提供的工艺参数制备，称取相当于以上麻杏石甘汤复方药材量制得的颗粒麻黄0.711 g，苦杏仁0.969 g，炙甘草2.096 g，石膏0.973 g，用沸水冲泡，摇匀，冷却，使溶解并定容于50 ml容量瓶中，备用。 2.1.3 供试品溶液的制备 分别精密吸取麻杏石甘汤中药颗粒汤剂和传统复方汤剂试液各2 ml，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇稀释并定溶至刻度，离心处理(4 000 r/min)5 min，取出，取上清液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，分别得颗粒汤剂、传统汤剂的供试品溶液。 2.2 色谱条件 分析柱为Diamonisl C18柱 (250 mm×4.6 mm，5μg);流动相为水?甲醇(23?77);流速1 ml/min;检测波长215 nm;柱温35?。 2.3 系统适用性实验 分别取苦杏仁苷对照品溶液、颗粒汤剂供试品溶液、传统汤剂供试品溶液、缺苦杏仁的颗粒汤剂供试品溶液以及缺苦杏仁的传统汤剂供试品溶液各10 μl注入液相色谱仪，记录色谱(见图1)。从图1中可见，苦杏仁苷的保留时间(tR)约为8 min。阴性样品谱在苦杏仁苷峰位置处无假阳性峰，即本实验条件苦杏仁苷与其他组分分离完全，分离度大于1.5，理论塔板数以苦杏仁苷计应不低于2 500。 2.4 线性关系考察 2.4.1 溶液的制备 精密称取苦杏仁苷对照品4.51 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.180 4 mg/ml的苦杏仁苷对照品溶液。 分别精密吸取苦杏仁苷标准溶液，用甲醇稀释配制浓度分别为0.072 16，0.108 24，0.144 32，0.180 4，0.216 5，0.252 6 mg/ml的苦杏仁苷系列对照品溶液。 2.4.2 标准曲线的绘制 精密吸取上述苦杏仁苷系列对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件依次测定，以峰面积积分值(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程:A= 488.996C +11.516，r = 0.999 8，苦杏仁苷在0.721 6,2.525 6 μg间浓度与峰面积的线性关系良好。结果见表1。表1 苦杏仁苷线性关系考察(略) 2.5 精密度实验精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样6次，记录色谱图。结果见表2。表2 苦杏仁苷精密度测定结果(略) 结果表明，仪器精密度良好。 2.6 稳定性实验精密吸取供试品液各5 μl，照上述色谱条件，2 h测定1次，各测5次，记录色谱图。结果见表3。样品在8 h内稳定。结果表明，样品稳定性良好。 2.7 重复性实验按上述方法平行处理5次，精密吸取各供试品溶液5μl，同法测定苦杏仁苷含量，记录色谱图。结果表明(见表4)，本法重复性符合要求。表3 苦杏仁苷稳定性测定结果(略)表4 苦杏仁苷重复性实验结果(略) 2.8 回收率实验称取鉴定合格的药材及其单味精制浓缩颗粒配成复方，各9份，精密按表5,6中的量加入苦杏仁苷对照品，按上述条件制备高、中、低浓度的供试液各3份，并按色谱条件项下进样，测定峰面积，记录色谱图，计算。结果见表5,6。表5 颗粒汤剂苦杏仁苷加样回收率测定结果(略) 表6 传统汤剂苦杏仁苷加样回收率测定结果(略) 结果表明，本法具有较好的加样回收率。 2.9 苦杏仁苷含量考察 2.9.1 样品溶液的制备 麻杏石甘汤传统汤剂和颗粒汤剂的制备:制法见“2.1.1”项和“2.1.2”项，各同法平行制备3份，备用。 延长煎煮时间制得的麻杏石甘汤传统汤剂(延时汤剂)的制备:称取麻黄6 g，炙甘草6 g，苦杏仁9 g，石膏24 g，共3份，按苦杏仁颗粒的煎煮时间进行制备，即第1次加8倍量水，煎煮保持微沸60 min，趁热过滤，滤渣加6倍量水，进行第2次煎煮，保持微沸60 min，趁热滤过，合并2次滤液，药渣水洗3次，与滤液合并，减压浓缩，定容至50 ml容量瓶中，即得麻杏石甘汤传统汤的延时汤剂(3份)。 2.9.2 供试品溶液的制备分别精密吸取麻杏石甘汤中药配方颗粒汤剂、麻杏石甘汤传统汤剂和麻杏石甘汤延时汤剂试液各2 ml，置10 ml容量瓶中，加无水乙醇稀释并定容至刻度，离心处理(4 000 r/min)5 min，取出，取上清液用0.45 μm的微孔滤膜滤过，分别得麻杏石甘汤颗粒汤剂、传统汤剂及传统汤剂延时汤剂供试品溶液。 2.9.3 含量测定照苦杏仁苷色谱条件项下操作，精密吸取下列供试品溶液:颗粒汤剂、传统汤剂以及传统汤剂延时汤剂各10μl，分别进样，记录色谱，用外标法计算苦杏仁苷的含量，结果见表7。表7 不同煎煮时间制得的汤剂中苦杏仁苷含量(略) 采用Bonferroni检测方法，用DPS,4,检验传统延时汤剂、传统汤剂、颗粒汤剂中苦杏仁苷含量的差异。计算结果，各个比较组别99%置信限:传统延时汤剂与传统汤剂之间为:4.421 8,6.669 4，传统延时汤剂与颗粒汤剂之间为:,1.274 9,0.972 8，传统汤剂与颗粒汤剂之间为:,6.820 5,,4.572 8，其中传统延时汤剂与传统汤剂、传统汤剂与颗粒汤剂的置信限不包括零，传统延时汤剂与传统汤剂、传统汤剂与颗粒汤剂之间所含苦杏仁苷含量的差异显著;而传统延时汤剂与颗粒汤剂的置信限包括零，两种汤剂中所含苦杏仁苷含量的差异不显著。 麻杏石甘汤传统汤剂苦杏仁苷含量明显低于颗粒汤剂，将传统汤剂的煎煮时间延长制得的延时汤剂中，苦杏仁苷含量显著提高，与麻杏石甘汤颗粒汤剂的苦杏仁 苷含量无显著差异。实验初步证明，引起麻杏石甘汤传统汤剂与颗粒汤剂间苦杏仁苷含量差异的主要原因与煎煮时间的长短有关。在一定的煎煮时间内，苦杏仁苷的含量与煎煮时间之间成正增长，随着煎煮时间的延长苦杏仁苷的溶出率增大。提示煎煮时间是中药复方汤剂制备的一个重要因素，值得重视。 【 ,1,周嘉琳，王永山(中药浓缩颗粒临床应用与研究,M,.北京:人民卫生出版社，1998:375. ,2,陈雪梅.麻杏石甘汤中石膏用量的重要性,J,.四川中医，2001，19(2):78. ,3,聂惠民.《伤寒论》方药解析，，2005，04. ,4,Tang,Q.Y. Practical Statistics and DPS Data Processing System ,M,.Beijing:China Agricultural Press. M.G.2002:39. 欢迎到访:更多资源查看: