BCA法测蛋白浓度

BCA法测蛋白浓度 【目的】:掌握BCA法测定蛋白质浓度的原理。 【原理】: BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为 2++苹果绿，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu还原为Cu， +一个Cu螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。 【操作】 标准曲线的绘制:取试管七支、编号，按下表操作: 【计算】 (一) 绘制标准曲线。 (二) 以测定管吸光度值，查找标准曲线，求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。 (三) 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。 【优缺点】 (一) 操作简单，快速，45分钟内完成测定，比经典的Lowary法快4倍且更加方便; (二) 准确灵敏，试剂稳定性好，BCA试剂的蛋白质测定范围是20-200μg/ml，微量BCA测定范围在0.5-10μg/ml。 (三) 经济实用，除试管外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量; (四) 抗试剂干扰能力比较强，如去垢剂，尿素等均无影响 【器材】 (一) 7220型分光光度计 (二) 恒温水浴箱 (三) 中试管7支 (四) 枪式移液管 【试剂】 1、 试剂A:1,BCA二钠盐 2,无水碳酸钠 0.16%酒石酸钠 0.4,氢氧化钠 0.95,碳酸氢钠 混合调PH值至11.25。 2、 试剂B:4,硫酸铜。 3、 BCA工作液:试剂A 100ml ， 试剂B 2ml混合。 4、 蛋白质标准液:用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的蛋白质 标准液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定) 5、 待测样品:用双缩脲测定法的样品稀释而成。 此法测定蛋白质浓度，近些年被科研工作者广泛选用。目前BCA法的试剂盒市面有售。 总之，虽然蛋白质含量的测定方法很多，但是，还没有一个完美的方法。在选择测定方法时， 可根据实验要求和实验室条件决定。