芳维A酸乙酯对小鼠皮肤乳头状瘤形成过程中ODC、PCNA的影响

芳维A酸乙酯对小鼠皮肤乳头状瘤形成过程中ODC、PCNA的影响 芳维A酸乙酯对小鼠皮肤乳头状瘤形成过 程中ODC、PCNA的影响 第23卷第6崩 2001年6月 第一I军医大学 AC’T~ACADEMIAEME1)l(I,AFM1IITARISIER11AE Jl13.,().6 JI川+2001683 芷章编:t0?.5404(ZC01lIh』303 芳维A酸乙酯对小鼠皮肤乳头状瘤形成过程中ODC,PCNA的影响 王儒鹏.张国威,何云志.黄海(第二军大学附属新桥医院皮肤科.重庆400037 论着 提要:目的通过测定小鼠二阶段皮肤乳头状瘤模型巾鸟氨酸脱投酶(ODCi,增殖细胞枝抗 (PCNAfluenceofarotinoidethylesteronODCandPCNAinthecourseofprodu cingmouse skinpapillomaformation WANGRu—peng.ZHANGGut~we(.ttExt=tlti—zhi.HU:L\GHdl(?I一Denmttd.Xinqi~H【1ital,Thi~tbIilit~mMllrlln…IIv.Chf1ngq[i3g 400037.Chirai M~str.act:ObjectiveIudyihenJechani~nofamtit~-fidethyleslerul1(artl}州】】0f【J】bya蝴?ore(thine(IPIarlx)xvlasec()1 actbityandproliferativecellnuclearanllgen(PCNA1indexofIIIOLLq,Pskinirldiepofl1_(mpillonmfommlionMethodsTheODC11,lh wasdetectcxtbyO’BfienmethndsTheepidemfisextra~-treactedl_lal~lledo mithlue.andthecpr~xhl{PdirtdicalextIheODCa(-[11th TheexpressionofPCNAwasdeteeled 【theimmunolfist~:hemicalstainingkhniqueTheskirtp(.oblainedfromthepri3111(Rlonsiag~ thedynamicprocess0f”NAexpre~.4oncouldbeobser,.edResaltsArr*tinoidethyleslero*ulddis6netlyintfibiltheIlRIIOIIYn~lrksODCandPC NA.C,o~lusion.Am)lJnoJdethyl~terha.sa]linhibitefl~q0rlODEandPCNAJbl(hitinhibitsskinpapHlomainI]]OHS~Arotinoidethylesler D’~ssessestheeffect(】fan【erq(1ettlopre,~ettlioll Keyds:aroth~-ddethy(osier;[,~pilloma;ore(thinedtx-arl~xylase;pmtiferdfiX’eI?nIHleararltJgen 目前研究发现维甲酸类化合物对多种肿瘤及癌前 期病变有防治作用,芳维A酸乙酯(Amtinoid ethylester,AE,Rol3-6298)能诱导细胞正常分化.抑制 增殖.诱导凋亡研究表明,马氨酸脱竣酶(Ore(thine da【txlase,ode)在生长迅速的细胞及肿瘤细胞内含 量远高于生长缓慢的细胞或静细胞.当用促瘵物刺 激细胞时,OI)t2活性急剧升高,因此ODC町作为癌生 长的标志物增殖细胞核抗原(Proliferativecellnu— dearantigen,PCNA1分布与肿瘤细胞或其它增殖活跃 细胞的分布密切相关.也是近年发现的细胞增殖活性 标记之一ODC,PCNA在肿瘤的发生发展过程中起 重要作用.本实验通过检测在巴豆~/DblBA诱发小鼠 乳头状瘤形成的过程中.芳维A酸乙酯对ODC,PCNA 的影响,探讨芳维A酸乙酯的癌化1(x)只小鼠随机分为宴骑组 (Crotot~oil+AE)和对照组(Crotonoil)每纽50;J第一步:癌变 启动阶段.于实验第l,7,I4天用DMBA丙酶液02(含DblB~ 1507gi涂于所有小鼠背部脱毛区皮肤:第二步:促进乳头状瘤 形成阶段,从第3周起,所有小鼠背部脱毛区涂o5%巴油丙 削液o.2ml每J吉】2次【周?,周五).5h后各组处地6,,LI小鼠删 0nc酶活性其中宴验组小鼠每周给子芳维A酸酯(0()5 tt)2次(周一,周四)不用芳维A酸己酯处理组为埘照 艾骑车刘照组小鼠有乳头状瘤出现为止 1.2pcNA指数检测材料与方法 l21标本来源取癌变促进阶段小鼠背部皮肤.经固定, 包蜱的彳于蜡块切片所得.巴豆油刺激前及第2,4,68次津巳 油后t即”始涂巴豆油后第1,2,3,4周末,.所取实验组和对 照组标本的rl蜡切片各组每个时相3个标本 l22材料PcA免疫组化染色试剂赢:正常…羊m清. 用于组织切片的封闭小鼠抗增殖细胞核抗原.克隆编号: 684第一睡夫芊摧第奄 [‘CL0,荚阻CAtBI(‘JCI[EM?-.品物褰化』I』抗小吼l. SABC.链霉亲和i袅一过较化物丽复台物,抗修复滚 1.23力常越蜡?片免疫纽化染也 1.24结果计定标准将免疫组化架色处理后的切片放在 光学显馓镜F观察.fICNA定位于丰富内.标黄色,褐色为』5n悱 表达细胞.存高倍镜F计数.每个时相点3个标本,每个标本选 5个典型视野?数记每100个细胞核-m标记槌数量,取 平均值,计斡HA表达指数即PCNA指数=m细胞数 总细胞数×100% l3统计学方法 结果?丧币rt】t检骑 ?CNA 表达的影响 22.I免疫组化染色观察所有明H均可见到呈棕黄色的 PC10阳性表达细胞,j肚表达物质主要定位于细胞棱内,呈块 状或颗粒状分巾.或州者幕而有之.见i.2 图1对照组第2波涂巴豆油后(1周末1小鼠表皮PCNA表达 轻度增加基底层和基底上层都有表达2?1 Fig1PCNAsli~tlyreinI鞠1laverandupper layerP(~NA:4ainingofmfmI[‘{山Prpvm”m oiI”川time~fPChAx2fk3) 圈2实验组第2次凉巴豆油后(1周末}小鼠表皮PCNA表达基 本上局限于基底层rPCNA×2帅J Fig2PleasniIIglimiledinbasallayer,A~taining’t I叩c1nrapplying…”ltllt…lPCNA×20f~i’ 22.2HA表达指数见表2. 表2各阶段PC31A表达指数(%,? Tab2PCNAexl~rcssionindex%.?s 3讨论 ※:<00l_…I…t::P<005 ??:P<00Irnn1x1-”l 芳维A酸乙酯是第3代维甲酸类化合物的重要代 表物,具有明显的抗角化,抗过度增殖作用小鼠?阶 段皮肤乳头状瘤模型是目前常用的评价化合物癌化学 预防作用的动物模型,它足一种癌前期病变.我们先前 的实验表明芳维A酸乙酯对二甲壁苯蒽/巴旦油诱发 小鼠皮肤乳头状瘤的发生有较强抑制作用,降低乳头 状瘤发生率,对已发生的乳头状瘤有消退作用.具有肯 定的癌化学预防作用 ODC是聚胺生物合成的第一个限速酶,当用促癌 物刺激细胞时.ODC活性急剧升高,在二甲基苯蒽/巴 豆油诱发小鼠皮肤乳头状瘤模型中,巴豆油的丰耍成 份弗波酯健癌剂促进皮肤乳头状瘤的能力与它们诱导 的OI】c的能力有密切相关.在二甲基苯蒽/巴且油 诱发小鼠皮肤乳头状瘤模型中,第一阶段为启动阶段, 即DMBA作用期,遗传物质DNA受到损害,这个过程 作用时问较短,第二阶段为促癌阶段,在致癌困素(巴 油,TPA等】刺激下,正常细胞开始向异型增牛转变. 因此这个阶段应是细胞内发生各种变化较明显的时 期实验表明ODC活性在这个时期呈逐渐升高的趋 势,在巴豆油促癌阶段说明ODC在常皮肤向癌时期病变,癌症演 变过程中所起作用,以及芳维A酸己酯对ODC活性的 抑制.是它对基苯蒽/巴汕诱发小鼠皮肤乳头状 瘤的抑制作用的重要作用机制 PCNA分布与肿瘤细胞或其它增殖活跃细胞的分 布密切相关,是近年发现的细胞增殖活陛标之一,用 此在判断正常及肿瘤细胞期,检测细胞增殖程度及 鉴别诊断上有很大意义实验结果显示,在正常的 成年小鼠表皮中.PCNA表达呈弱阳,而且只限:j=在 表皮基底层表达.一般不出现在棘层及其以}位置 说明在正常情况下,小鼠表皮保持着一定的生长速度. 维持皮肤的止常新陈代谢.但是这种增殖分裂强度不 高.在用巴豆油不断刺激的对照组中.随着刺激次数 的增加.PCNA表达呈不断上升的趋势.且对照组部分 小鼠已开始出现乳头状瘤,结果显示随着巴豆油刺激 次数的增加,PCNA表达呈上升趋势,增加的趋势也越 明显.在开始出现乳头状增生的皮肤周围,PCNA表 达急剧升高,井伴随皮肤结构的改变在出现乳头状 瘤的对照组小鼠皮肤.可见PCNA表达团状,巢状, 遍布整个瘤体组织..然而在同时II手j芳维A进盟的抗增殖 抗肿瘤作用,困此可以推测它在刘墙fi{=f期病变和多种 肿痛的防冶等方面具有一定的怍? 参考文献 IIl_,.Ih|l1F,Kirt,l_,elltf I_fn?rv,tin~>i-?itI…?rls}2} inloJfIm~4pti--I…1inhihissml1tofl?1兀1?lhL?_l lu~mehialepRhetia]cells【hghal~finoi(add(eplot—del~tx]entsimal- ingIh…JJ【C?”hvI.】998.101-5J:10121019 Ro~hmdl_1)lJ兀11】pHI…I1州,吣n~[afinn:?H… (,I(Mill}fine-aHg,xy[ase【J-Miet~dliolR.199256{21:2811290 【刮I’sajiKitajin~SKoa4~iYExp…m’《proliferatingceill?】…[ear- t[~en-PCN’X)1al~plosisrelal~t~ligehlIIinepilhelialskinIu1 JJ1Jm…h01I998.20(2I:1641? l4tuske】{Mihwi~v.TllnhH?w.11一J,}’(,Ffl?I1dIt11JH,m? ‘Ill川J1…l_iI1the?l?l…lllmeel1line.f…2lJ]Digestion 2?.61?41:230236 [5RuiIIRe~lmhandilevelopnl~llof…rherlcgre~enli~Isin adnaJIJC【Bi~:hem】997.27ISttppl1):7】I f6Jcdd,inese traditionalherbs 李祯英(第二军医大学附属西南医院中医科,重庆400038) 中药药浴是古代的种治疗方法,巾占代认为类风湿关 节炎属痹症范畴,以中药曲液浸泡患者争身或肢体,能法风除 湿,祛寒,疏通经络,运行气血,从而广.生消炎.消肿,减轻 筋脉关节拘掌,恢复咒节功能的治疗效粜 1临床资料 本科从l997印2月生2O00年6kj问按美国风湿病会 1987年诊断标准收渍豢风湿关节炎病侧330侧.分为中药药浴 加常规抗风湿药物治疗组和单纯常j乏廿运动瘴 碍等均有不同程度的缓解或减轻,药浴组有效率为91!.常 规组为708%.P<005敞对关节的肿胀疼痈的缓解减 轻.关功能障碍的艇复方面药浴缉伲于常规射.其它指如 血沉及娄风湿困了的改善片面两组无显着性异 2护理 由】:乖痫病变部位土要累硬骨.J关节致使关滑膜芹常 增殖覆盖软骨袁陆.使关韧带橙驰,关偏斜,脱位辕绀织 填允牵隙I形戚粘连患者为了减轻疼捕,小愿恼直肚体,K期 采取属曲姿势豉使病变天节粘连,机化,形戚畸形.最斤戈节 (下转688页)