盐藻β胡萝卜素（顺式）抗衰老作用研究（可编辑）

盐藻β胡萝卜素（顺式）抗衰老作用研究（可编辑） 分类号:四澌 UDC. 密级: ?州 学校代码: 】I90i 焉量大季 硕士学位论文 盐藻B胡萝卜素顺式抗衰老作用研究 张柱海 强 警 教 师 王春波教授 学科专业名酶 论文提交姻期 论文答辩蟪期 答辩委员会主席 药理学 2006.】1.24 盐藻6一胡萝卜素抗衰老作用研究 中文摘要 目的观察盐藻p一胡萝卜素8一C顺式异构体对黑腹果蝇、昆明种小鼠和sD大 鼠的抗衰老作用,并探讨其可能机制。?果蝇实验:OregonK品系黑腹果蝇 分为空白对照组只含培养基,溶剂对照组每looHlL培养基含花生油0.29,盐 藻B?C组每lOOmL培养基分别含盐藻B?C0.03、0.06、O.12、0.249,维生素E 组每100mL2喏养基分别含维生素E0.2、O.4i0.8g共9组,进行生存实验、性活 力实验和飞翔能力实验并测定头部MDA含量。?大鼠实验:54只老年sD雄性大鼠随 机分均分为6组,空白对照组普饲,溶剂对照组普饲+精制花生油50mg?kg~?d4, 盐藻B?C组普饲谧藻B?C12.5、25、50mg?kg一?d-1和VE组普饲 +VE30mg?kg~?d4,灌胃法给药45d后,测定血浆IqDA含量和GSH?px、CAT活性, 以及心、肝、肺、脾、脑MDA含量和SOD、GSH?px活性。?学习和记忆实验:设盐藻 B?c组12.5、25、50mg?kg~?d4,溶剂对照组精制花生油50mg?kg一?d。 和v啦50rag?kg~?r共5组,每组10只动物,灌胃法给药30d后,分别采用跳 台实验和Y.迷宫实验,观察盐藻13一c对正常昆明种小鼠和sD大鼠学习和记忆的影 响;并于给药30d后,分别建立东莨菪碱所致昆明种小鼠记忆获褥障碍模型、亚硝 酸钠所致昆明种小鼠记忆巩固障碍模型和20%乙醇所致昆明种小鼠记忆再现模型, 采用跳台实验,观察盐藻B?c对三种记忆获得、巩固、再现障碍模型小鼠学 习和记忆的影响。结果?果蝇实验:与对溶剂照组相比,各实验组果蝇的平均寿 命提高,P0.01,最高寿命、最短寿命、延寿率和性活力皆提高;40EI龄果蝇的能 飞率和飞翔次数均增加,Po.01;40日龄果蝇头部MDA含量减少,P0.01。?大 鼠实验:与对溶剂照组相比,各实验组血浆?A含量明显下降,PO.01,GSH-px活性 明显增加,其中25、50mg组有显著性差异,PO.01,o^吨50mg组有显著性差异, PO.01;心、肝、肺、脾、脑各组织肋A含量皆降低,SOD、GSH-px活性则皆增加, 皆有显著性差异,PO.01或PO.05。?学习和记忆实验盐藻B--C对正常小鼠和 大鼠的学习和记忆功能有明显的促进作用,与溶剂组相比差异有显著性,P0.01 或PO.05;对记忆获得障碍模型小鼠的学习和记忆功能有明显的改善作用,与溶剂 组相比有显著性差异,PO.01或PO.05;对记忆再现障碍模型小鼠的学习和记忆 功能有明显的改善作用,与溶剂组相比有显著性差异,PO.05:对记忆巩固障碍模 型小鼠的学习和记忆功能无明显改善作用。结论盐藻B?c顺式对黑腹果蝇 盐藻8~c剂量范围为100|IIlL培养基含0.03~O.249和老年sD雄性大鼠盐藻6-C 剂量范围为12.5~50mg?kg一?d.1有抗衰老作用,其可通过增加体内抗氧化酶的 活性以提高机体清除自由基的能力,并降低脂质过氧化反应而发挥抗衰老作用;盐 藻B?c作为一种抗氧化剂,在12.5~50mg?kg-‘?矿1剂量范围内,对正常昆 明种小鼠和sD大鼠以及东莨菪碱致记忆获得障碍模型小鼠和20%乙醇致记忆再现 障碍模型小鼠的学习和记忆功能有明显的促进作用,对亚硝酸钠致记忆巩固障碍模 型小鼠的学习和记忆功能没有促进作用。 硕士研究生张柱海药理学 指导教师王春波教授 关键词: 盐藻B一胡萝h素顺式;衰老:果蝇g大鼠;小鼠 Theantiagingeffectsofbeta-carotenecisisomerfrom dunaliellasa inaondrosophilamelanogasterr tsandmice ABSTRACT OBJECTIVEoinvestigatethentiagingeffectsofbeta-caroteneB-Cfromdunaliella salinacisisomeronDrosophilamelanogasters,ratsandmiceando probethepossible mechanisms.METHODSThewholestudycontainsDrosophilame nogasters experiment,ratsexperimentandlearninga dmemorizingexperiment.?Inhe Drosophilamelanogastersexp iment,Drosophilamelanogasterswerdividedintonine groupsaccordingtodifferentingredientinthenutrientmedium.Wetookfifespan,flight capability。matingfrequencyofDrosophilamelanogastersged8days,andheadMDA contentofDrosophilamelanogastersged40days勰indexofaging.?Inratsexperiment, 54agedmaleratsweredividedrandomlyinto6groupsandbredfor45dayswith differentdie .PlasmaMDA,CATandGSH?pxweredetected.MDA,SODandGSH-px inheart,liver,pulmo,lienandbrainwefealsodetected.?inlearninga dmemorizing experiment,ratsOrmicew redividedrandomlyInto5groupsandbredfor30dayswith differentdie .Andthentheffectsof$-Contheabilityoflearninga dmemorizingof no门!Ilalr tsormicew restudiedbyusingstep-downteSta dY-mazetestrespectively.In the8nineexperiment,theeffectsofB-Contheabilityoflearningandmemorizingofthree kindsofmodelrats,i.e.Scopolaminem del,NaN02modeland20%Alcoholmodelwel'e alsostudiedbyusingstep也wnteSLRESULTSComparedwithcontrolgroupin Drosophilamelanogastersexp iment,theshort stlifespan,imumlifespanand averagelifspanwereincreasedineachexperimentalgroup.Averagefifeh dsignificant difference,P0.01.Flightrateandf tfrequencywe砖significantlyllc程:ased'P 0.01.MatingfrequencyofDrosophilame nogasterswasalsoincreased.MDAWas significantlydecreased,P0.01.Inratsexperiment,plasmaMDAcontentWas significantlydecreased,PO.01.TheactivityofGSH-pxWasignificantlyelevatedin 25、50mggroup,P0.01.TheactivityofCATwasincreasedsignificantlyin50mggroup, P0.01.SimilarresultsWCl-eobtainedindifferenttissue.MDAcontentWasignificantly decreasedineachtissuesample,Po.01或P0.05。whiletheactivityofSODor GSH?pxWasignificantlyincreased,PO.01或P0.05.Inlearninga dmemorizing experiment,B?Chadsignificanteffectsonnormalmiceandrats.andcouldremarkably antagonizethememoryimpairmentinducedbyscopolaminend20%alcohol,butcould riotantagonizetheimpairmentinducedbysodiumnitrite.CONCLUSION6-Ccis isomerfromdunaliellasalinah dantiagingeffectsollDrosophilamelanogasters0.03? 0.249B-Cin100mlnutrientmediumandagedratsdoserangefrom12.5mg?kg~?d‘1to 50mg?kg一?d‘1,Thepossiblemechanismresidedinitsantioxidativeeffectowingtothe elevatedantioxidases;B-Casanantioxidantcouldimprovetheabilityoflearninga d memorizingofratsandmiceatdoser gefrom12.5mg?kg-1.d1to50mg?kg-1一d-. DirectedbyProf.Chun-BoWang, KEYWORDS:beta-carotenefromdunaliellasa ina;aging;fruitfly;rat;mouse 独创住声明 学位论文独创性声明 本人声明,所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。文中依法引 用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容来包含法律意义上已属于他人的 任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。 本人如违反E述声明,愿意承担由此引发的?切责任和后果。 论文作者签名:必艟胁日期:脚6.年夕月厂护日 学位论文知识产权权属声明 本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品,知识产权归属学校。 学校享有以任何方式发、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校 后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为 青岛大学。 本学位论文属于: 。保密 口,在 年解密后适用于本声明。 .不保密缸 论文作者签名: 导师签名: 壬 勿担海 春坡 眺彻辞少枷 嘴:御6每》?邮 ,'I刍 引言 衰老是一种自然现象,有关衰老机制的理论学说众说不一。自1956年HarmanDl” 提出衰老的自由基理论以来,关于自由基与衰老问关系的研究受到了研究者的重视。 大量实验证明自由基能通过与细胞组成物质脂类、蛋白质、核酸等发生反应。氧自 由基能使蛋白质主链和侧链氨基酸氧化,使蛋白质断裂口’31;能使多不饱和脂肪酸 PUFA发生脂质过氧化,并可引发脂质过氧化作用的链式和链式支链反应,产生 脂质过氧化产物H,习;DNA受氧自由基的攻击会引起断裂、姐妹染色体交换、突变等 [61。氧自由基对生物大分子损伤的结果是对细胞产生损害,引发一系列与衰老有关 的疾病如癌症、心血管疾病、糖尿病、白内障、老年痴呆等p。n。衰老的自由基机 制揭示,减少机体内自由基将有助于防治这些衰老性疾病。机体内有多种抗氧化酶 和抗氧化剂以清除体内过多的自由基,类胡萝卜素是人体内的脂溶性抗氧化剂,其 中最重要的是6一C。已有大量的报道显示,补充抗氧化酶和抗氧化剂有抗衰老作用, 而盐藻B?c抗衰老方面的研究在国内尚未见报道。因此,我们选用盐藻p?C顺 式异构体,观察其对黑腹果蝇、昆明种小鼠和老年sD雄性大鼠的抗衰老作用,并 对其抗衰老机制加以探讨,以期为抗衰老治疗寻找新的药物,并为盐藻B?C的应 用和推广提供理论依据。 青岛夫学硕士学iZiL-"支 第一章实验材料 1试剂 盐藻8一C,由中国科学院海洋研究所提供; 精制花生油,由青岛市植物油厂生产,溶解成所需浓度,一20?保存备; 维生素E,青岛海洋渔业公司鱼肝油厂惠赠; 丙二醛MDA、超氧化物岐化酶SOD、过氧化氢酶CAT和谷胱甘肽过氧化物 酶GSH-px试剂盒,均由南京建成生物工程研究所提供。 琼脂,日本进口,上海化学试剂厂分装; 丙酸,上海白鹤化工厂; 葡萄粉,上海化学试剂公司分装; 氢溴酸东莨菪碱sc0,北京药品生物制品鉴定所产品 亚硝酸钠NaNO:,北京化工厂生产; 无水乙醇.蚌埠化学试剂厂生产。 2仪器设备 广东LRHl50B生化培养箱; 麻醉器20一25?,湿度60?65%; 培养箱指管平底1.3×10厘米; 气浴恒温振荡器,深圳国华仪器厂生产; 751紫外分光光度计M750uvis一4型,江苏泰州无线电仪器厂生产; 小鼠跳台装置由江宁海白石药检仪器厂生产的声一光一电单向穿梭箱改装而成; 大鼠Y型迷路箱由安徽医科大学生产。 2 第。,:章实驼方浊 3实验动物 实验用野生型OregonK品系的黑腹果蝇,由山东大学生物系提供; 老年SD雄性大鼠20?24月龄,485?5409,由山东大学实验动物中心提供; 试验动物昆明种小鼠18?229,雌雄各半;由山东大学医学院实验动物中心提 供; sD大鼠200?2509,雌雄各半,由山东大学医学院实验动物中心提供。 ,4动物饲料 果蝇堵养基含玉米粉109、麸皮29、红糖13.59,琼脂1.59,鲜酵母79水669; 大鼠饲料%小米粉20,机米粉24,麦麸5,鱼粉8,蛋黄粉3,黄豆粉5.5, 绿豆粉5,酵母粉2,小米0.5,鱼肝油2,麻油3,骨粉1,食盐1, 清洁饮水和适量的青菜。 小鼠饲料%麦粉18,面粉18,豆粉18,玉米粉18,米粉18,鱼粉8,骨粉 1,酵母粉1,清洁饮水。 第二章实验方法 1果蝇实验 1.1动物分组和处理 收集10h孵化出的健康果蝇,乙醚麻醉,区分雌雄并分别培养于1.3×10cm的 指管,每管50只。每试验组400只,雌雄各半。指管内培养基厚度为O.5一lcm, 每5d更换一次培养基。设空白对照组只含培养基;溶剂对照组每100mL培养 基含花生油0.29;盐藻g-C组每100mL培养基分别含盐藻6420.03、0.06、0.12、 0.249;维生素E组每100mL培养基分别含维生素E0.2、0.4、0.89,共九组。 1.2生存实验 青岛凡学碗1:学位论文 观察每组果蝇的最短寿命,最高毒命和平均寿命。-Jt4V算延毒率。立放培养, 每门定时2次统计果蝇死亡数,每组第一只死亡的成虫寿命为该组的最短寿命,最 后一只死亡的成虫寿命为该组的最高寿命。平均寿命各组果蝇寿命和?该组果蝇 总数。延寿率各实验组平均寿命一溶剂对照组平均寿命?溶剂对照组平均寿命。 1.3性活力实验 每组取8日龄雌蝇90只,雄蝇60只,分别移入空指管中,每指管中雌蝇30只, 雄蝇20只,观察各组在11min内交配的果蝇数。 1。4飞翔能力实验 取40目龄果蝇进行实验,在室温25?,一定时间内逐个实验尚存果蝇飞翔能 力。以能自动从培养管飞至空管的果蝇数作为能飞数,求出能飞率,能飞率各组 能飞数?该组40日龄果蝇数;再计各组空管中果蝇5min内的飞翔次数,求出每管 每分钟每个果蝇的飞翔次数。每分钟每个果蝇的飞翔次数各组空管中果蝇5min 内的飞翔总次数?该组空管中的果蝇数?5 1.5果蝇头部MDA含量测定 处死40日龄果蝇,取头部精密称量,低温40C制备组织匀浆,测定其MDA含量。 2大鼠实验 2.1动物分组与处理 54只老年sD雄性大鼠随机分均分为6组。空白对照组I普饲,花生油溶剂 对照组普饲+精制花生油50rag?kg一?d4,盐藻B一胡萝h素组普饲+盐藻84212.5、 25、50mg?kg一?d4,VE组普饲+VE30mg?kg~?d4。灌胃法给药,连用45d, 灌胃容量lml/1009。末次给药后取血4-8ml,同时取心、肝、肺、脾、脑,低温4 ?制备组织匀浆。测定血浆MDA含量和GSH-px、CAT活性,以及心、肝、肺、脾、 4 第-2章实骏办。法 脑各组织MDA含量和SOD.GSH?px活性。 2.2MDA含量测定 丙二醛MDA可与硫代巴比妥酸TBA缩合,形成红色产物,532nm在处有最 大吸收峰。依公式:MDA含量mmol/gprotein测定管的吸光度一测定空白管的 吸光度?管吸光度一标准空白管吸光度×标准品浓度?蛋白含量。计算 MDA的含量。 2.2 GSH?px活性测定 谷胱甘肽过氧化物酶GsH.f'x可以促进过氧化氢与还原型谷胱甘肽反应生成 H20及氧化型谷胱甘肽,GSH-px的活力可用其酶促反应的速率来表示,测定此酶促 反应中还原型谷胱甘肽的消耗,可求出此酶的活力,计算时扣除非酶促反应引起的 还原型谷胱甘肽减少的部分。每毫克蛋白每分钟扣除非酶反应的作用,使反应体系 中还原型谷胱甘肽浓度降低1斗mol?L.1为一个酶活力单位u。按公式:GSH-px活 力0cu/8protein俳酶管A412值一酶管A4l细值?标准管Am值一空白管A412 值x标准管浓度20斗tool?L-1×稀释倍数x5?蛋白含量?反应时间,计算GSH-px 活力。 2.3 CAT活性测定 过氧化氢酶CAT/Ij'解H202的反应可通过加入钼酸铵而迅速终止,剩余的H202 与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物,在405nm处测其生成量,按公式:CAT活 力kWgprotein空白管的吸光度一样品管的吸光度×271+60秒?50“L 样本中的蛋白毫克数,求出其活力。每毫克蛋白每秒钟分解的量为一个活力单位。 2.4 SOD活性测定 5 青岛久学硕J:学蟛论支 通过黄嘌呤及黄嘌岭氧化酶反应体系产生超钣剐离子岛l基,后者氧化羟胺形 成驱硝酸盐,在显色剂的作用下呈紫色,用可见光分光光度计550nm测其吸光度。 SOD对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测 定管的吸光度值低于对照管的吸光度值。活力单位定义为每毫克蛋白在lml反 应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个亚硝酸盐单位,通过公式:总 SOD活力kNU/gprotein对照管吸光度一测定管吸光度?对照管吸光度值? 50%×反应液总体积?取样量?蛋白含量,求出被测样品中的SOD活力。 3学习和记忆实验 3.1正常小鼠学习和记忆的检测50只昆明种小鼠随机均分为5组,低、中、高三 实验组给药剂量分别为:12.5、25R50mg?kfl?d1,另设溶剂照组精制花生油 和?阳性对照组VES0mg?kg"1?d-1o连续灌胃给药30d,于末次给药后1h进 行训练。将小鼠置于反射箱内适应5min后,轻放于平台上,记录小鼠停留在平台上 的潜伏期SDL。小鼠从平台上跳下、四肢触及铜栅时,立即给予40V电流刺激, 记录小鼠逃避至平台上的潜伏期EL,同时记录5min内小鼠从台上跳下的触电次 数即错误次数o选取SDLTAIEl_在2-60s的小鼠,于训练后24h进行测验记录小鼠3 rain内的跳台错误次数、SDL和EL。测验时,若小鼠停留在台上超过3min,将其取 下放入箱内一角,尾对平台,给予电刺激,记录EL。 ’ 3.2小鼠记忆障碍的检测昆明种小鼠随机分为6组,每组10只。实验组分低、中、 高3个剂量组,给药剂量分别为:12.5、25和50mg?k91?d-I,并设溶剂对照组精 制花生油、病理模型组精制花生油和VE阳性对照组VE50mg?kg-1?d1。 连续灌胃给药30d,于末次给药后lh进行训练并进行以下实验。 3.2.1小鼠记忆获得障碍的检满除溶剂对照组外,于训练前15min给予其它各组小 6 第。二章实验疗法 鼠滟胃氧澳酸东廷蒋碱lmg?kg。形成记忆蔹掰障碍模型,按3.1的疗法训练及测 验,记求SDL、EL和错误次数。 3..2.2小鼠记忆巩固障碍的检测除溶剂对照组外,其它各组小鼠于训练后立即给予 NaN02120mg?kfl形成记忆巩固障碍模型。按3.1的方法测验并记录SDL、EL和 错误次数。 3.2.3小鼠记忆再现障碍的检测除溶剂对照组外,其它各组小鼠于训练后24h、测验 前10min,给予灌胃20%Z,醇10IIll?k94形成记忆再现障碍模型。按3.1的方法测 验并记录SDL、EL和错误次数。 3.3正常大鼠学习和记忆的检测50只SD大鼠雌雄各半,随机均分为5组。实验 组分低、中、高3个剂量组,给药剂量分别为12.5、25和50mg?l【旷1?d-1,另设 溶剂对照组精制花生油和VE阳性对照组?50mg?kfl?d1o连续灌胃给 药30d,末次给药后1h,将大鼠置于迷路箱支臂中,适应5mill。另两支臂的其中 一支臂呈现灯光不通电,作为安全区,58后给予大鼠70v电流刺激,直到大鼠 逃避到安全区为止,灯光再保留108,然后熄灯完成1次测试。大鼠到达安全区的 支臂即为下一次测试的起步位置,两次训练间距30s,共计lO次。记录错误反应次 数,作为学习成绩,24h后重复以上实验,作为大鼠的记忆成绩。 4统计学方法 计量资料数据以i?j表示,并用SPSSl0.0软件进行方差和q检验. 自岛夫学硕1学f矗i仑义 1果蝇实验 1.1果蝇寿命观察结果 第三章实验结果 与溶剂组相比,盐藻B?c各实验组果蝇的平均寿命、最高寿命、最短寿命和延寿 率皆有提高,平均寿命有显著差异,PO.01;VE各剂量组与溶剂组相比平均寿命有 提高,差异有显著性,P0.01。见表1.1。 表1.1盐藻B-胡萝h素对果蝇寿命的影响 Tabl.1TheeffectsofB-Cfromdunalidlasalinaonlifespanoffruitflies 组别 果蝇数 平均孝,‘8’ 最高寿命 最短寿命d延寿率%一. . 延寿率% , 善7J’ d 空白组 380 溶剂组 389 B.Co.03 398 O.06 392 O.12 387 0.24 390 VE0.2 386 O.4 388 0.8 382 41.16?9.6l 50.37+8.40。 52.26投13“ 49.92?7.95” 46.18t:10.06“ 51.66?7.80” 52.17?11.00” 47.08?lj.20” 6:2 洼:”JP《0.01vs溶剂组 8 6 6 O 8 l 7 ? 一 一 孤 孤 娩 j 孤 觋 扭 0 m 雳 烈 拍 弛 孔 ” M n 珐 毋 酊 配 甜 粥 部 第::章实验结果 1.2果蝇飞翔能力观察结果 , 与溶剂组相比,盐藻13一C各实验组40口龄果蝇的能飞率和飞翔次数均增加,皆有 显著性差异,差异有显著性,P0.01;VE各剂量组与溶剂组相比,能飞率和飞翔 次数亦均增加,差异有显著性,P0.01。见表1.2。 表1.2盐藻6.胡萝卜素对果蝇飞翔能力的影响 Tabl.2Theeff ctsof8-CfrontdunaUellasalina?flightcapabilityoffmitflies 注:”P‘O.01vs溶剂组 1.3果蝇性活力观察结果 与溶剂组相比,8目龄果蝇的性活力有明显提高。见表13。 表13盐藻嗍萝b素对果蝇性活力的影响 Tab1.3TheeffectsdB-CfromdunaUeUasalina011sexualac廿vityoffruitflies 9 青岛人学硕卜学位论文 O.12 O.“ VE0.2 o-4 0.8 80 70 83 89 80 33.3 16.6 38.3 48.3 33.3 1.4果蝇头部MDA含量测定结果 与溶剂组相比,盐藻B?c各实验组40日龄果蝇头部MDA含量减少,皆有显 著性差异,P0.01。VE各剂量组与溶剂组相比MDA含量亦减少,P0.01。见表 1.4。 表1.4盐藻I-胡萝h素对果蝇头部MIA含量的影响i?5 Tabl.4qlmeeffectsof8七fromdunalieilasalinaonheadMIAoffruitfliesii?5 2大鼠实验 MDAttmol/g 李白绢 1230.5-J:104.o 溶翅组 1197.4?113.6 垂C0.03 904.8?93.1.’ 0.16 872.3?100‖ O.12 787.5-J:82.9” o.24 706.4i9s.2'‘ VE0.2 889.4-2:108.8辩 0.4 753.1士87.9” 0,8 714.7?113.3” 注:“P0.01vs溶剂组 2.1老年大鼠血浆MDA、GSH-px、CAT活性的测定结果 与溶剂组相比,盐藻p?C各实验组老年大鼠血浆MDA含量减少,皆有显著性 差异,PO.01iGSH-px活性在25rag、50mg组增加,差异有显著性P0.01;CAT 10 第三章实验结粜 活性在50rag纽增JJIl,蓐片行艟著杓jP0.01。VE组’j溶剂组棚比,MDA含量减少, 差芹仃显著性P0.01;GSH?px、CAT活性增肌皆ff艟著性差异,PO,们。见表 2.1。 表2.1盐藻肛胡萝h索对老年大鼠血浆MDA,GSH.px、CAT含量的影响n9,一X?s Tab2.1Theeffeasatp42fromduaaliella髓H啪彻pIasmaMDA、GSH-px、CATofrats n9,工?s 注:”P‘0.Olvs溶剂组 2.2老年大鼠脑MDA、SOD、GSH-px活性的测定结果 与溶剂组相比,盐藻B?c各实验组老年大鼠脑MDA含量减少,皆有显著性差 异,P0.01;皆有显著性差异,P0.01。VE组与溶剂组相比,MDA含量减少,P O.01;SOD、GSH-px活性增加,皆有显著性差异,P0.01。见表2.2。 表2.2盐藻B一胡萝h紊对老年大鼠脑MDA、SOD、GSH.1ax含量的影响n9,;?sTab2.2 TheeffectsofB42fromdunaliellasalinaonbrainMD丘、SOD、GSH-pxofratsn.9。;?s 组别?唧岖哪o?fnlSODIl,mgproteinOSH-pxu/mgprotein 空白组 溶剂组 fi-C12.5mg 25rag 36.9-y3.8 37.4:t6.1 29.3士4.8“ 21.7?8.矿 20.1jt:2.9 2.3l蜘.47 18.6.1:5.3 2.40蝴.63 27.7:t,6.2“ 3.07:t:0.5s时 34,8?7.4” 3A2_+0.70‘’ 肯岛久学硕J‘学待论文 50rag VE30mg j8.I+7.2“ 22.5?6,9“ 40.6+4.7“ 35.I?5.5” 3.95曲.52” 3.6I如.36.‘ 注:”P0.01VS溶剂组 2.3老年大鼠肝MDA、SOD、GSH.px活性的测定结果 与溶剂组相比,盐藻B?C各剂量组老年大鼠肝MDA含量减少,皆有显著性差异, P0.01;SOD、GSH-px活性增加,皆有显著性差异,其中12.5mg组P0.05,25rag、 50mg组P0.01。VE组与溶剂组相比,MDA含量减少,P0.01;SOD、GSH-px 活性增加,皆有显著性差异,P0.01。见表2.3。 表2.3盐藻l蛐日萝h索对老年大鼠肝MDA、SOD、GSH-px、含量的影响n:9,x?s Tab2.3TheeffectsofB-Cfromdunaliellasalina蚰liverMDA、SOD、GSFI-pxofratsn9,J ?s 注:’P0.05,“P0.01”溶剂组 2.4老年大鼠心脏MDA、SOD、GSH-px活性的测定结果 与溶剂组相比,盐藻13一C各实验组老年大鼠肝MDA含量减少,皆有显著性差 异,P0.01;SOD活性增加,其中12.5mg组P0.05,25mg、50mg组P0.01; 12 第j章实聆结粜 GSH?px活性增加.皆行显籍他差拧.P0.05,VE组‘J溶寿l旧持比.MDA禽量减 少,差异有撞箬性P0.01;SOD、GSH?px活11增加,杼有显著性差异,P0.05, 见表2A。 表2.4盐藻f?胡萝b索对老年大鼠心脏MDA、SOD、GSH-px含量的影响n9,x?s Tab2』lTheeff cts0fBCfromdunalidlaealinaonheartMDA、SOD、GSH?pxatrats n9,工?s 注:。P0.05,”Po.OlVS溶剂组 2.5老年大鼠脾MDA、SOD、GSH-px活性的测定结果 与溶剂组相比,盐藻B?c各剂量组老年大鼠脾MDA含量减少,皆有显著性差 异,其中12-Stag组P0.05,25rag、50rng组P0.01;SOD话性增加,其中12.5rag 组P0.05,25mg、50mg组P0.01;GSH-px活性25mg、50rag组增加,皆有显 著性差异,P0.01,12.5mg组亦增加,但无统计意义。VE组与溶剂组撼比,MDA 含量减少,差异有显著性PO.01;SOD、GSH-px活性增加,皆有显著性差异,P 0.Ol。见表2.5。 13 塞鱼叁兰堡主兰!!!!茎 表2.5盐藻限胡萝h素对老年大鼠脾MDA、SOD、GSH.px含量的影响n:9,一X?s Tab2.5TheffectsofB-CfromdunaliellasalinaOil ienMDA、SOD.GSH-pxofrats n9.J?s 望型!竺!兰竺!!里!!竺!!!竺!:!!!!!!!!:坚!!!! 空白组 溶剂组 岱-C12.5鹅 25rag 50mg 25.1?3.5 13.2?4.8 4.3?1.i 24.6?4.4 22.5?4.2+ 14.3?3.6 4.7?1.4 15.9?3.3‘ 5.3?1.0 20.1?3.6” 18.8?4.1.‘8.6?1.7 19.0?2.5“ 20.5?3.5“ 9.4?2.1“ VE30mg 21.3-'-4.3“ 16.8?4.1“ 6.4?1.6” 注:’pO.05,“P0.01w溶剂组 2.6老年大鼠肺MDA、SOD、GSH-px活性的测定结果 与溶剂组相比,盐藻8一C各剂量组老年大鼠肝MDA含量减少,皆有显著性差 异,其中12.5mg组P0.05,25rag、50mg组P0.01;SOD、GSH-px活性增加, 皆有显著性差异,其中12.5mg组P0.05,25rag、50mg组PO.Ol。VE组与溶剂 组相比,MDA含量减少,差异有显著性P0.01;SOD、GSH-px活性增加,皆有显 著性差异,P0.Ol。见表2.6。表2.6盐藻髓胡萝F燃KWMDA、SOD、GSH-px、含量的影响n-9,; ?s 髓b2.6TheeffectsofB-CfromdunaliellasalinaOlDimlmnMDA、SOD、GSH-pxofra缸 n9,工:ItS SOD曲llgwoteinGSH-pxu/mgprotc4n 空白组 8.9+-2.3 11.5ac.3.2 2.6-'x0A 溶剂组 9.4-+-2.1 12.3?2.8 2.8:t:O.3 14 第静实骏站粜 B?C12.5mg 25rag 50mg VE30mg 7.2-+2.4’ 5.64.1.9’‘ 4.14.1.0’’ 6.84.1.4” 14.6--.2.7’ 15.9?2,I” 17.2?2.3” 14.9?2.2” 4.5?【.7+ 5.9如.3“ 6.8如.4“ 4.8?o.2“ 注:’P‘o.05,“P0.01vs溶剂组 3学习和记忆实验 3.1盐藻B?C对正常小鼠学习和记忆的影响与空白组比较,训练时,B?C三 个剂量组小鼠的跳台错误次数明显降低,差异有显著性,PO.Ol,高剂量组小鼠 三 . EL明显缩短,差异有显著性,P0.05;测验时高剂量组的小鼠跳台错误次数明显 降低。差异有显著性,P0.05,中、高剂量组小鼠EL明显缩短,差异有显著性, 尸0.05,而SDL未见明显差异。VE组与空白组比较,训练时小鼠的跳台错误次数 明显降低,差异有显著性,P0.01,EL明显缩短,差异有显著性,P0.05;测验 时小鼠跳台错误次数明显降低,差异有显著性,P0.05,EL明显缩短.差异有显 著性,P0.05,丽SDL未见明显差异。见表3.1。 表3.1盐藻B?C对正常小鼠学习和记忆的影响n10,工?S Tab3.1The栅融豳硝8-Cfrom“聃l髋a?li硇?tlmabilityocle?angandmemermnget' ?咖aImi。en:10,;?s 溶剂组 2.3:1:0.8 1.210.9 13.3:t5.7 91.8t-67.62.8+1.3 13一c12.5mg i.14.0.3“O.7a:0.2.12.2蚂.8 103.84-70.92.5-a:i.6 15 青岛天学碗1:学住论文 B?cS0mg VE50mg 1.4?O.4“0.61-0.3.10.7?7.3 123.6?54.31.6?【1,6‘ I.2缸.5“0.420.2‘6.823,4‘ I23.5+73.2J.6?0,7‘ 1.320.4”0.7h02‘14.926.7105.&一2.4 1.7如.5‘ 注:‘P0.05,”P0.Olvs溶剂组 3.2盐藻8一C对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的影响与病理模型组比较,测验 时盐藻B-C三个实验组小鼠的跳台错误次数明显减少差异有显著性,JP0.05或P O.01;中、高剂量组小鼠$DL明显延长,PO.05或P0.01,EL明显缩短,差异 有显著性,PO.05。VE组与模型组比较,小鼠的跳台错误次数明显减少,差异有 显著性,P0.05,而EL明显缩短,差异有显著性,P0.05见表3.2。 表3.2盐藻8一C对东莨菪碱致小鼠记忆获得障碍的影响n10,z士S Tab3.2Theeffectsofp-CfromdunalialasaUnaontheabilityofk蛆i?gandmemor啦agor miceinscop。lanIinemod ln10,;?s‘ 注:‘P0.05,”P‘0.Olvs溶剂组;’Po.05,”Po.Olvs模型组 3.3盐藻B?C对NAN02致小鼠记忆巩固障碍的影响与病理模型组比较,测验时 B?C各实验组小鼠的跳台错误次数、SDL和EL均无显著差异。VE组与模型组比较, 16 第v三章实验结果 小鼠的跳台错误次数、SDL和EL亦均无显著差并。见表3.3。 3.4盐藻6一c对20%乙醇致小鼠记忆再现障碍的影响与模型组比较,测验时, . 一 f‖ 盐藻6.c中、高剂量组小鼠跳台错误次数明显减少,差异有显著性,P0.05,而 SDL明显延长,差异有显著性,P0.05;高剂量组小鼠EL明显缩短,差异有显著 性,P0.0。VE组与模型组比较小鼠跳台错误次数明显减少,差异有显著性,P 0.05,而SDL、EL无显著性差异。见表3.4。 3.5 13一C对正常大鼠学习和记忆的影响与空白组比较,训练时和测验时B 三 个实验组大鼠的错误次数均明显减少,差异有显著性,PO.05或P0.01。VE组 与空白组比较,训练时和测验时大鼠的错误次数均明显减少,差异有显著性,P0.05 或P0.01。见表3.5。 表3.3盐藻B?c对NaNOz致小鼠记忆巩固障碍的影响n10,J?s Tab3.3TheefleetsofB-Cfromdunaliellasaliu伽theab锄yofleaningandmmrm雌of miceinlqaXXzmoddn10,;?s 注:‘P0.05VS溶剂组 17 青岛大学硕L学位论上 表3.4盐藻13一C对20%乙醇致小鼠记忆再现障碍的影响n:lO,;?SJ Tab3.4Theffectsof8-Cfromdunalidlasalina011theabilityofleaningandmemorizingof micein20%alcoh01modeIn:10,;?S 注:‘P0.05?溶剂组;。P0.05VS模型组 表3.5 B,c对正常大鼠学习和记忆的影响n10,;?s Tab3.5Theffectsofp-Cfromdunaliellas naOntheabitityofkIni哩andmemorizingof itorlnmratsnIO,;?S 溶剂组 B?C12.5mg B?c25mg B?c50mg VE50mg 5.6?1.6 3.9?1.6. 3.7?1.y 2.9-j:1.7. 4.0-j:1.2’ 4.3+1.2 2j9?1.7. 2.5?1.2.’ 2.5-J:I.0? 2.8:t:1.6” 注:‘户o.05,“Po.01vs溶剂组 18 第心章讨沧 第四章讨论 B?C是生物体内重要的脂溶性抗氧化剂之一,其主要的生物活性之一是能淬 灭单线态氧,清除机体内自由基,防止脂质过氧化反应,减轻氧化应激对机体的损 伤。自由基是能独立存在的,含有一个或一个以上不配对电子的任何原子或原子团。 人体内总自由基中约95%以上属于氧自由基,因此氧自由基对人体有着特殊的意义。 生物体在代谢过程中通过酶系统或非酶系统生成大量的活性氧自由基nLi3],陈瑗和 周玫【1卅在其著作中总结了氧自由基的类型,主要有:?氧的单电子还原物如超氧阴 离子0‘:?和o-?,以及它们的质子型氢过氧基H02?和羟自由基?OH; ?氧的双电子还原物过氧化氢H20:;?烷烃过氧化物ROOH及其均裂产物烷氧基 Ro?和烷过氧基R00?;?处于激发态的氧0+、单线态氧i02和羰基 化合物;?由0’:?和氮自由基No反应生成的过氧亚硝酸ONOOH;?由髓过氧化 物酶一H202一C1系统生成的次氯酸HOCI。氧自由基含不配对电子,性质活泼,在 机体内有很强的氧化反应能力,且易产生连锁反应,对蛋白质、核酸、脂质等产生 损伤作用。自由基与上述生物大分子的作用会引起一系列与衰老有关的疾病如动脉 粥样硬化、中风、癌症、关节炎、自内障、肺病等。自1956年Harm