【doc】免疫组化染色中消除黑色素影响的方法

【doc】免疫组化染色中消除黑色素影响的方法 免疫组化染色中消除黑色素影响的方法 临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2004Aug;20(4)?489? 免疫组化染色中消除黑色素影响的方法 徐志秀李新功丁洪基吴起嵩董艳光李爱英 【关键词】染色法;免疫组织化学;黑色素 【中图分类号】R446.8【文献标识码】B 【文章编号】100l一7399(2004)04—0489一O1 常规免疫组化通常采用辣根过氧化物酶检测系统,但在 富有黑色素细胞的病变中,如S-100蛋白,黑色素相关抗原 HMB-45等免疫组化染色阳性反应胞质中的棕黄色颗粒与 组织内原有的棕褐色的黑色素颗粒混杂在一起,不易区别, 往往给判断造成较大困难,甚至误诊.笔者利用氧化剂先将 黑色素脱色,再进行免疫组化染色,效果满意. 1材料与方法 1.1材料收集胜利油田中心医院病理科确诊及外院会诊 的黑色素细胞病变1O例,1例已知S-100强阳性的乳腺癌伴 神经内分泌分化的病例作为黑色素脱色处理对免疫组化有 无影响的对照.均系1O中性福尔马林固定,石蜡包埋,4 btm厚切片.免疫组化所用一抗S-100蛋白多克隆抗体, HMB-45单克隆抗体及EliVision试剂盒为福州迈新生物技 术开发公司产品;脱色所用的025高锰酸钾,2草酸, 1ONaOH及浓HzO.液为本实验室自备.将病例蜡块进 行再次切片并分成3组对照实验. 1.2方法(1)3组切片常规脱蜡至水;(2)第1,2组切片 分别浸于浓H.O.,2ONaOH液内处理;第3组切片用 0.25高锰酸钾处理l,2min使组织呈均匀的棕黄色时水 洗,2草酸漂白2min至组织无色.镜检脱色效果,黑色素 完全去除的切片充分水洗,PBS冲洗;(3)3H.O:处理1O min,以去除内源性过氧化物酶的活性.(4)按免疫组化常规 步骤进行,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固. 2结果 组织经浓HzOz和2ONaOH作用3h后,黑色素颜 色变浅变淡但并未去除,且组织已有脱片的迹象,无法再进 行免疫组化染色,因此前两种方法均不理想;而经高锰酸钾 和草酸处理后黑色素完全去除,仅需3,4min,免疫组化染 色过程中组织保存完好,显色清晰,在镜下控制显色时发现 切片组织由无色至部分细胞核和细胞质出现棕黄色颗粒,且 与原来黑色素细胞的位置不完全吻合,说明是真正的阳性反 应,因此是最理想的去除黑色素的方法(图1,2). 3讨论 收稿日期:2003—08一O4修回日期j2003—12—11 作者单位:山东省东营市胜利油田中心医院病理科,东营257034 作者简介:徐志秀(1975一),女,技师.Tel:(0546)8770344 图1恶性黑色索瘤组织中见大量深棕褐色黑色素颗粒 图2组织脱黑色素后免疫组化染色S-100表达阳性,S.P法 黑色素性质稳定,不溶于水,乙醇和二甲苯,因此,组织 切片中的黑色素不易除去.消除免疫组化染色中黑色素的 影响,主要从以下几个方面考虑:(1)不用DAB而选用AEC 作为辣根过氧化物酶底物:AEC显红色,与黑色素区别明 显.但AEC显色系统不常用,且必须用水溶性封片剂封固, 有条件的实验室可采用此方法.(2)有文献建议复染时不用 苏木精而采用Giemsa染液.免疫组化染色的阳性反应颗粒 经Giemsa复染后仍为棕黄色,而组织内原有的黑色素颗粒 变成绿色,二者也可区别".但Giemsa染液需先配成原液 再稀释成工作液,稀释比例及染色后用冰醋酸液分化时要严 格控制,操作繁琐.(3)先脱色除去黑色素,再进行常规免疫 组化染色.我们即采用第3种方法 文献报道用强碱或强氧化剂长时间作用可以使黑色素 逐渐漂白.本实验显示,强碱NaOH和强氧化剂HO.作 用3h后仍未除去黑色素,时间再延长可能最终会除去黑色 素,但所耗时间太长,且易使组织脱片,组织抗原也受到严重 破坏.高锰酸钾和草酸均为实验室必备的普通试剂,高锰酸 钾是强氧化剂,可将黑色素氧化,再经过草酸的还原作用使 之成为溶于水的无色物质,水洗去除,此过程仅需3,4min. 对照片显示,这种脱色方法作用时间短,对免疫组化结果没 有明显影响.因此,通过以上几种方法的比较,用025高 锰酸钾和2草酸处理去除黑色素再进行免疫组化染色,可 以有效地消除免疫组化染色中黑色素的影响,操作简单快 捷,而且节省试剂,是一种值得推荐的好方法. 参考文献 1侯建新,李素英,刘文君,等.Giemsa染色在黑色素细胞病变免 疫组化复染中的应用.临床与实验病理学杂志,1996,12(2): 178. 2王伯法,李玉松,黄高异,等主编.病理学技术,北京:人民卫生 出版社,2001j219.