大豆异黄酮检测

null大豆异黄酮检测的研究进展大豆异黄酮检测的研究进展HPLC法测定异黄酮含量null 大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物。大豆异黄酮在通常情况下为固体，熔点在100℃ 以上。常温下性质稳定，呈黄白色粉末状，无毒，有轻微苦涩味，在醇类、酯类和酮类溶剂中有一定的溶解度，不溶于水， 难溶于石油醚、正已烷等。null 大豆异黄酮在强酸、高温或酶存在下可水解去掉葡萄糖基而转变成葡萄糖苷配基形式(游离大豆异黄酮)。据报道游离型大豆异黄酮(苷元)约占异黄酮总量的2％～3 ，主要以大豆黄素(Daidzein)、染料木素(Glycitein)和黄豆黄素(Genistein)形式存在。null保健作用保健作用抗癌作用 抗氧化作用 具有对骨组织密度的阳性反应，有效防治骨质疏松症； 具有弱的雌激素活性，可用于改善妇女更年期症状； 具有抗酸化能力，能增强心肌收缩力，增加冠状动脉血流量，对心脏病的危害有良好预防效果； 可降低体内胆固醇和脂肪量，并能影响脂肪代谢，防止高血压、高血脂，预防心血管疾症发生。 除上述功能、作用外，异黄酮还具有抗真菌性从而抑制真菌活性的功能。研究表明，大豆异黄酮具有雌激素调节作用，能够改善妇女皮肤(美容)并对糖尿病及其他并发症、肾肝疾病、牙周炎等有预防和治疗的功效。 毒性作用：毒性作用： 人体资料表明： 可刺激绝经前妇女乳腺增生和子宫内膜增生。 可能会降低男性血管内皮功能 孕妇摄入可致宫内胎儿造血细胞DNA损伤 增加子代生殖系统疾病发生的危险性 动物实验表明： 致癌作用 生殖内分泌毒性 其他毒性：可能具有免疫毒性；可能具有神经毒性；可能具有细胞毒性；可能具有潜在的遗传毒性。 测定测定方法薄板层析法：操作简单，定量检测精度低多用于定性分析，适用于生产过程的中间物料及无精度要求的检测。 紫外分光光度法：分为单波长法和三波长法，两者步骤相似，操作简便，重现性好，但特异性较差，主要用于样品中总大豆异黄酮的测定。 高效液相色谱法：目前应用最广泛，为测定保健品中大豆异黄酮的国家法，分离效率高，准确度精密度高，测定样品范围广，主要用于单个大豆异黄酮样品的检测，如质量检验及科学研究等。测定方法测定方法 色相色谱法：进样量少，敏感性、选择性及特异性较高，但需制备衍生物，操作复杂，耗时长，仪器昂贵。 毛细管电泳法：快速经济，选择性高，样品前处理简单分离效率高。 免疫检验法：以酶联免疫法为基础，测定中根据标记物和干扰物荧光寿命的差异，选择性的测定标记物的荧光信号。 null 以下介绍检测保健食品中大豆异黄酮的测定方法 GB 23788-2009-T 高效液相色谱法样品处理样品处理 固体样品、半固体样品：固体样品粉碎、磨细（过80目筛）、混匀，半固体样品混匀，称取样品0.05g~0.5g（精确至0.1mg），用80%甲醇溶液溶解并转移至50mL容量瓶中，加入80%甲醇溶液至接近刻度。 液体样品：吸取混匀的液体样品0.5~5.0mL于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液至接近刻度。 将上述样品溶液用超声波振荡器振荡20min，用80%甲醇定容，摇匀。取样品溶液置于离心管中，离心机离心15min（转速大于8000r/min）。取上清液用滤膜过滤，收集滤液备用。大豆异黄酮混合标准使用溶液大豆异黄酮混合标准使用溶液将大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液按1:1:1:1:1:1的比例配成标准混合溶液，待用。 分别吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL标准混合溶液于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液定容，配成浓度分别为0.0mg/L， 8.0mg/L ，16.0mg/L，24.0mg/L，32.0mg/L，40.0mg/L的混合标准系列溶液。色谱条件色谱条件色谱柱：C18,4.6mm×250mm，粒度5μm 不锈钢色谱柱，也可使用分离效果相当的其他不锈钢柱。 流动相：A：乙腈 B：磷酸水溶液（pH=3.0） 波长：260nm。 进样量：10μL。 柱温：30℃测定测定定性 分别将大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素、染料木素的标准贮备溶液稀释10倍后，按色谱条件进行测定，依据单一标准样品的保留时间，对样品溶液中的组分进行定性。测定测定定量 将大豆异黄酮混合标准使用溶液在色谱条件下进行测定，绘制以峰面积为纵坐标、混合标准使用溶液浓度为横坐标的标准曲线。将样品溶液注入高效液相色谱仪中，保证样品溶液中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的响应值均在工作曲线的线性范围内，由标准曲线差得样品溶液中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的浓度。结果计算结果计算样品中大豆异黄酮各组分[大豆苷（X1）、大豆黄苷（X2）、染料木苷（X3）、大豆素（X4）、大豆黄素（X5）和染料木素（X6）]的含量分别按下式计算： 式中： Xi——样品中大豆异黄酮单一组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）或毫克每升（mg/L）； Ci——根据标准曲线得出的大豆苷（或大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素）的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V——样品稀释液总体积的数值，单位为毫升（mL）； m——固体、半固体杨南平质量的数值，单位为克（g）； 液体样品体积的数值，单位为毫升（mL）。 样品中大豆异黄酮总含量，按下式计算： X= X1+X2+X3+X4+X5+X6 精密度精密度在重复性条件下，两次独立测定结果之差不得超过算数平均值的10%。