血清胸腺因子（FTS）对荷瘤小鼠干扰素、白介素-2分泌的影响

血清胸腺因子（FTS）对荷瘤小鼠干扰素、白介素-2分泌的影响 血清胸腺因子(FTS)对荷瘤小鼠干扰素、白介素 -2分泌的影响 ====================================================================== 【摘要】 目的 观察 FTS对提高荷瘤动物干扰素(IFN-ν)、白介素-2(IL- 2)分泌的影响。方法 对荷瘤动物皮下注射不同剂量的FTS后,取其血清，测定 血清中IFN-ν的含量，并测定其脾细胞在ConA刺激下分泌IL-2的含量。结果 与对照组比， FTS 2.5mg/kg、1.25mg/kg能够使荷瘤小鼠血清中的干扰素含量 显著提高(P<0.01)，同时也使脾细胞分泌IL-2的能力提高。结论 FTS能够 刺激机体提高分泌细胞因子的能力，对抗肿瘤有着积极的作用。 【关键词】 血清胸腺因子 干扰素 白介素-2 抗肿瘤 【Abstract】 Objective Observation the FTS to enhance the Dutch lump animal IFN-ν，IL-2 secretion influence.Methods After Dutch lump animal hypodermic injection different dosage of FTS, takes its blood serum, in the determination blood serum IFN-ν the content, and determines its spleen cell to secrete IL-2 under the ConA stimulation the content. Results With the control group compared to, FTS 2.5 mg/kg, 1.25 mg/kg can cause in the Dutch lump mouse in blood serum of the interferon content remarkable enhancement (P< 0.01), simultaneously also causes the spleen cell to secrete IL-2 ability enhancement. Conclusion FTS can stimulate organism enhancement secretory cell factor ability, the resistance tumor has the positive function. 【Key words】 FTS; IFN; IL - 2; anti-tumor 据报道，血清胸腺因子(Thymulin,FTS)来源于胸腺组织，其氨基酸序列 为NH2/Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Ser-Asn，是一类小分子肽,1,，对参与获 得性和先天免疫的细胞FTS都能产生作用,2,，在鸡模型中，FTS能参加IL- 2R的达，特别对CD4+ 细胞，它也影响人IFN-ν受体的表达，使细胞更易被 细胞因子刺激,3,，本文通过研究FTS对荷瘤动物分泌IFN及IL-2的影响， 了解FTS对免疫低下机体的细胞因子的作用，从而为国内进一步研究FTS在抗 肿瘤方面的应用打下良好的基础。 1 材料与方法 1.1 药物与试剂 血清胸腺因子(FTS) ，批号060821，由深圳市翰宇 生物有限公司提供,其纯度为>96%,冻干粉末,冷冻保存，临用前取FTS 1mg， 加1ml消毒生理盐水稀释为1mg/ml的原液，供皮下注射用。阳性对照药为胸腺 肽，冻干粉末，200mg/支,黑龙江迪龙药业有限公司提供,批号20061001;小鼠 干扰素-γELISA试剂盒，晶美生物工程有限公司提供,批号20060529;刀豆蛋 白A(ConA)，SIGMA公司提供，浓度为10μg/ml和30μg/ml;MTT，SIGMA公司提供，使用浓度为5mg/ml，20μl/孔。 1.2 瘤株 小鼠H22，取接种于小鼠的腹腔第7天的瘤株,配成106/ml瘤细胞悬液，接种于小鼠前肢腋窝皮下0.2ml/鼠。 1.3 动物 实验用体重18,20g的SPF级雄性昆明小鼠;C57 BL/6小鼠，6,8W 雄性，动物合格证号:SCXK京(2005-2006)，均由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。饲养观察2天后使用。实验动物室为无菌空气二级过滤，人工日光灯12h自动照明，恒温、恒湿送风，温度22,24?，相对湿度40%,45,。鼠笼具为塑料盒,不锈钢丝盖。 1.4 荷瘤动物模型 用18,20g的昆明小鼠皮下注射H22瘤株，24h后小鼠随机分组用于实验。 1.5 给药方法 分别取荷瘤小鼠，健康动物及免疫缺陷型动物各50只，均分为5组，分别按高、中、低3个剂量注射FTS，对照组注射NS，用胸腺肽做阳性对照，均皮下注射给药，每日给药1次，共给药14天。 1.6 小鼠IL-2的产生 将给药后的小鼠断颈放血，取脾置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质，研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤，将滤液1000rpm,5min离心，取上清，除红细胞后，用无血清RPMI-1640培养液洗1次，最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成0.5×107/ml，加入24孔细胞培养板中500μl/孔，同时加入等体积的ConA(10μg/ml)，37?，5%CO2，培养24h，取出2500rpm,20min离心，收取上清，除菌后，-20?保存备用。 1.7 小鼠胸腺细胞的制备 将C57 BL/6小鼠断颈放血，取胸腺置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质，研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤，将滤液1000rpm,5min离心，去上清，除红细胞后，用含5% 小牛血清的RPMI-1640培养液洗二次，最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成1.0×107/ml。 1.8 小鼠血清的制备 将给药后的小鼠从眼静脉丛取血，待凝固后分离血清，-20?保存备用。 1.9 检测指标 用酶标仪测定各组的OD值，IFN-ν测定用490nm，MTT测定用550nm。实验数据用x?s表示，组间比较用t检验。 2 结果 2.1 FTS对荷瘤小鼠IFN-ν分泌的影响 将给药后的小鼠血清稀释5倍和10倍，按IFN-νELISA测定试剂盒的要求，测定每个小鼠血清IFN-ν的含量，10倍稀释后的血清比5倍稀释后的血清测定结果要高，结果见表1。表 1 荷瘤小鼠血清(10×)IFN-ν的含量注:与对照组比较，*P<0.05， **P<0.01;与胸腺肽比，??P<0.01 由表1可见，与NS组比较，FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以极显著地增强荷瘤小鼠IFN-ν的分泌(P<0.01)，比胸腺肽的刺激作用强(P<0.01)。 2.2 FTS对荷瘤小鼠IL-2分泌的影响 将含IL-2的样品倍比稀释后加入96孔细胞板，100μl/孔，每稀释度3个复孔，再加入ConA( 30μg/ml);20μl/孔，同时设ConA对照和培养液对照，培养72h，培养结束前4h加入MTT，按MTT测定法在550nm测OD值，结果见表2。 表2 FTS对荷瘤小鼠IL-2分泌的影响 由表2可见，与NS组比较，FTS 2.5,0.63mg/ml可以极显著地增强荷瘤小鼠IL-2的分泌活性，而胸腺肽与对照组比差异有显著性，但是比FTS要弱。 3 结论 生物反应调节剂是继三大常规手段(手术、放疗、化疗)治疗恶性肿瘤后 ,，细胞因子是生物反应调节剂中最活跃的一群，大量资料的又一新的手段,4 表明，干扰素和白介素-2能够促进NK细胞的杀伤活性，抑制肿瘤细胞生长， ,。从本文实验结果中看出，通过给荷瘤小鼠注射是重要的抗肿瘤细胞因子,5 血清胸腺因子(FTS)，可以提高机体分泌干扰素、白介素-2的能力 (P<0.01)，从而加强了机体的抗肿瘤能力。胸腺肽是目前常用的免疫增强剂，大量用于肿瘤病人术后的治疗中,6,，从本文的实验中可以看出，FTS对细胞因子的激活能力比胸腺肽要强得多(P<0.01)，但有效剂量要小52倍，所以将FTS开发成抗肿瘤新药是很有发展前景的，生物治疗已成为21世纪肿瘤治疗的主要方向和潮流，无疑可以在肿瘤综合治疗中发挥更重要的作用。 【参考文献】 1 Kohda Y, Kawai Y, Iwamoto N,et al. Serum thymic factor, FTS, attenuates cisplatin nephrotoxicity by suppressing cisplatin-induced ERK activation. Biochem Pharmacol， 2005,70(9):1408-1416. 2 D Chandratilleke, GA Marsh.The effect of thymulin on avian IL-2 receptor expression. Int J Immunopharacol,2000, 22:887-896. 3 PG Merlino,JA Marsh. The enhancement of avian NK cell cytotoxicity by thymulin is not mediated by the regulation of IFN-γ production. Dev Com Immunol, 2002,26(1):103-110. 4 左增艳，柳钟勋，李健蕊，等.新型生物反应调节剂、当归多糖(ASDP)抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.中国免疫学杂志，2000，16(10):545-546. 5 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理学实验方法学.北京:人民卫生出版社， 2002,1762-1763. 6 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，2006,1006-1012.