FDA沙门氏菌检测方法

FDA沙门氏菌方法 沙门氏菌属简介 1880年E. Berth首先发现伤寒沙门氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪霍乱沙门氏菌，以后取Salmon氏之名为本菌属之名。 沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现2000多个血清型，我国已发现血清型近200个。 沙门氏菌属——生物学特性 形态特征: 革兰氏阴性，大小为1~3×0.4~0.9μm的两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。 培养特性: 沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10-42 ?都可生长，最适生长温度为37?，最适pH为6.8~7.8。 营养琼脂平板上:35~37?培养18~24h，其菌落大小一般为2~3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。 血平板上:中等大小的灰白色菌落。 沙门氏菌属的抗原 菌体抗原(O抗原) 面抗原(K抗原):Vi抗原和M抗原 鞭毛抗原(H抗原) 纤毛抗原 FDA BAM沙门氏菌检验流程 1、 前增菌:25g样+225mL乳糖肉汤 (肉制品、肉副产品、动物产品)，匀质2min，室温放置60 ?5min，混合均匀，测定调节PH6.8 ?0.2，在35?下培养24 ? 2h。 2、 选择性增菌:(1) 0.1ml+10mlMM(RV)在，42?下培养24h。(水浴培养) (2)1ml+10mlTTB，?在43?下培养24h(水浴培养)?含菌量低 ?在35?下培养24h?含菌量高 3、分离培养:选择含菌量高的划线接种，选择性培养基(BS、XLD、HE)在35?下培养24~48h(BS) 4、生化鉴定:(1)每个平板挑取至少2个可疑菌(包括典型和非典型各2个)，接种TSI三糖铁、LIA赖氨酸铁高层斜面(LIA高层深4cm)，(松盖以保持有氧条件防止产生过多HS)，在35?下培养24?2h。 2 (2)尿素酶试验:?阳性:弃去。 ?阴性:卫矛醇、 氰化钾、丙二酸钠、吲哚试验 5、血清学:血清学试验——沙门氏菌的分类 6、报告结果。 ISO6579沙门氏菌检验流程 1、前增菌: 25g样+225mLBPW，匀质，在37?1?下培养18 ? 2h。 2、选择性增菌:(1)0.1ml+10mlRVS，在41.5 ? 1?下培养24 ? 3h(水浴培养)。 (2)1ml+10mlMKTTn，在37 ? 1?下培养24 ? 3h。 3、分离培养:划线接种选择性培养基(XLD和第二种选择性培养基，如 BS)，在37?下培养24~48h(BS)，每个平板挑取至少5个可疑菌进行纯培养和确认试验，在37?下培养24?3h。 4、生化鉴定:TSI、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、β-牛乳糖、V-P、 吲哚试验。 5、血清学:血清学试验——沙门氏菌的分类 6、报告结果。 沙门氏菌检验选择性分离培养 XLD琼脂: FDA BAM——典型菌落:粉色菌落，带或不带黑色中心。许多沙门氏菌培养物可呈现大的具光泽的黑色中心或几乎为全部黑色的菌落。 ——非典型菌落:黄色带或不带黑色中心。 ISO——中心黑色、周围由于指示剂颜色的改变而出现红色的轻微透明带。 菌名 菌落形态 鼠伤寒沙门氏菌 红色，有黑心 伤寒沙门氏菌 红色，有黑心 弗氏志贺氏菌 红色 大肠埃希氏菌 黄色，有胆盐沉淀环 粪链球菌 - 沙门氏菌检验选择性分离培养 BS琼脂: FDA BAM——典型菌落:产硫化氢菌落黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围的培养基通常开始呈褐色，但伴随培养时间的延长而变为黑色，并有晕环效应; ——非典型菌落:有些菌株不产生硫化氢，形成灰绿色菌落，周围培养基不变色。 沙门氏菌检验选择性分离培养 HE琼脂: FDA BAM——典型菌落:兰绿色至兰色，多数菌株产硫化氢，菌落带或不带黑色,中心或几乎全黑色。 ——非典型菌落:乳糖阳性的菌株为黄色中心黑色或全黑色。 沙门氏菌检验生化鉴定 TSI: 典型反应:斜面产碱(K):红色;底部产酸(A):黄色;产HS:黑色(少数不产) 2 沙门氏菌检验——几点注意 冷冻样品解冻需在45?以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2-8?，18小时内软化。 –为保证检验的准确性，必须在选择性培养基上挑取足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。 进行生化反应时，应以纯培养物进行试验，如出现血清学阳性，而生化反应特征不符合时，应对接种物进行纯化，用纯化后的培养物重新进行生化试验。 –测试中应同时接种阳性对照菌株。