【doc】轻度低温对兔缺血再灌注脑损伤的保护作用

【doc】轻度低温对兔缺血再灌注脑损伤的保护作用 轻度低温对兔缺血再灌注脑损伤的保护作 用 2ce一2c} ? Z06?/1996年第9鞋第4 轻度低温对兔缺血再灌注脑损伤的保护作用 林友俊李劲松李耀华杨天明. 一1,)) ^八/牛',) /叶摘要Ill苷tE缺动物模型研究了轻座低温对脑缺血及再灌注损伤的保护作用.阻断兔脑血运 及特定头位苏一-性},先全n再灌注制成模型.观察了轻度低温(34,35C)与各对照组在不同温 度下睹缺血及一摊后的变化.显示轻度低温治疗的兔神经功能好,脑组织古水量低,抑翻了Glu,Asp 的过量释放.抑制矗_i二向细胞内流动,病理致光镜均见组织和细胞损伤减轻.实验明轻度低温对脑 歃血及缺血后再灌注捌伤确有保护作用= 关键词脑缺由辑度低温蒋灌注损伤兴裔性氮基酸 Theprutectivelfectofmildhypothermlaincerebralischemiareperfusioninjarryof rabbits,",",-+LiJinsuon?LiYaohmz,etat.TheAffiliatedHospitalNajingRail— wayMedicalti【PtNafing210009. AbstractWcstudyeffectofmildhypothermiaincerebra1ischemiaandreperfusionin— juryusingatIC'Gmodalofi~hemia.Theacuteimcompleteisehemiaandreper/usiondamage mode1wasobteinedbyoccludingverteora[arteryand/orbilatera1commoncarotidarteries andchangingheadpushion.Thechangeofmilolhypothermia(34—35?)andcontrast groupsaftercocci)fdischemiaandreperfusioninjurywereobserved,Theresultsshowbetter neurologicaloH',CO[1le,lowerwatercontentinbraintissue.IowerGlu,Aspreleuse,lowerle ve[ calciuminbraiutissueandmilderpathe/ogicalinjuryafterhypothermia_nrabbits.Thestudy suggestedthat1hernildhypothermiamayplayaroleinprotectingcellularinjuryofischemia andrepretusion. KeyWOI'dsCerebralischemiaMildhypothermiaReperfusioninjuryExcited aminOacid 近几年研究结槊表明轻度低温(34?2?) 能明显改善脑缺血后神经功能障碍,减轻脑病 理组织学和生化损害程度,但对缺血发生30分 钟以后轻度低温是否具有治疗作用尚有争议. 为此本文利用一种新的脑缺血动物模型研究了 缺血发生1小时后轻度低温对神经功能,脑含 水量,Glu,Asp,Ca"含量及病理组织学的影响, 并结合文献进行探讨. 材料和方法 一 , 实验动物及分组:采用人工繁殖的成年,健康, 雄性青紫兰家免一体重2.1土0.3kg实验前12小时禁 食,头皮去毛.将3O只家免随机分为四组I组持续 缺血正常体温组7只,阻断三动脉持续缺血4小时,体 温在正常范围(39,39.5?)I组:持续歃血低体温组 7只,持续缺血1小时后降温(34,35C),维持3. 组:醯血再灌注正常体温组8只.持续缺血1小时后 松开双颈总动脒夹,持续3小时体温维持正常范围. ,组:歃血再灌注低体温组8Iq,持续歃血1小时后再 灌注,同时降温(34,35c),维持3小时 二,模型制作方法:用5氯胺酮0.1g/kg麻醉动 物看.取仰卧位.固定于术制手术台上,颈部正中切口. 分离双侧颈总动脉,右侧椎动脉,用血管夹夹闭双倒颈 总动脉.在右侧椎动辣进八颈横突孔前用丝线结 扎..然后将手术台竖立置动物于头高尾低位t头固 作者单垃:21e0e9南京铁道医学院附属医院棹经外科 定干右转后仰位,造成急性不垒性前脑缺血.松开职颈 总动脉夹.体位平置,头枕复fl摈位.使双颈总动脉厦 左侧椎动脉恢复血流t此即缺血再灌注 三神经功能评定:实验完毕后处死动物前进行神 经功能评定.根据kazutolshi氏法按神志,呼吸,神经行 为能力,对缚痛的反应等分为3千等级;1级正常(完全 清醒,可行走j.2级轻度损伤(清醒,可蹲坐,能进食,不 能行走)3级重度损伤(不能坐.不能进食对疼痛有反 应)t4级昏迷(对疼痛无反应J,5级死亡(呼吸心跳停 止). 四,含水量测定:宴验结束后取部份前脑即刻在1, 10000克分析天平上称蔼重,并在烤箱内干燥至恒重, 按El[iott公试计算出脑组织含水量. 五,钙的测定:将部份前脑组织溶于GR的HNOa 20ml+HCLO45ml中过夜t次日小火消化.用0.2Sr (NO):三蒸水稀释定容至25m1.采用!于吸收分光 光度仪石墨炉法测定脑钙含量 六.脑组织中替氨酸(Glu).天门冬氩礁cAsp)的古 量测定:取右侧海马组织n.5g加入10高氯酸5ml, 内标物质05mlt在匀浆器内捣磨制成去蛋白的脑组 织均浆,以3000转,分离心15分钟.取上清液再行超 滤离心t最后取上清液在高效液相色谱仪上进行Glu, \sp占量测定 匕病理学检查:大体标本于宴验结束时开颅取脑 lju臻n.2c大脑盛层观察脑膨出情况=实验结束后 取部分前脑用.0福尔马林固定一切片,用HE染色在 光镜F观察. 八,统计学处理:采用方差分析后进行两两样本均 数比较t检验,所有实验数据均予正态性和方差齐性 假殳检验. 结果 一 ,神经功能评定:I组7只死亡3只.重 损伤2只.昏迷2只.?组7只死亡1只.轻损 伤1只,重损伤3只,昏迷2只.?组8只未死 亡.正常2只,轻损伤5只.昏迷1只.IV组8只 未死亡,正常3只.轻损伤1只,重损伤4只. I,?组相比P<O.05,11,IV相比P<O01均 有显着差异. 二,各组脑组织含水量及钙含量比较见表 l. 三,?,1V组脑组织中兴奋性氨基酸含量的 变化见表2.' ? 2O7? 四,病理组织.捡奄:肉眼观察见I,?组 大脑皮质从颅骨窗口处呈瘤样疝出,【组脑组 织呈苍白色,1T组呈弥散性充血状,混杂点状出 血.?及?组脑组织膨胀程度明显轻于I,? 组.光镜检查见I,?组神经细胞微汜形成?锥 体细胞固缩,染色加深,尼氏体消失t神经细胞 及毛细血管周围可见空隙.呈水肿改变,白质疏 松呈淡染色,海马组织大量细胞坏死组织充血. 上述改变在I,?组相对较轻. 表各组脑组织含水量和钙含量比较() 注:1,1及I,rq竹p<0Ol,I,?组钙古量 ::辏 轰2d织兴奋性氪基酸含量的变化(;?) I蛆 ?组 81O士o73 10.98士o513 325士053 4.26士025 注:I组与iv组比较P<O.l 讨论 一 ,深低温对缺血性脑组织损伤有保护作 用认识已久,但深低温具有许多全身性的副作 用特别是心肌损害致使它的临床应用受到极大 限制.八十年代许多实验发现轻度低温(34土 2?)即有保护缺血性脑损害的作用France将 轻度低温(体温降低3?)作用于脊髓下段缺血 兔模型上.Fritz将32~34'C的轻度低温用于 完全性脑缺血再灌注的狗模型上均了轻度 低温对缺血动物的神经功能起到保护作用_l. 本实验将轻度低温用于不完全性脑缺血及再灌 注的兔模型上,评定轻度低温对神经功能的保 护,实验发现I,?组的轻度低温组比I,?组 正常体温组的神经功能恢复较好与文献报道相 ? 208? 似.其保护神经功能的机理可能是通过改善细 胞氧化的内环境代谢过程来实现.而不完全是 降低代谢率,减少耗氧和乳酸堆积. 二,脑组织水含量可以直接反映脑水肿是 否存在本实验证实脑组织含水量?,?组分别 低于I,?组,可见轻度低温可以减轻脑缺血及 缺血后再灌注的脑水肿.Dempsy等观察低温 对脑缺血后脑水肿,白三稀Bt和6酮基前列腺 环素F含量的影响,认为低温减轻脑水肿的机 理可能是抑制具有细胞毒素作用的CO和白三 稀的释放有关.并认为可能促进缺血损伤发生 后蛋白合成后恢复. 三,当脑缺血缺氧时Ca"的跨膜梯度即迅 速下降,ca"浓度大量进人线粒体和机质网 内导致血管痉挛".特别促发微动脉痉挛血流 阻力增加,组织灌注随之减少"],造成脑再灌注 的衰竭.因此Ca增加被认为是一些病理改变 导致死亡的最后通道.过量Ca"能激发一些神 经细胞里的有害的酶酵过程,如可激活磷酸脂 酶A.,花生四稀酸增多.并进一步代谢生成前 列腺素,血栓素和白三稀等.并有氧自由基形 成.它启动膜脂质过氧化,激活蛋白酶,核酸内 切酶导致神经丝降介.微管解聚,神经元破坏, 线粒体滞钙能力降低使神经末稍去极化,答氨 酸释放增多.丽谷氨酸释放过多.叉可促进ca" 进一步内流'"].轻度低温使谷氨酸释放受抑 制,故抑制Ca内流保护了神经细胞本实验显 示轻度低温可阻抑(:a大量向细胞内流动,常 温的?组和低温的?组再灌注后含钙量存在显 着差异说明了这一点. 四,兴奋性氨基酸对脑有损伤柞用已为人 们所共知,它主要有Glut和Asp.对维持神经细 胞问突触传递,调节神经功能有十分重要的生 理作用一.兴奋性氨基酸(Glu.Asp)对神经元 起兴奋作用可使钠离子通透性增加,所以有理 由认为兴奋性氨基酸的过度释放必将增加神经 元的钠回流,造成细胞IJ,}胀,坏死?它的过量犹 如是一种神经毒素.促使}fII经元坏死"近 年来发现兴奋性氨基酸还可以通过作用于细胞 受体,使细胞膜cr和ca通道开放.引起细胞 内cl一,ca"及Na蓄积,从而对脑有兴奋毒性 作用].本实验显示轻度低温可抑制缺血所造 成的兴奋性氨基酸(Glu,Asp)从细胞内过量释 放至细胞外.从而保护了脑细胞由此预测兴奋 性氨基酸受体桔抗剂有望成为治疗脑创伤的有 效药物. 五,病理学及光镜检查可见轻度低温组的 脑组织肿胀及细胞破坏,毛细血管周围水肿等 缺血性损伤均轻于正常体温组.本实验还发现 海马组织的细胞坏死和组织充血最严重轻度 低温组海马组织受损较轻.近年研究表明海马 组织是脑内选择性的易损区],它的神经元和 胶质细胞肿胀,坏死对缺血缺氧最敏感.本实验 证实了缺血及再灌注后脑损伤最明显就在易损 区的海马组织.丽轻度低温又对其有保护作用. 可见本实验结果提示轻度低温可减轻脑缺 血及缺血后再灌注损伤,减轻脑水肿,保护脑神 经功能.轻度低温还可以降低缺血再灌注后细 胞内兴奋性氨基酸的过量释放,阻抑钙离子大 量向细胞内流动.减轻了自由基对细胞损害.对 临床应用提供了可行性. 参考文献 1强虚英免脑推一基底动脉的解剖学观察蚌埠医学院 1993I1B:107. 2杨于嘉实验性京兔急性脑水肿.湖南医学院1993?8; l7l_ 3于明琨,朱诚,张光霁,等.实验性颅脑损伤脑组织氨基酸古 量变化的意义中华神经外科杂志1994?i0:34. 4张曙,刘鸿源,柄德祖,等.兔脑缺血再灌注后J已奠地平对脑 微循环影响的实验研究中华神经外科杂志1994Il0:3l 任家顺兴奋性氨基酸在脑缺血缺氧性钙内流中的怍用国 外医学麻醉与复苏分册1992?13;279 6WhLtcB(=,nalCalciumblockersincerebralrcsuscitatiortJ TraurnRl983L23:788 7McyerFB.?LFocalcerebralischemia;Pathophvsiologic m…hnismsand:efionabforft~ureRVCnU~0ftTeatmcnt+ Ma3mClanPr0c1987:82:35. 8GcrebraIresuscitationareviewoftheIdcraturcandsynthcs~ rfuturestudies:CriCarcMed1989;1I;202 SFrancisX.Mildhypothermiaandmgprotectagainstirre— vcrsibledcmagcduringCNSischemiaStroke198415=695 10FritzSMiIdhylmthoratiocardiopulmonaryresucitatiumim 1996年幕9鞋第4 provesout?aftcrprorongedcardiaca~TCSt【【Idogs.Crit CarcMedl99lI17:379 lledaJFcatur~calciumuptakeincer曲faIlhemiaJ CercbBIcodFwMcrabl989I9:szgo 12CholDWIonicdcpendenccglutamatencurotoxicity.J N19877?369. 13RothmanSM—Glutamclcandthepothophysiology0fhyoo~i- cIscI】?bramdamageAnnNeur~L986'19105 ?209? 14MitaniACriticallevelsofextracvllularglutamatemediating gerbilhippocampalddayedneurona[deathduring}pother— mB…MJcr0d_】15StudFNewrozeience199142;651 15JOAnneEW.protectioncerebzalischcmiabybrain coilingwihtoutreducedlactateaecumnlatiorlindogsStrok 1989I20:770 (收藕1996—01一D8修回l996—03—18) 急性脑血管病血浆D一二聚体测定的临床意义 高幼奇谢旭芳王细福屈新辉张昆南赖曼硷王文丁宋小平 本文对79例急性脑血管病患者的血浆D,二聚 体(D—D)进行了检测,并对其中部分病例进行动态观 察,以拇讨二者同关系. 与方法病例组79倒,均为我院住院病人, 符合第二辑全国CVD会议制定的诊断标准,并经头颅 或MR棱查证实.其中骑梗塞鲥.男34倒,女 . 均'}斛ti11岁蕊出血.1例,男15例, 支5倒?均年龄s0_J_4岁常对照组4o例;男 .艇l:恻-平#sR.:7岁为同期体检健 蕾.赢嘲绸在发扁70小时内职静且4=血测定.其中10 捌脑塞患者3周后再次检寝ln—D采用ELISA法 检铡,试剂盒由上海捷门生物拄术公司提供. 结果1,急性脑血管病组与正常对照组血清D— D含嚣见附表.瞄梗塞组和瞄出血组血浆D—D古量 均较对照组明显升高(P<0.02,P<O05)脑梗塞组 与脑出血纽比较无显着性差异(P>0,05) 2,10倒晦梗塞患者血浆D—D古量病后3周时 (1i5?19jt较发病时(0,35土0.33)明显降低(P<o. 053.所有病例在复查对临麻症状及体征均好转. 附表急性脑血管病患者血浆D_D含量改变(?) 厦应所释放的肽片段这些凝血反应的副产品直接 反映凝血过程中某一反应阶段的活化.D一二聚体经过 共价交联形成交联纤维蛋白在纤溶酶或有关溶解药 物作用下降解而产生的特异性终末产物. 血管内皮细胞含有大量的纤溶酵激活因子,这种 激话因子可使纤溶酵原转变为纤溶酶.在急性脑血管 病时,由于出血,梗塞,血管内皮细胞损伤,致悻内激活 因子增加.其水平较正常高3,6倍(Kerno[[PBA.Br MedBull1977).这种高水平状态可持续数周或数月t 结果导致血循环中出现大量的纤溶醇t弓I起交联纤维 蛋白降解产物一血浆D—D也增加,本文所得结论符 合上述观点.我们认为急性脑血管病血浆D—D的增 高可能与以下因素有关;(1)各种原因使血管内皮细胞 损伤,致细胞内纤溶酵原激活因子直接释放入血;(2) 纤维蛋白原溶解系统是人体重要抗凝机制之一t当血 液呈高凝状态耐,机I丰为了维持凝血一抗凝二大系统 问的动态平衡,使血液恢复常态.反馈性使纤溶酶原激 活因子的产生和释放增加.上述二种原因导象血循环 中纤溶酵增加和纤维蛋白原降解加速.从而使血浆 D—D含量增加.通过对部分脑梗塞病倒血浆D—D含 量的动态观察.我们发现随着病情好转.病程延长t血 浆D—D水平较发病初期明显降低,且趋于正常.因 此.检测血浆D,D含量,对急性脑血管病的诊断,有 一 定的参考价值. (收稿1995一o6—22惨回1995—1O--09) 讨论近年来.对凝血压应的研究着重于酶水解作者单位330006龃=西省^舄医皖