葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较

文章编号：!""#$!%&%（’""’）"’$"’("$"( 葡萄籽提取物中原花青素含量 不同测定方法比较 姚 开，何 强，吕远平，石 碧! （四川大学轻工与食品工程学院，四川 成都 %!""%&） 关键词：葡萄籽；原花青素；测定方法 中图分类号：)%&*+(’ 文献标识码：, """ 原花青素是从植物中分离得到的一类黄烷醇 单体及其聚合体的多酚类化合物，前者为黄烷$#$ 醇或黄烷$(，#$二醇，后者则为缩合单宁、红粉和 酚酸，如下图所示。该类化合物具有生物活性，如 抗氧化和自由基清除能力等［!］，而机体内脂质氧 化和自由基的产生是引发肿瘤等多种疾病的主要 原因。国外以葡萄籽提取物中原花青素作为主要 活性成分的药品及食品营养补充剂较多，国内也 有多家企业正着手该类产品的研发与生产。目 前，关于原花青素含量的测定方法尚无统一， 相关文献报道也较少。本文对葡萄籽提取物中原 花青素含量测定的三种不同方法进行了对比，其 结果可为建立该产品的分析方法提供依据。 ! 实验 !+! 正丁醇$盐酸法 将待测样品配制成浓度为 " - !./0的甲醇溶 液，取其 !12 移入 &"12 圆底烧瓶中，然后依次加 入 " -’12 ’3的硫酸铁铵溶液（用 ’142·05 !的盐酸 配制）和 %12正丁醇$盐酸溶液（正丁醇 6浓盐酸 7 8&6&，9/9），摇匀。反应液于 8&:水浴中冷凝回流 #"1;<后，迅速冷却，在 &#%<1波长处测定其吸光 度［’］，以甲醇代替样品溶液作为空白对照，用原花 青素（=;.1> 公司，含量 8? - &3）标准曲线计算样 品中原花青素含量。 !+’ 香草酸$盐酸法 将待测样品配制成 " - !./0的甲醇溶液，取其 !12移入 ’&12 比色管内，依次加入 %12 浓度为 # -"./!""12的香草醛甲醇溶液和 (12 浓盐酸，加 塞摇匀，在 ’" @ !:、避光条件下反应 !&A 后，于 &""<1处测其吸光度［(］，以甲醇代替样品溶液作 为空白对照，用儿茶素（=;.1>公司，含量 8?3）标 准曲线计算样品中原花青素含量。 香草醛$硫酸法同 !+’所述，以 %142·05 !硫酸 代替浓盐酸，缓缓加入到反应体系中。 ’ 结果与讨论 ’+! 实验原理 正丁醇$盐酸法测定原花青素的原理是基于 其花色素反应，即原花青素在热酸作用下能产生 红色物质，从而可用分光光度法进行测定。对于 单体原花青素黄烷$(，#$二醇来说，B$# 位具有极 强的亲电性，其醇羟基与 B$&，B$* 上的酚羟基组 成一个苄醇系统，使得 #位碳易于生成正碳离子。 在强酸作用下，正碳离子失去质子，氧化生成花色 第 !#卷第 ’期 ’""’年 #月 化 学 研 究 与 应 用 BAC1;D>2 ECFC>GDA >J;4< K42 -!#，L4-’ ,IG-，’""’ " "" 通讯联系人 收稿日期：’""!$"?$’"；修回日期：’""!$!!$"’ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（’8?*’"’&） 素。对于聚合原花青素，其单元间连接键易在酸 作用下被打开，下部单元生成黄烷!"!醇，上部单 元生成花色素，如图 #所示。 图 # 花色素反应 $%&’# ()*+,%-. -/ 01-23+%.& +4*.%2%. 香草醛法的原理在于酸性条件下，原花青素 5环的化学活性较高［6］，其上的间苯二酚或间苯 三酚可与香草醛发生缩合，产物在浓酸作用下形 成有色的正碳离子，如图 7所示。采用分光光度 法测其吸光度，根据标准曲线即可得到样品中原 花青素含量。盐酸或硫酸均可作为反应过程的催 化剂［8］。 图 7 酚醛缩合反应 $%&’7 9:) 1)*+,%-. -/ 0:).-;!*;2):42) +-.2).<*,%-. 7=7 标准物选择 由于原花青素是由不同数量的儿茶素或

表

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儿 茶素单体及其聚合体形成的多酚化合物，这就涉 及到选择什么样的标准物建立标准曲线。基于实 验原理的不同和葡萄籽提取物中原花青素主要是 以儿茶素、表儿茶素及其二聚体为主。由于正丁 醇!盐酸法对儿茶素等单体不反应，故选择原花青 素作标准物，而香草醛法选择原花青素或儿茶素 作为标准物较为合理。表 #为选用不同标准物对 云南高原生物资源开发有限公司葡萄籽提取物样 品中原花青素含量 8 次平行检测结果。可以看 出，香草醛!盐酸法选用儿茶素作为标准物有较低 的相对标准偏差和较宽的线性范围。 7=" 不同方法的测定结果 图 "*，>，+ 分别是正丁醇!盐酸法（以原花青 素作标样），香草醛!硫酸法和香草醛!盐酸法（以 儿茶素作标样）的标准曲线，表 7为三种不同方法 对葡萄籽提取物中原花青素含量的测定结果。 图 " 三种不同方法的标准曲线 $%&’" ?,*.2*12 +31@) -/ 2%//)1)., A),:-2< 结果表明，香草醛!盐酸法测定原花青素含量 有着较高的精密度（相对标准偏差为 B’CDE）和准 确度（加标回收率为 DF’#E）。该法所依赖的反应 基团为原花青素 5环的间苯二酚或间苯三酚，儿茶 素或表儿茶素及其低聚体等都能参加反应。正丁 醇!盐酸法测得的原花青素含量偏低，仅为#C’8GE， 究其原因可能是由于正丁醇!盐酸法对原花青素化 学结构的依赖性大，选择性高，对于儿茶素等单体 原花青素不反应，而对于原花青素的聚合体，其花 色素反应也不可能很完全。在香草醛!硫酸法实验 过程中，硫酸的加入会引起反应体系急剧产热，从 而导致原花青素的氧化分解，这可能是其较之香草 醛!盐酸法所得结果偏低的原因所在。 表 # 不同标准物的比较 9*>;) # H-A0*1%<-. -/ 2%//)1).+) <,*.2*12 <*A0;)< 测定方法 标准物 样品原花青素含量（!&IA;） 相对标准偏差（E） 线性范围（!&IA;） 正丁醇!盐酸法 原花青素 #C’8G # ’FB #B J #"B 香草醛!盐酸法 原花青素 #F’"" # ’D# #B J #BB 儿茶素 7#’8C B ’CD #B J #8B #"7第 7期 姚开等：葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较 表 ! 三种不同方法的标准曲线 "#$%& ! "’& (&)*%+) ,- .&+&(/01#+0,1 -,( .0--&(&1+ /&+’,.) 测定方法 原花青素纯度（2） 3 ! 4 5 6 均值 加标回收率 （2） 相对标准偏差 （2） 正丁醇7盐酸法 38 93: 38 9;; 38 9<6 38 9<; 38 9!; 38 96; :4 94 3 9<= 香草酸7盐酸法 !3 95; !3 98= !3 966 !3 98< !3 94; !3 968 :< 93 = 98: 香草酸7硫酸法 38 9=4 38 938 38 98= 3; 9 植物多酚［?］，北京：科学出版社，!"""， 3!;—344> ［!］@,(+&( A，B()+0C’ A，D’#1 E9 !"#$%&"’()*$+#［F］，#$%&，!’： !!4 G !4=9 ［4］H&)’I#1.& J，D’&(KC/ ?9 , 9 -%%. /&) 9［F］，#$%’，’"：:=6 G :3=9 ［5］L,, M，@,(+&( A9 011)$2［F］，#$%&，($（;）：588 G 5<=9 ［6］H&)’I#1, J，D’&(K#1 ?9 , 9 -%%. /&) 9［F］，#$%)，’!（!）：44! G 4459 *+,-./01+2 +3 4565/,02.60+2 ,567+41 3+/ -/+.267+89.20402 3/+, :/.-571554 5;6/.861 MNO P#0，BQ R0#1S，AT M*#17I01S，JBU E0 （D,%%&S& ,- A0S’+ U1.*)+(K #1. L,,. Q1S01&&(01S，J0C’*#1 T10V&()0+K，D’&1S.* ;3==;6，D’01#） <=16/.86："’(&& /&+’,.)，17$*+K% #%C,’,%7’K.(,C’%,(0C #C0.，V#10%%017’K.(,C’%,(0C #C0. #1. V#10%%017)*%-*(0C #C0.， W&(& *)&. +, .&+&(/01& +’& I(,#1+’,CK#10.01 -(,/ S(#I&7)&&. &X+(#C+) 9 "’& .0--&(&1+ /&+’,.) W&(& C,/I#(&. #CC,(.7 01S +, +’& C’,0C& ,- )+#1.#(. )#/I%&) #1. +’& (&#C+0,1 +’&,(K 9N) # (&)*%+，+’& V#10%%017’K.(,C’%,(0C #C0. /&+’,. W#) )’,W1 +, $& +’& $&)+ -,( +’& .&+&(/01#+0,1 ,- I(,#1+’,CK#10.01 W’&(&01 C#+&C’01 W#) *)&. #) +’& )+#1.#(. )#/I%&，+’& +&)+ W#V&%&1S+’ W#) 6==1/，+’& %01&#(0+K (#1S& W#) 3= Y 36=!SZ/%，+’& (&#C+0,1 W#) -010)’&. #+ != [ 3\ -,( 36’，+’& (&%#+0V& )+#1.#(. .&V0#+0,1 $&01S = 98:2 #1. +’& (&C,V&(K W#) :< 932 9 >59 ?+/41：S(#I&7)&&.；I(,#1+’,CK#10.01；.&+&(/01#+0,1 !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! （责任编辑 李 方） 更 正 本刊第 35卷各期封面上的“T%(0)’”应为“T%(0C’”，特此更正。并向《T%(0C’ H0(&C+,(K》及 广大读者致歉。 《化学研究与应用》编辑部 !4! 化 学 研 究 与 应 用 第 35卷 葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较 作者： 姚开， 何强， 吕远平， 石碧 作者单位： 四川大学轻工与食品工程学院,四川,成都,610065 刊名： 化学研究与应用 英文刊名： CHEMICAL RESEARCH AND APPLICATION 年，卷(期)： 2002，14(2) 引用次数： 54次 参考文献(5条) 1.石碧.狄莹 植物多酚 2000 2.Porter L.Hrstich L.Chan B 查看详情 1986 3.Deshpande S.Cherycm M 查看详情 1985 4.Foo Y.Porter L 查看详情 1986(06) 5.Deshpano S.Cheryan M 查看详情 1987(02) 相似文献(10条) 1.期刊论文 马红江.王莹.葛彬.唐慧芬.李予霞.任雪艳 吐鲁番地区常见品种葡萄籽中原花青素和脂肪含量的测 定 -安徽农业科学2008,36(8) [目的]测定吐鲁番地区常见葡萄品种葡萄籽中活性成分的含量.[方法]以吐鲁番地区常见的13个葡萄品种的葡萄籽为材料,测定并比较各品种葡 萄籽中原花青素和脂肪的含量.[结果]在各品种葡萄籽中.和田红葡萄籽的脂肪含量最高,达21.5%;玛奶子葡萄籽次之,为21.0%;星浦一号葡萄籽最少 ,仅12.5%.原花青素含量最高的葡萄籽是黑提,达9.150%;赤霞珠次之,为8.790%;哈什汉最少,仅3.800%.[结论]该研究为吐鲁番地区葡萄籽的综合开发 利用提供了理论依据. 2.期刊论文 任其龙.魏冠红.金米聪.苏宝根.黄梅.Ren Qilong.Wei Guanhong.Jin Micong.Su Baogen.Huang Mei 反相高效液相色谱-电喷雾质谱法鉴定葡萄籽低聚原花青素 -食品与发酵工业2006,32(3) 建立了采用LC-ESI-MS对葡萄籽提取物中的多种低聚原花青素进行分析鉴定的方法.原花青素用体积分数60%乙醇水溶液从葡萄籽中提取并用聚酰 胺柱层析精制后,以乙腈-1%醋酸水溶液为流动相在ZORBAXSB-C18柱上进行梯度洗脱分离,在电喷雾电离负离子模式下采用选择离子监测模式(SIM)将 几种低聚体进行了选择性的分离.结果所检葡萄籽提取物中共含有(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素和(-)-表儿茶素没食子酸酯3种单体、8种非酯型和4种 没食子酸酯型共12种二聚体及4种非酯型三聚体等.建立的方法可以较好地解决葡萄籽中各种低聚原花青素的定性检测,了解提取物中原花青素的成分 .同时文中还对原花青素二聚体的质谱碎裂途径进行了讨论. 3.学位论文 李春阳 葡萄籽中原花青素的提取纯化及其结构和功能研究 2006 葡萄是世界上经济价值较高的一种水果，为葡萄科(Vitaceae)葡萄属(Vitis)植物。葡萄果实中含有大量的酚类物质，其中30-40％存在于葡萄 皮中，60-70％存在于葡萄籽中。原花青素(Proanthocyanidin，简称PC)是葡萄籽中含量最大的酚类物质，具有高度羟基化的结构，能够抗氧化、清 除自由基、治疗心血管疾病，有很大的开发利用价值。 经改良的香草醛-盐酸法测定原花青素含量的精密度、准确度比原方法有明显提高，而且大大提高了显色稳定性，缩短了分析时间。改良后的测 定方法快速、简便、有效，可用于葡萄皮、籽、梗及其提取物中的游离态原花青素含量测定。在正丁醇-盐酸液中加入SDS和2-巯基乙醇，能够将结 合态中的原花青素分离出来，通过显色反应确定结合态原花青素的含量，其测定结果的精密度和稳定性较好，可用于葡萄籽、梗中蛋白结合态和纤 维素结合态原花青素含量的测定。葡萄籽中游离态、蛋白结合态、纤维素结合态原花青素含量分别为3.86％、2.93％、2.80％。在低温条件下贮藏 ，铝箔真空包装可减少多酚和游离态原花青素的损失以及向结合态原花青素的转化。 以真空干燥葡萄籽为原料，用70％乙醇提取葡萄籽原花青素，其最佳工艺参数为葡萄籽粉粒度80-150目、搅拌时间55min、提取温度15℃、加酸 量0.75％。20℃时，HP-2MGL树脂对葡萄籽原花青素的纯化效果最好，吸附率为91.1％，解吸率为95.8％。经HP-2MGL纯化的GSPP3组分的原花青素含 量为96.5％，明显高于GSPP1和GSPP2。LC-MS分析结果表明，GSPP3质谱总离子流共有27个峰，

说明

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GSPP3组分中原花青素的组成较为复杂，其中2号 峰和4号峰的质谱及碎片信息表明，它们是原花青素二聚体。用SephadexLH-20对GSPP3组分进一步纯化，用70％丙酮洗脱得到GSPP3-SP1和GSPP3- SP2两个组分。LC-MS分析表明，GSPP3-SP1有四个峰，GSPP3-SP2有七个峰，通过质谱及碎片信息分析，它们主要含有单体和二聚体原花青素。 根据葡萄籽原花青素提取物GSP和纯化级分GSPP1、GSPP2、GSPP3红外谱图分析，发现葡萄籽原花青素基本结构单元主要为原花青定。利用LC- MS对葡萄籽原花青素醇解产生的花色素进行分析测定，确定为矢车菊素，从而证明葡萄籽原花青素主要结构单元为花青定，即其B-环上含有两个羟 基。 激光光散射与GPC联用测定了葡萄籽原花青素纯化分级级分的重均相对分子质量，乙酰化GSP的平均相对分子质量为9.39×104Da，相对分子质量 分布范围较宽，多分散系数为1.65；乙酰化GSPP3的重均相对分子质量为9.64×103Da，GSPP3的重均相对分子质量为4.26×103Da，平均聚合度为 13，多分散系数为1.56，相对分子质量分布曲线呈对称分布，以高聚合度原花青素为主；乙酰化GSPP3-SP的重均相对分子质量为 4.25×103Da，GSPP3-SP的重均相对分子质量为1.89×103Da，平均聚合度为6，多分散系数为1.45，分子量分布曲线基本呈对称分布，以低聚合度原 花青素为主。 DPPH法测定葡萄籽原花青素抗氧化实验结果表明，葡萄籽原花青素纯化物抗氧化、清除自由基的能力大于Vc和芦丁；茶多酚与GSPP3接近；葡萄 籽原花青素提取物略低于Vc，但高于芦丁。GSP、GSPP1、GSPP2、GSPP3、GSPP3-SP、Vc、芦丁、茶多酚的半抑制量分别为118.01、92.59、88.20、 86.07、62.80、110.24、169.88、86.56g/kg[DPPH·]，其自由基清除能力AE分别为0.85×10-2、1.08×10-2、1.13×10-2、1.16×10-2、 1.59×10-2、0.91×10-2、0.59×10-2、1.16×10-2。 小鼠血清生化指标和病理切片研究表明，葡萄籽原花青素可以降低高脂模型小鼠血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量，对小鼠的肝脂肪 变有一定的缓解和治疗功能。葡萄籽原花青素对酵母菌的最小抑制浓度＞10mg/mL，对大肠杆菌的最小抑制浓度为1.25mg/mL，枯草芽孢杆菌的最小 抑制浓度为313μg/mL。葡萄籽原花青素对龋齿菌(即变异链球菌Streptococcusmutans)具有较强的抑制作用，100μg/mL时抑菌圈直径为 10mm，250μg/mL时为14mm，500μg/mL时为20mm。葡萄籽原花青素对沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，当含菌量约为 100个/mL、原花青素浓度为500μg/mL时，对金黄色葡萄球菌抑菌率为29.6％，当原花青素浓度为1000μg/mL时，可以完全抑制金黄色葡萄球菌。而 对于沙门氏菌和大肠埃希氏菌来说，当原花青素浓度为1000μg/mL时，抑制作用才较为显现，原花青素浓度为5000μg/mL时，抑制作用显著。 以RT-N-20乙基纤维素为壁材，以葡萄籽原花青素为心材，当心材与壁材的比例为4:1，总固形物含量为25％，进风温度为160℃时，葡萄籽原花 青素微胶囊化产率和效率最大，分别为93.91％和95.06％。微胶囊化葡萄籽原花青素光照贮存三个月原花青素损失率比未微胶囊化减少40.01％，避 光贮存三个月原花青素损失率比未微胶囊化减少23.71％。以熔点为55℃的复合氢化植物油为壁材，以葡萄籽原花青素为心材，当心材与壁材比为 1:2时，原花青素微胶囊化产率和效率最高，分别为83.2％和91.5％。微胶囊化葡萄籽原花青素光照贮存三个月，原花青素损失率比未微胶囊化减少 34.01％，避光贮存三个月减少27.71％。从扫描电子显微镜(SEM)图片来看，微胶囊化原花青素颗粒整个表面结构呈球状，具有较好的连续性、完整 性和致密性。以氢化植物油为壁材制备的微胶囊化葡萄籽原花青素，比乙基纤维素为壁材的微胶囊产品表面粗糙。 当油为外相(含量＞90％)，以油酸聚甘油单酯为表面活性剂、乙醇为助表面活性剂(4:1)，15％葡萄籽原花青素水溶液为内相，可形成葡萄籽原 花青素微乳。经测定葡萄籽原花青素微乳液中90％微粒的平均粒径为23.96nm。当油与混合表面活性剂比为90:10时，葡萄籽原花青素最大添加量为 1632μg/mL；当油与混合表面活性剂比为98:2时，葡萄籽原花青素最大添加量为538μg/mL远远大于抗氧化正常添加量200μg/mL。油脂过氧化加速 实验结果表明，葡萄籽原花青素微乳液与TBHQ抗油脂氧化能力相同，可以使油脂在常温下的贮存保质期比对照组提高1.2倍，如二者协同作用可显著 提高油脂的抗氧化能力，使油脂的保质期在常温(20℃)贮存条件下比对照组提高1.8倍，天然葡萄籽原花青素可以替代合成的TBHQ，添加在油脂中更 安全、更可靠。 4.期刊论文 袁小英.刘玮.谢艳飞.郭广进.孟如松.范立英.张洁.田燕.马慧敏.信许亚.YUAN Xiao-ying.LIU Wei.XIE Yan-fei.GUO Guang-jin.MENG Ru-song.FAN Li-ying.ZHANG Jie.TIAN Yan.MA Hui-min.XIN Xu-ya 葡萄籽提取物原花青素对皮肤急性光损伤Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响 -中国美容医学2008,17(3) 目的:评估外用葡萄籽提取物原花青素对急性光损伤的Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响.方法:实验设计正常皮肤组、单纯2MED照射组、基质 +2MED照射组、含葡萄籽提取物原花青素样品外用+2MED照射组共四组,连续3天同样处理24h后对皮肤取材,进行Fas蛋白及Bcl-2蛋白免疫组化染色.结 果:含葡萄籽提取物原花青素样品外用+2MED照射组的Fas蛋白表达积分与单纯2MED照射比较明显下降,Bcl-2蛋白表达积分明显增加,接近正常皮肤.结 论:葡萄籽提取物原花青素对日晒伤具有一定的防护作用,其机制可能是与Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达相关. 5.期刊论文 钟振声.冯焱.孙立杰 超声波法从葡萄籽中提取原花青素 -精细化工2005,22(1) 研究了从葡萄籽中提取原花青素的改进工艺,主要考察超声波作用对原花青素提取率和提取物含量的影响,并与传统溶剂法进行了对比.实验表明 ,把风干的葡萄籽破碎成0.6～1 mm的微小颗粒,先按1 g葡萄籽加3 mL溶剂的比例加入石油醚,常温浸泡48 h脱除油脂;再按照1 g葡萄籽加20 mL溶剂 的比例,分别用乙醇[w(C2H5OH)=95%]、丙酮[w(CH3COCH3)=99%]和纯水在常温下浸泡2 h,浸泡期间采用超声波震荡加强传质,原花青素的提取率分别 达到4.63%、4.59%和2.55%(以葡萄籽的投料质量计算),提取率分别比不施加超声波震荡的传统溶剂提取法提高11%、66%和48%. 6.期刊论文 李春阳.许时婴.王璋.LI Chun-yang.XU Shi-ying.WANG Zhang 从葡萄籽中提取分离原花青素的研 究 -中外葡萄与葡萄酒2004,""(4) 葡萄籽中总酚含量(以没食子酸计)大约为4.85%,原花青素含量为3.05%(以湿基含水10%计算),具有很大的开发利用价值.研究结果表明:选择 130～150目的葡萄籽粉,在20℃条件下,采用70%丙酮搅拌40分钟,提取原花青素效果最佳,提取率可达99.11%;超声波处理对原花青素提取有一定影响 ,在保持提取温度不变的情况下,超声波处理功率档次越大,原花青素提取率越高;葡萄籽进行真空干燥比自然干燥的原花青素提取率高12.61%. 7.学位论文 池余刚 葡萄籽提取物原花青素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡及其对凋亡相关基因的影响 2009 目的:（1）观察葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制作用的特点及细胞形态学的变化情况。（2）检测不同浓度的葡萄籽提取物 原花青素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡情况。（3）探讨葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞中Survivin在分子和蛋白水平的表达情况。（4）分 析葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及其对其凋亡相关基因的影响，对葡萄籽提取物原花青素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的机制做初步 的探讨。 方法:（1）在第一部分细胞培养实验中，采用细胞形态学观察、HE染色、MTT法观察葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞细胞形态学的变 化及增殖抑制作用情况影响。（2）第二部分实验中，选取原花青素浓度在25μg/ml，分别与卵巢癌SKOV3细胞作用24h、48h、72h后，PI细胞周期、 Annexin V-FITC双染和TUNEL及Caspase-3活性的检测等方法观察原花青素作用后，对卵巢癌SKOV3细胞凋亡情况的影响。（3）第三部分实验中，选 取原花青素浓度在25μg/ml，分别与卵巢癌SKOV3细胞作用24h、48h、72h后，免疫组织化学DAB染色法测定SKOV3细胞中Survivin的表达情况。应用 RT-PCR和Western-blot的方法检测卵巢癌SKOV3细胞内Survivin分子水平和蛋白水平的表达变化情况。 结果:（1）SKOV3细胞形态学和HE染色发现，原花青素作用后，细胞膜皱缩，体积缩小。MTT法检测后得出，原花青素作用时间越长，药物浓度 越高，抑制细胞增殖现象越明显。（2）流式细胞仪、TUNEL及Caspase-3活性的检测显示，原花青素的诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用，同样呈时间 和剂量依赖性，同时发现葡萄籽原花青素可以激活细胞内Caspase-3的表达活性。（3）葡萄籽原花青素可以明显降低细胞内Survivin在分子和蛋白 水平的表达。 结论:（1）葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用。（2）葡萄籽提取物原花青素可以诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡 ，激活细胞内Caspase-3的表达。（3）葡萄籽提取物原花青素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中，可能与下调细胞内Survivin的表达有一定的关系。 （4）SKOV3细胞凋亡相关基因中，Survivin与Caspase-3的表达呈负相关。 8.会议论文 张文叶.姚二民.毛多斌.杨公明 超高压提取葡萄籽中原花青素的研究 2007 为有效提取葡萄籽中原花青素成分,采用常温超高压提取葡萄籽中原花青素.在单因素实验的基础上,采用正交实验法对原花青素的提取工艺条件 进行优选,选用L9(34)进行正交实验,以原花青素的得率为指标,考察粉碎度、超高压处理压力、保压时间、固液比(g∶mL)对原花青素得率的影响.得 到最佳工艺条件为:粉碎度80目、超高压压力350MPa,保压时间4min,固液比1∶20,提取次数3次.原花青素的提取得率可达3.312％,该法提取率高,时 间短,是一种新的提取方法. 9.期刊论文 马玉美.王辉宪.谢聃.王仁才.熊兴耀.MA Yu-mei.WANG Hui-xian.XIE Dan.WANG Ren-cai.XIONG Xing-yao 刺葡萄籽中原花青素的提取与成分分析 -酿酒科技2007,""(6) 对刺葡萄籽中原花青素的提取和纯化工艺做了初步的研究.采用传统的溶剂提取法.对影响提取效果的4个主要因素--提取剂浓度、料液比、提取 温度和提取时间进行了研究.通过正交分析得出最佳提取工艺:提取剂为70%乙醇,料液比(w/v)为1:7,提取温度为60℃,提取时间为2 h.并用有机溶剂 萃取法初步分离出低聚原花青素和高聚原花青素.通过HPLC对原花青素低聚物进行了成分分析,结果表明,所提取的产品与原花青素标准品成分基本一 致. 10.期刊论文 胡佳兴.楼一层.李淼.王晨.郭俊.HU Jia-xing.LOU Yi-ceng.LI Miao.WNG Chen.GUO Jun 葡萄籽 中原花青素的超临界CO2萃取工艺优选 -中国医院药学杂志2008,28(12) 目的:探讨超临界CO2流体萃取葡萄籽中原花青素的方法,选出最佳的提取工艺参数.方法:以原花青素含量为指标,考察了萃取温度、压力、CO2流 量、萃取时间4个因素对葡萄籽中原花青素的超临界CO2流体萃取的影响.结果:以甲醇做夹带剂,药材质量30g,萃取压力32MPa,萃取温度40℃, CO2流 量为10L·h-1的条件下萃取60min为最佳工艺.结论:超临界CO2萃取法提取葡萄籽中原花青素耗时少、准确、效率高. 引证文献(54条) 1.张文华.张霞 蚕豆皮中原花青素提取的工艺研究[期刊论文]-宁夏医科大学学报 2009(4) 2.李莹.朱丹宇.周剑忠 黑莓籽中原花青素的提取[期刊论文]-江苏农业科学 2009(3) 3.李倩.吴春.张绍英 原花青素的微胶囊化工艺研究[期刊论文]-中国科技成果 2009(6) 4.张素华 沙棘及其提取物中原花青素含量的分析测定[期刊论文]-沙棘 2008(1) 5.葛亮.张志强.杨清香 葡萄籽中原花青素提取工艺的研究[期刊论文]-农产品加工·学刊 2008(4) 6.马红江.王莹.葛彬.唐慧芬.李予霞.任雪艳 吐鲁番地区常见品种葡萄籽中原花青素和脂肪含量的测定[期刊 论文]-安徽农业科学 2008(8) 7.孙宏.张泽 分光光度法测定天然多酚类化合物含量的研究进展[期刊论文]-生物质化学工程 2008(3) 8.马红江.王莹.葛彬.唐慧芬.李予霞.任雪艳 葡萄籽中原花青素提取和测量方法研究[期刊论文]-安徽农学通 报 2007(23) 9.徐怀德.闫宁环.陈伟.张丽华 黑莓色素大孔吸附树脂纯化工艺及其特性研究[期刊论文]-中国食品学报 2007(5) 10.叶孝兆.周亮.莫启武.姚煜东 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