6-磷酸葡萄糖异构酶抗原检测在类风湿性关节炎中的诊断价值（2008年临床输血与检验）

62磷酸葡萄糖异构酶抗原检测在类风湿性关节炎中的 诊断价值 金跃　张建明　王书建　夏岁华 　　【摘要】　目的　检测类风湿性关节炎 (RA ) 患者血清 62磷酸葡萄糖异构酶 (GP I) 抗原水平, 探讨其在RA 诊断中的价 值。方法　选取RA 118 例, 非RA 106 例, 正常对照组60 例。对上述284 份血清进行GP I抗原、CCP 抗体及类风湿因子 ( IgM 2 R F ) 检测, GP I抗原水平与CCP抗体、IgM 2R F的相关性。结果　GP I抗原的阳性率在RA 中为84. 74% , 非RA 中为 5. 66% , 正常人均为阴性。GP I抗原、CCP 抗体及 IgM 2R F 对RA 诊断的敏感性和特异性分别为GP I 84. 74%、96. 39% , CCP 60. 17%、95. 18% , IgM 2R F 80. 51%、79. 52%。GP I抗原与CCP 抗体在RA 患者血清中阳性率的差异有显著性 (P < 0. 01) , 与 IgM 2R F 的差异无显著性 (P > 0. 05)。相关分析显示3 种方法的检测结果间存在相关性, 两两联合检测可提高诊断效能。 结论　EL ISA 法检测血清GP I抗原简便、结果可靠, 对RA 诊断具有高灵敏度和特异性, 可作为RA 患者一个新的诊断指 标。 　　【关键词】　62磷酸葡萄糖异构酶　　类风湿性关节炎　　类风湿因子 　　【中图分类号】　R 446. 11　　R 593. 22　　【文献标识码】　A 　　【文章编号】　167122587 (2008) 0220122203 D iagnostic Va lue of Glucose-6-phosphate Isom erase in Patien ts with Rheumato id Arthr itis　J IN Y ue, ZH A N G J ian2m ing , W A N G S hu2j ian, et a l. T he A f f ilia ted H ua ian H osp ita l of X uz hou M ed ica l Colleg e, H uaian 223002 　　【Abstract】　Objective　To detect gluco se262pho sphate isom erase (GP I) in pat ien ts w ith rheum ato id arth rit is (RA ) and exp lo re its diagno st ic value. M ethods　GP I, an ti2CCP an tibody and IgM 2R F w ere detected in 284 serum samp les, 118 from patien ts w ith estab lished RA and 166 from non2RA con tro ls. T he co rrela t ions w ere analyzed among GP I, an t i2CCP and IgM 2R F. Results　Among 118 patien ts w ith RA , 106 patien ts show ed po sit ive GP I (84. 74% ). W hereas, the po sit ive percen t w as on ly 5. 66% in 106 non2RA patien ts. T he sensit ivit ies and specificit ies of GP I, an t i2CCP and IgM 2R F w ere 84. 74% and 96. 39% ; 60. 17% and 95. 18% ; 80. 51% and 79. 52% in RA respect ively. T he data show ed that there w as a sign ifican t difference betw een the resu lts of GP I and an ti2CCP assaying (P < 0. 01) by tw o m ethods. How ever, no difference w as found betw een GP I and IgM 2R F assaying (P > 0. 05). GP Iw as associated w ith an ti2CCP and IgM 2R F. T he com binat ion of the tw o assays cou ld increase the diagno st ic value. Conclusion　D etect ing GP I by EL ISA m ay be a b rief, standard and reliab le m ethod. It m igh t p resen t mo re sensit ive and specific in clin ical diagno sis on RA. GP Im ay be a usefu l param eter fo r the diagno st ic w o rk2up of rheum ato id arth rit is. 　　【Key words】　Gluco se262pho sphateisom erase　　R heum ato id arth rit is　　R heum ato id facto r 　　类风湿性关节炎 ( rheum ato id arth rit is, RA ) 是由抗原驱动及T 细胞介导的自身免疫性疾病, 主 要病理变化是关节滑膜有慢性炎症和血管翳的形 成, 致使软骨和骨的破坏, 最终导致关节变形或强 直。RA 诊断以往主要检测类风湿因子 (rheum a2 to id facto r, R F ) , 近年来检测抗环瓜氨酸肽抗体 (抗2CCP) 已使检测RA 的敏感性和特异性得以提 高。最近发现62磷酸葡萄糖异构酶 (GP I)在RA 患 者血清和关节滑液中明显增高, 还有报道认为抗2 　　作者单位: 223002　江苏省徐州医学院附属淮安医院 　　作者简介: 金跃 (1968- ) , 男, 江苏淮安人, 副主任技师, 本科, 主要从事临床检验工作, (T el) 13776700883 (E2m ail) huaian jinyue @ 163. com。 GP I 与RA 相关。笔者通过检测GP I抗原在RA 患 者和其他自身免疫性疾病患者血清中的水平, 以探 讨其临床应用价值。 对象与方法 1　研究对象 1. 1　RA 组: 118 例选自本院 2006 年 1 月～ 2007 年5 月门诊和住院患者, 均符合1989 年美国风湿病 协会修订的诊断, 根据RA X 线分期分为É 期: 20 例, Ê 期: 26 例, Ë 期: 33 例, Ì 期: 39 例; 其 中男性36 例, 女性82 例; 年龄14～ 70 岁, 平均年龄 51. 2±3. 8 岁。 1. 2　非RA 组: 106 例均符合国际和国内相应诊断 标准, 其中包括系统性红斑狼疮 (SL E) 36 例, 骨关 ·221· J C lin T ransfus L ab M ed,A p ril. 2008,V o l 10,N o. 2 节炎 (OA ) 22 例, 强直性脊柱炎 (A S) 20 例, 多发性 肌炎ö皮肌炎 (PM öDM ) 16 例和干燥综合征 (SS) 12 例; 其中男性 20 例, 女性 38 例; 年龄 15～ 68 岁, 平 均年龄48. 5±2. 2 岁。 1. 3　正常对照组: 为本院体检的60 例健康人群。 2　标本采集　研究对象均清晨抽取空腹静脉血 4 m l, 3 000 röm in 离心10 m in, 取血清置于- 20℃保 存待检。 3　实验方法 3. 1　GP I 抗原检测: 采用上海北加生化试剂有限 公司生产的双抗体夹心EL ISA GP I 检测试剂盒。 其中包括6 个GP I标准品 (0、0. 16、0. 33、1. 0、2. 0、 20 Λgöm l) 和阴、阳性对照。操作严格按说明书进 行。血清1∶10 稀释, 结果以> 0. 2 Λgöm l 为阳性。 3. 2　CCP 抗体检测: 采用德国欧蒙医学实验诊断 公司CCP 抗体EL ISA 检测试剂盒。其中包括5 个 CCP 抗体标准品 (0、2、8、30、100 RU öm l) 参考质 控及阴、阳性对照。操作严格按说明书进行。标本1∶100 稀释, 结果以> 5 RU öm l 为阳性。3. 3　 IgM 2R F 检测: 应用德灵诊断产品有限公司(上海) 生产的试剂盒, 采用免疫比浊法检测, 以>20 U öm l 为阳性。4　统计学处理　应用SPSS 15. 0 fo r w indow s 统计软件, 采用配对资料 M cN em ar ς 2 检验和Kendall′s T au2s 相关分析, 计量资料采用 t 检验,多组间比较采用方差分析。结　　果1　GP I 抗原检测结果　118 例RA 患者血清GP I抗原 100 例阳性, 阳性率 84. 74% ; 106 例非RA 患者血清GP I抗原6 例阳性, 阳性率5. 66% ; 其中SL E2 例、OA 1 例、A S 1 例、DM 1 例、SS 1 例; 60 例正常人血清均为阴性。GP I抗原检测与其他诊断试验对RA 的检测结果见1。 表 1　GP I抗原、CCP 抗体、IgM 2R F 对RA 诊断结果 检测指标 灵敏度 (% ) 特异性 (% ) 阳性预测值 (% ) 阴性预测值 (% ) 阳性似然比 阴性似然比 GP I抗原 84. 74 96. 39 94. 34 89. 89 22. 30 0. 16 CCP 抗体 60. 17 95. 18 89. 87 77. 07 12. 48 0. 42 IgM 2R F 80. 51 79. 52 73. 64 86. 28 3. 93 0. 25 2　GP I 抗原与CCP 抗体、IgM 2R F 对RA 诊断的 相关性分析　对118 例RA 患者血清同时检测CCP 抗体、IgM 2R F, 结果GP I 抗原与CCP 抗体差异有 显著性 (P < 0. 01) , 但与 IgM 2R F 的差异无显著性 (P > 0. 05) ; 相关分析显示GP I 抗原与CCP 抗体、 IgM 2R F 的相关性均有显著性, 见表2、3。 表 2　GP I抗原与CCP 抗体在RA 中的分布 CCP 抗体 GP I抗原 + - 病例数 + 68 7 75 - 32 9 41 合计 100 16 116 　　ς 2= 17. 86, P < 0. 01; r= 0. 179, P < 0. 05 表 3　GP I抗原与R F 在RA 中的分布 IgM 2R F GP I抗原 + - 病例数 + 86 5 91 - 14 11 25 合计 100 16 116 　　ς 2= 0. 738, P > 0. 05; r= 0. 547, P < 0. 05 3　GP I 抗原与CCP 抗体、IgM 2R F 两两联合检测在RA 诊断中的价值　GP I抗原、CCP 抗体两者阳性符合率和阴性符合率分别为68% 和9%。GP I抗原与 IgM 2R F 阳性符合率为86%。GP I抗原与CCP抗体联合检测的敏感性为9 3. 9 2 % , 特异性为91. 74% , GP I 抗原与 IgM 2R F 联合检测的敏感性为97. 03% , 特异性为76. 65%。4　根据RA 的病情进展结合X 线将RA 分为4 组,见表4。É 期组GP I水平与正常对照组相比差异无统计学意义 (P > 0. 05) ; Ê 期与É 期及正常对照组相比差异有统计学意义 (P < 0. 01) ; Ê 2Ì 期组间比较差异有统计学意义 (P < 0. 01)。提示随RA 病情进展血清GP I抗原水平呈递增趋势。表 4　RA 患者各期GP I抗原检测结果 (Λgöm l)组别 例数 GP I(xθ±s)正常对照组 60 0. 11±0. 04É 期组 20 0. 15±0. 06Ê 期组 26 1. 27±0. 53Ë 期组 33 2. 95±1. 25Ì 期组 39 4. 02±1. 89 ·321·临床输血与检验　2008 年 4 月第 10 卷第 2 期 讨　　论 　　GP I 是一种催化 62磷酸葡萄糖向 62磷酸果糖 转化的在糖酵解和糖异生过程中的重要酶类, 存在 于细胞浆或细胞外液中, 并具有细胞生长因子活 性, 可诱导髓样干细胞向单核细胞及B 细胞向浆细 胞的分化。近年来Schaller 等[ 1 ]报道, 在T 细胞受体 转基因小鼠模型中, 小鼠的炎症与人类RA 非常一 致, 且均有GP I抗体高浓度表达[ 2 ]。 　　本研究结果显示RA 患者血清GP I 阳性率高 于非RA 患者组和正常对照组 (P < 0. 01) , 表明血 清GP I抗原的检测对RA 诊断具有重要价值。GP I 作为一种广泛表达的抗原, 能诱导D öBxN 鼠发生 关节炎, 目前已受到临床普遍重视。Gu rney 等[ 3 ]发 现GP I 抗原与神经白介素 (N eu ro leuk in, NL K) 有 90%同源性, 将NL K 的DNA 转移至猴的CO S 细 胞内, 其表达的产物显示出 GP I 的酶活性。Yu 等[ 4, 5 ]研究发现, GP I在肿瘤细胞内存在, 并可调节 基质金属蛋白酶23 (m atrix m eta llop ro teinase23, MM P23) , 而MM P23 在RA 患者的滑膜细胞和血 管内皮细胞中高表达, 有较为显著的促进骨破坏作 用[ 3 ]; 此外, GP I 可促进淋巴细胞增殖, 对患者的血 管增生和滑膜增殖有一定作用。本研究采用EL ISA 法 检测 GP I抗原的敏感性和特异性分别为 84. 74%、96. 39% , 与卿之驹[ 6 ]等报道一致。 　　分析GP I抗原与CCP 抗体、IgM 2R F 在RA 中 的分布, 显示GP I抗原与CCP 抗体及 IgM 2R F 并不 完全重叠, 有理由认为GP I 抗原有可能成为 IgM 2 R F 和CCP 抗体以外新的标记物。从表1 可见, GP I 抗原对RA 的诊断价值均优于CCP 抗体和 IgM 2 R F。GP I抗原和CCP 抗体联合检测的敏感性和特 异性分别为 93. 92% 和 91. 74% , GP I 抗原与 IgM 2 R F 联合检测的敏感性和特异性分别为 97. 03% 和 76. 65%。联合检测可提高实验的敏感性, 并保持一 定的特异性, 从而提高实验的诊断效能。 　　为探讨GP I水平与骨侵蚀性损害的关系, 我们 对118 例RA 各期患者的GP I抗原水平进行比较发 现, 随着RA 病程的发展, 血清GP I 抗原水平显著 升高。表明在RA 发展过程中, 存在着多种病理因 素导致关节滑膜慢性炎症。滑膜液中可溶性GP I与 抗2GP I2IgG 抗体形成免疫复合物, 沉淀在滑膜、滑 膜动脉和毛细血管内皮细胞壁上, 通过Fc 受体的 介导或旁路途径使补体激活, 诱发关节炎症。内皮 细胞表面的GP I与GP I抗体结合后, 通过滑膜血管 内皮细胞受体, 免疫复合物直接粘附在内皮细胞表 面, 使炎症细胞向关节局部漫移, 引起免疫损伤, 导 致骨质侵蚀性损害。 　　总之, GP I 抗原可用于RA 临床检测, 对疾病 的诊断、鉴别诊断及预后有重要价值; 且EL ISA 检 测方法简单、结果可靠, 非常适用于临床推广应用, 并具有广泛的研究前景。 参　考　文　献 1　Schaller M , Burton DR , D itzel HJ. A u toan tibodies to GP I in rheum ato id arth rit is: linkage betw een an an im al model and hum an disease [J ]. N at Imm uno l, 2001, 2 (8) : 7462753. 2　K im JY, L ee M H , Jung K I, et a l. D etect ion of an it ibod2 ies again st gluco se 62pho sphate isom erase in synovial flu id of rheum ato id arth rit is u sing su rface p lasmon resonance[J ]. Exp M o lM ed, 2003, 35 (4) : 3102316. 3 　Gurney M E, H ein rich SP, L ee M R , et a l. M o lecu lar clon ing and exp ression of neu ro leuk in, a neu ro troph ic facto r fo r sp inal and senso ry neu rons [ J ]. Science, 1986, 234 (4776) : 5662574. 4　Yu FL ,L iao M H , L ee JW , et a l. Induction of hepatom a cells m igrat ion by pho sphate gluco se isom erase au2 tocrine mo tility facto r th rough the up regu lat ion of m a2 t rix m etallop ro teinase23 [ J ]. 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