人胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）ELISA检测试剂盒试验原理说明

人胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）ELISA检测试剂盒试验原理说明 人胃蛋白酶原?(PG?)ELISA检测试剂盒试验原理说明 人胃蛋白酶原?(PG?)ELISA检测试剂盒试验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胃蛋白酶原?(PG?)水平。用纯化的人胃蛋白酶原?(PG?)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胃蛋白酶原?(PG?)，再与HRP标记的胃蛋白酶原?(PG?)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃蛋白酶原?(PG?)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过曲线计算样品中人胃蛋白酶原?(PG?)浓度。 人胃蛋白酶原?(PG?)ELISA检测试剂盒组成 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片(48) 2片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8?保存 标准品:18μg/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8?保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8?保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8?保存 6ml×1瓶 2-8?保存 终止液 3ml×1瓶 浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8?保存 人胃蛋白酶原?(PG?)ELISA检测试剂盒样本处理及要求 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本:切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。 用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8?的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟 /分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻左右(2000-3000转 备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。