HPLC—ELSD测定双胆痔疮栓中熊去氧胆酸含量

药物分析杂志ChinJPharmAnal2005，25(6)HPLC—ELSD测定双胆痔疮栓中熊去氧胆酸含量王守箐(临沂师范学院山东临沂276005)摘要目的：建立HPLC—ELSD测定双胆痔疮栓含量的方法。方法：样品经水解、提取，获得UDCA。色谱条件：C柱。流动相：甲醇一水一冰乙酸(78：22：0．01)。流速：1．0mL·min。柱温：室温。ELSD为检测器，ELSD参数：漂移管温度：105C；雾化气体：空气；流速：2．0L·min。结果：该法线性关系好，r=0．9987，UDCA收率在98．5％101．4％。结论：本法较原方法操作简便、重复性好，适合双胆痔疮栓的含量控制。关键词：双胆痔疮栓；熊去氧胆酸；高效液相色谱一蒸发光散射检测器HPLC—ELSDDeterminationofContent0fUrs0de0xch0licacidinShuangdanSuppositoryforHemorrhoidsWANGShou——qing(LinyiTeacherUniversityLinyi276005)Abstract0bjective：ToestablishaHPLC—ELSDmetll0df0rdeterminationofursodexcholicacidinShuangdansuppositoryforhemorrhoids．Methods：PhenomenexCl8columnwasused．Themobilephasewasconsistedofmetha·no1一water—aceticacidglacial(78：22：0．01)andtheflowratewas1．0mL·min，EISDwasusedasdetector．Results：Ursodexcholisacidhasagoodlinearrelationintherangeof10320Izg·mL(r=0．9987)，tl1erecov—erywasintherangeof98．2％101．4％．Conclusion：Themethodissimplerthantheoriginalstandardandthere．peatabilityisbetter．Itissuitableforthecontentcontrolofthedrug．Keywords：Shuangdansuppositoryforhemorrhoids；Ursodexcholicacid；HPLC—ELSD双胆痔疮栓是由熊胆粉、冰片、猪胆粉三味中药组成的复方制剂，具有清热解毒、凉血止血之功效，临床用于治疗各期内痔便血及混合痔肿胀等。其中熊胆粉为方中君药，所含熊去氧胆酸(UDCA)为栓剂的指标成分。目前采用气相色谱法测定含量lJ，但气相色谱法需经甲基化、酰基化等衍生化步骤，处理复杂而影响重复性。本文采用HPLC—ELSD测定，结果满意，方法相对简便，重复性提高。1仪器与试药HPLC：Waters515；C18柱(5Izm，4．6mm×250mm)：Phenomenex(天津)；EISD2000：Alhech；旋涡混合器GL一88B：海门麒麟医用仪器厂。对照品购自中国药品生物制品检定所；试剂：甲醇，色谱纯；其他试剂均为分析纯；栓剂样品：鲁南制药股份有限公司。2色谱条件流动相：甲醇一水一冰乙酸(78：22：0．01)；流速：1．0mL·min；柱温：室温。EISD参数：漂移管温度：105c【=；雾化气体：空气；流速：2．0L·min。3线性与范围取对照品约25mg，精密称定，置25mL量瓶中，加流动相至刻度，超声5min使溶解，用0．45m的微孔滤膜过滤，分别取续滤液0．1，0．2，0．4，0．8，1．6，3．2mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液各20，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积A对UDCA浓度C(g·mL)作线性归，得方程A=一79200+16266C，r=0．9987，n=6。线性范围为10320g·mL。4收率试验取已知浓度的栓剂样品适量，分成9份，加UD．CA对照品的甲醇溶液(20g·mL)0．8，1．0，1．2mL各3份，按“5．2”所述方法制得样品溶液，各维普资讯http:www.cqvip.com药物分析杂志ChinJPharmAnal2005，25(6)．．——723．．——进样2O，记录色谱图，计算收率，结果收率为98．2％101．4％。5样品测定5．1对照品溶液的制备精密称取UDCA对照品适量，加流动相超声溶解并稀释成0．2mg·mL的对照品溶液。5．2样品溶液的制备取栓剂2O粒，置100mL量瓶中，加甲醇适量微温使溶解，冷至室温、加甲醇至刻度，摇匀。精密取该溶液5mL，置于4℃冷藏室中约3h，离心取上清液。再分别两次用甲醇3mL溶解、冷藏、离心取上清液。合并上清液于10mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀。精密取该溶液5．0mL，置于5mL安瓿中，于60C水浴中，氮气吹干甲醇，加8％的氢氧化钠溶液1．5mL，在120oC甘油浴中放置2h，放冷，安瓿中的溶液转移至10mL的离心管中，加浓盐酸1．5mL。用乙醚3mL分别萃取3次，每次离心后分取乙醚层并合并于1OmL样品管中，在6O℃水浴中蒸干乙醚1J，用流动相稀释至1mL，即得。5．3测定法分别取对照品和样品溶液201xL，注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)，以外标两点方程法计算含量，即得。002550t／minB图1熊去氧胆酸对照品(A)样品(B)色谱图Fig1HPLCchromatogramofreferenceSubstance(UDCA)(A)andsample(B)5．4测定结果取样品三批，批号为030301，030302，030303，按上述方法测定并与气相色谱法测得的数据比较，结果见1。表1样品测定结果(mgpersuppository，n=3)Tab1ReSllltsofsampledetermine6稳定性试验取按“5．2”所述方法制得样品1份，每隔1h进样一次，结果显示8h内UDCA的峰面积稳定，RSD=2．4％(n=8)。7讨论7．1熊胆粉及其制剂目前一般采用HPLC法测定结合态熊去氧胆酸(牛磺熊去氧胆酸TUDCA)来控制质量J，但由于本品有大量基质(PEG一1500和PEG一6OOO)，HPLC难于将TUDCA与基质直接分离，而且熊胆制剂本身均含少量游离UDCA，故原及本法均将UDCA作指标来控制质量，试验表明：本文方法较气相色谱法重复性好，操作也相对简单。7．2样品其他峰因缺乏对照品而未确定。参考文献1DrugSpecificationsPromulgatedbyMinistryofPublicHealth，PRChina(interim)[中华人民共和国卫生部部颁标准(试行)]．WS一251(Z一059)982ZhangChi(张弛)．DeterminationofursodeoxycholicacidbycapillarYgaschromatography(熊脱氧胆酸的毛细管气相色谱法测定)．ChinJPharm(中国医药工业杂志)，2000，31(11)：5043DrugSpecificationsPromulgatedbyMinistryofPublicHealth，PRChina(interim)[中华人民共和国卫生部部颁标准(试行)]．fS]．WS3—09(B一09)一894ZhangQi—ruing(张启明)，YINXiao—jian(殷晓建)，YANKe—dong(严克东)，eta1．HPLCDeterminationofursodeoxycholicacidandchenodexchlicacidinursinebilepowder(高效液相色谱法直接测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量)．ChinJPharmAnal(药物分析杂志)，1993，13(5)：321(本文于2004年4月1日修改)维普资讯http:www.cqvip.com