精品牛血清白蛋白血清白蛋白血清白蛋白偏高血清白蛋白

精品牛血清白蛋白血清白蛋白血清白蛋白偏高血清白蛋白 第,,卷，第,期 光谱实验室 ,,,(, ,，,,(,, ,(, ,年,月 ,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,;,,,,;,,, ，,,,,,,,,,, ,,,;,，, , , , 荧光法研究左氧氟沙星与人血清白蛋白 作用机理及含量测定 陈玉海 张彦青“赵风利“刘保生, (保定职业技术学院河北省保定市,,,,,,) ,(河北大学理化分析中心河北省保定市五四东路,,,号,,,,,,) 摘 要利用荧光及紫外光谱法研究了水溶液体系中左氧氟沙星(,,,,)与人血清白蛋白(,,,)的 相互作用机制。结果明左氧氟沙星对人血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用，其猝灭类型主要为静态猝 灭。在不同温度下求得了左氧氟沙星与人血清白蛋白的结合常数正(发现随反应温度上升正值下降。由热力 学参数(确定了左氧氟沙星与人血清白蛋白的结合作用主要为色散力。用同步荧光技术考察了左氧氟沙星 对入血清白蛋白构象的影响(又根据,,,,,,,,理论，测得了左氧氟沙星与入血清白蛋白结合的能量转移效 率(相互结合距离。进一步证明了该反应是单一静态猝灭过程(阐述了其猝灭机理是通过能量转移产生的。 研究发现人血清白蛋白荧光猝灭程度的对数与左氧氟沙星含量有良好的线性关系，,, ,时线性范围为: ,(,×,,“一,(,×,,(,,,,,?,,，检出限为,(,×,,,,,,,,?,,(用于片剂中左氧氟沙星含量的测定结果 满意，相对偏差为，,(,,,,,(,,(回收率为:,,(,,一,,(,,( 关键词荧光猝灭(左氧氟沙星(人血清白蛋白(机理。 中图分类号;,,,,(,, 文献标识码:, 文章编号:,,,,—,,,,(,,,,),,一,,,,—,,, 前言 白蛋白是主要的血清蛋白，可与许多内源性或外源性化合物结合，从不同角度研究其与小分子的相互作用，对于阐明药物的运输与代谢过程及了解蛋白质的结构与功能是很重要的。药物进入人体后，总要通过血浆的贮存和运输，到达受体部位并发生药理作用，多数有机药物在血浆中都或多或少地与血浆蛋白(主要是白蛋白)结合，结合后的药物不易穿透毛细管壁，限制其进一步运输，这对药物在体内的代谢和分布产生了重要影响。另外，药物与白蛋白结合后，使药物存留于血浆中，以减弱药物的最大作用强度，防止作用大幅度波动以及延长药物的作用时间〔,?,,。因此，研究药物与白蛋白的结合是药物动力学及临床药理学的重要内容，已经成为引入注目的课题。荧光法是研究生物大分子与小分子、离子相互作用的重要手段。荧光测试中的发射峰特征、荧光偏振、能量转移及荧光寿命等指标可以对蛋白质分子中荧光生色基团的结构及其所处的微环境提供有用的信息。左氧氟沙星是喹诺酮类广谱抗菌剂。对革兰阴性菌、革兰阳性菌及部分厌氧菌均显示强力的杀菌活性。对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、耐氨苄青霉素的流感杆菌及吡哌酸的大肠杆菌及对其他药物耐药的细菌的抗菌效力优于大环内酯类抗生素。本文应用荧光技术对,,,,与,,,之间的结合反应及能量转移效率进行了研究，得出了,,,,与,,,结合反应的结合常数、结合热力学函数参数，为探讨在,,,,作用下,,,构型的变化，阐明,,,,在人体内的储存方式、传输机制及药理作用?联系人，电话:(,,,,),,,,,,,，,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,作者简介:陈玉海(,,,,一)(男，河北省保定市人，高级讲师(主要从事分析化学研究工作(收稿日期:,,,,—,,一,,;接受日期:,,,,—,,—,, 万 方数据 光谱实验室 第,,卷等提供重要信息。这对阐明药物在体内的输送和代谢过程，了解药物分子在生物体 中的作用是很重要的。, 实验部分,(,仪器与试剂 ,,一,,,型荧光光度计(带恒温装置，日本岛津公司);,,一,,,型紫外分光光度计(日本岛津公司);人血清白蛋白(,,,)水溶液(北京双旋微生物基地):称取,(,,,,,于,,,,～。容量瓶中，以水定容，浓度为,(,×,,？,,,,?,,;左氧氟沙星(，。,,,)水溶液:准确称取一定量经,,, ,恒重的左氧氟沙星对照品(中国药品生物制品检定所)，配成,(,×,,,,,,,,?，，,,的水溶液;三羟甲基氨基甲烷一盐酸(,,,,—,,,)缓冲溶液:,(,,,,?,？ ,,,,(,,;,,,,水溶液:,(,,,,?，，,，实验中,,,，溶液的浓度均保持在,(,,,,?，。,?，用以维持离子强度。所用试剂均为分析纯，实验用水为去离子的二次蒸馏水。,(,实验 于,,,，。比色管中依次加入,(,,,,?，，(, ,,,,和,,,,(,, ,,,,—,,，缓冲溶液各,(,,，。、,(,×,,,,,,,,?，。,,的,,, ,(,,，。和不同体积的,(,×,,叫,,,,?，，,, ,,,,溶液，用水稀释至刻度，摇匀，于恒温水浴中恒温,,,,,，固定,一,,,,,、,,,,,,,测定相对荧光强度,,,,。,,,(,、,,——分别为有，(,,,和无，(,,,存在时体系溶液荧光强度)。, 结果与讨论 ,圾长，,,,过程速率常数，厶——猝灭剂不存在时生物大分子荧光平均寿命，〔,〕——猝灭剂浓度。由上式可知,，,,。乙，,。一 图, ,,,,对,,,荧光猝灭 ;叭,,?,×,,““,卜, ,;“,,,。,，几。由于生物大分子荧光寿命约为,,—,,，故由猝灭曲线斜率可求得不同温度时的猝灭常数，,,、,,和,,，;时, „卜一,„扣一,(,?,,,,,,((,(((分别为,(,,×,,,,、,(,,×,,,,和,(,,×,,,,，。?,,,一，远远大于各类猝灭剂对生物大分子的最大扩散碰撞猝灭常数,(,×,,如，。?,,, ,，因此进一步汪明此猝灭不是由动态碰撞引起的。利用静态猝灭公式口〕:(,,,,),,,耵,，(,,。?〕),。作不同温度下的，(,,,,,,,,,—,,,,曲线，由直线斜率求得不同温度下左氧氟沙星与,,,的结合常数,，,,、,,和,, ,时分别为,(,,×,,,、,(,,×,,,和,(,,×,,,,,,?，(,。，表明,,,,与,,,结合作用较强。同时在整个试验浓度范围内该直线具有良好的线性关系，说明,,,,与,,,的作用更符合静态猝灭的特征。 万 方数据 第,期 陈玉海等:荧光法研究左氧氟沙星与人血清白蛋白作用机理及含量测定 ,,,,(,左氧氟沙星与,,,结合的热力学性质 药物与生物大分子的作用力包括氢键、范德华力、静电引力、疏水作用力等。当温度变化不太大时，反应的焓变可看作一个常数，由，,,,,,,一厶,(,,丁。一,,,,),,，,,,?,一丁?,一一,,，,,，可求得左氧氟沙星与,,,结合的,,、?,分别为:,,,一,(,,,,?,,,,，?,一一,,,(,,?(,,,?,),，,,,,，?,,,其作用力主要为静电引力;,,,,，?,,,其作用力主要为色散力，因此左氧氟沙星与,,,之间的作用力主要为主要为色散力“〕。,(,左氧氟沙星与蛋白质间的能量转移 若小分子化合物与血清白蛋白的结合为顺序结合，则根据,,,,,,,,非辐射能量转移机制，可以求出结合位置与蛋白质分子中产生荧光基团之间的距离，其转移效率与给体一受体间距离(,)及临界能量转移距离(,,)有关，且给体与受体间能量转移效率【,〕,—,,,(,,十，(,)，式中,。是能量转移效率为, ,,时的临界距离。磁,,(,×,,卅,,,,,,叫，式中,,为偶极空间取向因子，?为介质的折射指数，西为给体的荧光量子产率，，为给体的荧光发射光谱与受体吸收光谱间的光谱重叠积分，见图,，即,，一三,(,),(,)甜?,,三,(,)?,，,(,:,)为荧 ,光给体在波长,处的荧光强度，,(,)为受体在波长,处的摩尔 世 浑 爱 ，吸收系数，能量转移效率,通过实验可由下式求出:,一,一,, 皋 溽 , 鬈,。。其中,、,分别为有受体与无受体时，给体的荧光强度。 在上述实验条件下，取,,,,,,，?一,(,,,，毋,,(,,〔,〕，将上述数值代人求算结果见表,，,值均小于,,,，符合能量转移理论。 表, ,,,,与,,,作用能量转移参数(，。,(足。和，( 图, ,,,的荧光光谱(,)和 左氧氟沙星的吸收光谱(,) ,,,,,,,,,,,,(,×,,—,,,,?,一,,(,左氧氟沙星对蛋白质构象的影响 同步荧光光谱可用于蛋白质构象变化的分析„川。由?,一,,,,所做出的同步荧光光谱只显示蛋白质中酪氨酸残基的光谱特性，而,,,,,,,,,,,同步荧光光谱只表示蛋白质中色氨酸残基的荧光曲,。因残基的最大发射波长与其所处环境之极性有关，故由发射波长的改变可判断蛋白质构象的变化。 万 方数据 光谱实验室 第,,卷 固定蛋白质浓度，逐步增加，(,,,的浓度，绘制蛋白质的同步荧光光谱。图,分别为蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的荧光光谱图。可以看出随左氧氟沙星浓度增大酪氨酸、色氨酸残基最大发射波长未发生变化，表明蛋白质的构象未发生变化。 , 蜊 渴 螽 跫 果 粼 誊 „ 橐 ?粼 熙吊洚, 波长,,,, 口:,,,,,,, ,:?,,,,,, 图,左氧氟沙星猝灭,,,的同步荧光光谱 ,,,，一,(,×,,—,,,,?,一, ,,,,?,一(,，,(,，,(,，,(,，,(,),,,一,,,,?,一,(,——,),(,校准曲线 按实验方法操作，将所 表,不同温度下测定,,,,的校准曲线及线性范围得数据进行处理发现,,,,猝灭血清白蛋白的程度,,—,。一,与,,,,的含量不呈线性关系。但,,,,,,与,,,,的浓度线性关系良好，数据见表,。可知利用,,,荧光猝灭，可测定药物中，(,,,的含量，,,„,时该方法检出限为,(,×,,—,,,,,?，(,。实验表明药物中所含赋形剂等不干扰,,,,的测定。,(,药物中,,,,含量的测定 ,,?时，取不同厂家或批号的,,,,片各,粒(标示量皆为,,,,,)，在,,,,,。容量瓶中用超声波助溶，自然沉降后，取上清液,(,,，。稀释于,,,，。容量瓶中。取该溶液,(,,,。，按实验方法进行操作测定药片中,,,,的含量同时进行回收试验，结果见表,。表明:该方法用于片剂中,,,,的含量的测定，结果满意。 表, ,,,,片,,,,含量的测定结果 (厅,,)参考文献〔,〕苏忠(秦川?谢孟峡等(罗布麻活性成分与人血清白蛋白结合的光谱学研究〔,〕(化学学报，,,,,，,,(,):,,,( 万 方数据 第,期 陈玉海等,荧光法研究左氧氟沙星与人血清白蛋白作用机理及含量测定 ,,,〔,〕曹玺珉(杜黎明(吲哚美辛与牛血清白蛋白结合作用的研究〔,〕(光谱学与光谱分析?,,,,，,,(,):,,,(〔,〕杨曼曼(杨频，张立伟(荧光法研究咖啡酸类药物与白蛋白的作用〔,〕(科学通报，,,,,?,,(,),,,(〔,,魏晓芳(刘会洲(,,,,,,,—,,,与牛血清白蛋白的相互作用〔,〕(分析化学?,,,,(,,(,):,,,(〔,,陈国珍，黄贤智，郑朱梓等编著(荧光分析法〔,〕((第,版)(北京:科学出版社?,,,,(,, ,(〔,〕张保林(王文清(袁荣尧等(蒽醌及黄酮类化合物与牛血清白蛋白结合的反应研究〔,〕(化学学报，,,,,?,,(,,):,,,,〔,,易平贵。俞庆森，商志才等(氧氟沙星与牛血清白蛋白相互作用机制〔,〕(药学学报，,,,,?,,(,,):,,,?〔,〕何华，于俊生(徐珊萍等(环丙沙星与牛血清白蛋白的相互作用〔,〕(药学学报，,,,,，,,(,):,?,( ,,,,, ,, ,,, ，,,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,;,, ,,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,, ,， ,,,,,;,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,—,,, ,,,,, ,,,—,,,,, ,,,, ,,,,—，。,, ，,, ,,,—,,,,,“ 。(,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,?,,,;,,,,?,,,,, ,,,,,,，,?,?,,,,,) ,(,,耐,,‖?,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,，,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,,,,，,,,,, ,,,,,,?,(,(,,,,,) ,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,; ,,,,:,,,,,,,,,;,, ,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,,(,,,),,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,;,,;, ,,,;,,,,;,,, ,,, ,,,,,—,,,,,, ,,,;,,,,;,,,(,,, ？,,,;,,,, ,,,,,,;,,,,？,,,,,,,,, ;,,,,,,, , ,,, ;,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,，,,,;, ,, ,,;,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,，,,, ,,,, ,,,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,;,(,,,,, ,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,;,，,,, ,,,,,,,,,,,,;,,,;, ,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,;, ,,,,,,, ,,, ,;;,,,,, ,,,,,,,,,;,, ,,, ,,, ,,,, ,,,,,(,,, ;,,,,,,, ,;,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,; ？,,,;,,,, ,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ？,,,;,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,,(,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,, ？,,,;,,,, ,,, ,,, ;,,;,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,(,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,,„, ,, ,(,×,,—,—,(,×,,—,,,,?，，一(,,, ,,,,;,,,, ，,,,, ,, ,(,×,,—, ,,,?，。,(,,,, ,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,, ,, ,,,;?澹螅簦瑁澹颍澹欤幔簦椋觯?,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,(,,一,(,,，,,, ,,;,,,,, ,, ,,(,,一,,(,,( ,,, ,,,,, ,,,,,,,;,,;, ,,,,;,,,,，，(,,,,,,,,;,,，,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,，,,;,,,,,,( 这真是令人啼笑皆非——重大发明创造被视为“旧货”～ 欢迎作者将被退稿佳作，再投本刊 在,,世纪的科技成就中，激光可算是重大发明创造之一。第一台激光器是,,,,年由美国物理学家梅曼 (见《邮票上的科学家——佼佼者之路》中之,,)研制出来的。然而《物理评论快报》却拒绝刊登梅曼的论文( 理由是:这是微波激射物理学方面的文章(对快速出版物不再有价值。这真是令人啼笑皆非～ 接着，梅曼将论文寄到了英国《自然》杂志，这篇,,,字的简短文章立即被接受。发表后引起全世界轰动。 后来。梅曼被列入了美国发明家名人堂。 为了吸取历史教训。本刊收到的论文，即使其观点与审稿人有尖锐的意见冲突。只要是言之有理，也给予 发表。因为“仁者见之谓之仁，智者见之谓之智”(《周易?系辞上》)，不同人从不同角度看问题，难免不同。我 们欢迎作者将被退稿佳作，再投本刊。 《光谱实验室》编辑部 万 方数据荧光法研究左氧氟沙星与人血清白蛋白作用机理及含量测定作者: 陈玉海， 张彦青， 赵风利， 刘保生， CHEN Yu-Hai， ZHANG Yan-Qing， ZHAO Feng-Li ， LIU Bao-Sheng作者单位: 陈玉海CHEN Yu-Hai保定职业技术学院河北省保定市071051， 张彦青赵风利刘保生 ZHANG Yan-QingZHAO Feng-LiLIU Bao-Sheng河北大学理化分析中心河北省保定市五四 东路180号071002刊名: 光谱实验室英文刊名: CHINESE JOURNAL OF SPECTROSCOPY LABORATORY年，卷期: 2008252参考文献8条1.苏忠秦川谢孟峡 罗布麻活性成分与人血清白蛋白结合的光谱学研究期刊论文-化学学报 2007042.曹玺珉杜黎明 吲哚美辛与牛血清白蛋白结合作用的研究期刊论文-光谱学与光谱分析 2007053.杨曼曼杨频张立伟 荧光法研究咖啡酸类药物与白蛋白的作用 1994014.魏晓芳刘会洲 Triton X-100与牛血清白蛋白的相互作用期刊论文-分析化学 2000065.陈国珍黄贤智郑朱梓 荧光分析法 19906.张保林王文清袁荣尧 蒽醌及黄酮类化合物与牛血清白蛋白结合的反应研究期刊论文-化学学报 1994127.易平贵俞庆森商志才 氧氟沙星与牛血清白蛋白相互作用机制期刊论文-药学学报 2000108.何华于俊生徐珊萍 环丙沙星与牛血清白蛋白的相互作用期刊论文-药学学报 200107本文读者也读过10条1. 刘保生.闫潇娜.杨超.张彦青.吕运开.LIU Bao-sheng.YAN Xiao-na.YANG Chao.ZHANG Yan-qing.LU Yun-kai诺氟沙星与氧氟沙星同时与牛血清白蛋白分子作用的荧光光谱期刊论文-河北大学学报(自然科学版)20113132. 刘保生.薛春丽.王晶.杨超.吕运开.LIU Bao-sheng.XUE Chun-li.WANG Jing.YANG Chao.LU Yun-kai 环丙沙星、氧氟沙星同时与牛血清白蛋白分子作用的荧光光谱期刊论文-发光学报20103123. 易帅.吴军.郭明.谭飞.俞庆森 氧氟沙星和左氟沙星与人血清白蛋白的相互作用研究期刊论文-浙江大学学报理学版20043134. 傅丽 喹诺酮类抗生素与血清白蛋白反应机理研究及测定学位论文20075. 刘浩.黄艳萍.屈凌波.相秉仁.LIU Hao.HUANG Yan-ping.QU Ling-bo.XIANG Bing-ren 牛奶中左氧氟沙星的铽络合物荧光增敏法测定期刊论文-中国医药工业杂志20083916. 任乃林.郭祥群.REN Nai-lin.GUO Xiang-qun 荧光光度法测定鱼肉中的氧氟沙星残留期刊论文-食品科学20072887. 童裳伦.项光宏.黄迪金.刘维屏 表面活性剂敏化的铽离子荧光探针对氧氟沙星的测定期刊论文-分析化学20043258. 杜黎明.苑戎.王建英.DU Li-ming.YUAN Rong.WANG Jian-ying 氧氟沙星荷移络合物的荧光特性和应用期刊论文-分析试验室20052479. 王志强.胡卢丰.吴继禹.王学宝.黄学荪.张秀华.Wang Zhiqiang.Hu Lufeng.Wu Jiyu.Wang Xuebao.HuangXuesun.Zhang Xiuhua 荧 光光谱法研究Ca2存在下左氧氟沙星与人血清白蛋白的结合作用期刊论文-中国药师 201114710. 贾丽华.曾晓丹.郭祥峰.Jia Lihua.Zeng Xiaodan.Guo Xiangfeng 盐酸左氧 氟沙星与牛血清白蛋白的相互作用期刊论文-黑龙江大学自然科学学报2007245本文 链接: