人胎盘与骨髓源性间充质干细胞体外培养及生物学特性对比

灾灭最 基础医学 咔- 国组 织 工 程研 究 与临床康 复 搿 ‘ 73 吞 笳 79 z妒 2009 — 05 — 07 出版 J ournalofC linicalR ehabilitative T issue E ngm eering R esearch M ay7，2009 V 0 1． 13, N o 19 人胎盘与骨髓源性间充质干细胞体外培养及生物学特性对比糕 穆晓红 ， 徐 林 ， 赵子义 ， 李小平 ， 陈 江 In vitro culture and bio logicalcharacteristics ofhum an placendta m esenchym alstem cells versus hum an bo ne m arrow m esenchym alstem cells M u X iao— hong， X u L in， Z hao Z i— yi， L iX iao— ping， C hen J iang A bstract D epartm enI of O rLhopaedics， D ongzhim en H ospital． B eijing U niversity ofC hinese M edicine， B eijing 100700 ． C hina M u X iao- hong☆ ． S tudyingfor doctorate ． A ssociate chiefphysician ． D epartm entof O rthopaedics． D ongzhim en H ospital． B eijing U niversitvofC hinese M edicine。 B eijing 100700． C hina M xh 一 2004 @ 163 com C orrespondence to： Z hao Z i— yi． D octor． As sociate chief physician ， D epartm entof O rthopaedics． D ongzhim en H ospital， B eijing U niversityofC hinese M edicine， B eijing 100700。 C hina zhaoziyi@ hotm ail corn S upportedby：the NationaI N atural S cience F oundation ofC hina． N o 3060084 7’ R eceived：2009 - 03 - 27 A ccepted ：2009 ．- 04 - 08 3708 B A C K G R O U N D ：T issue engineeringrepairforblocks oftissue defects needs a highconcentration anda large num berofcells for jncubation． B one m arrow m esenchym alstem cells (B M S C s)are a m ain source ofseed cells， butthere are som e problem s： Iim itation ofnum ber；celIfunctionaldegradation． O B J E C T IV E ：T o ／n vitro isolate。 culture andam plifyhum an placenta m esenchym alstem cells (hP M S C s)and hum an B M S C s， and observe theirbiologicalcharacteristics D E S IG N 。 T IM E A N D S E T T lN G ：T he cytological， ／n vfro controlledstudyw as perform edatthe L aboratoryofD ongzhim en H ospital from S eptem ber2008to F ebruary 2009 ． M A T E R IA L S ：P lacenta w as supplied byD epartm entofG ynaecologyandO bstetrics。 G eneraI H ospitalofA ir F orce ofC hinese P L A B one m arrow w as obtained from healthyadultdonors． M E T H O D S ：H P M S C s w ere isolatedfrom placenta offetation hum an bydensitygradientcentrifuge F ollow ingbone m arrow heparin anticoagulation． hum an B M S C s w ere isolated， purified and passaged bydensitygradientcentrifuge． M A IN O U T C O M E M E A S U R E S ：C elI m orphologyand grow thw ere observed under an inverted phase contrastm icroscope ． T he 5” passage cells w ere detected byflow cytom etry． D ifferentiation ofcells w as determ ined usingV on K ossa stainingandO _lredO staining． R E S U L T S ：H P M S C s andhum an B M S C s w ere bothuniform lyspindle- shapedin appearance undera m icroscope T he proliferative abilityofhP M S C s w ere quite stronganddeclinedw ithpassages． A ftercultured 10 passages ／n vitro， cellgrowt h becam e slow ， butam plified m ultiple ofhP M S C s w as over2 — 3 orderofm agnitude com paredw ith hum an B M S C s B othhP M S C s and hum an B M S C s expressed C D 29 。 C D 4 4 andC D l66， butdidnotexpress C D 34 ， C D 4 5 and H L A _D R ． B othcells hadthe potentialofosteogenic andadipocytic differentiation， buthP M S C s hadstrongerpotential． C O N C L U S lO N ：H P M S C s and hum an B M S C s have sim ilarbiologicalcharacteristics andthe proliferative abilityofhP M S C s iS strongerthan hum an B M S C s ． M u X H ， X u L ， Z hao Z Y ， L iX P ， C hen J ． In vitro culture and biologicalcharacteristics ofhum an placendta m esenchym alstem cells versus hum an bone m arrow m esenchym alstem cells Z hongguo Z uzhiG ongchengY anjiu yu L inchuang K angfu ． 2009；13(19)： 3708- 3712 ． [http：llw w w ． crter． cn http：／／en ． zglckf． com 】 摘要 背景 ： 组 织工 程修复大块组织缺损需要 高浓度 、 大量 的细胞接种 ， 骨髓 间充质干细胞是种子细胞的主要来源 ， 但存在数量上 的局 限性及 长期传代后细胞功能老 化 的 问题 。 目的 ： 体外分离培养 、 扩增人胎盘源性间充质干 细胞与人骨髓 间充质干 细胞 ， 并对其生物学性状进行 比较 。 设计 、 时间及地 点 ： 细胞学体外对照 观 察 ， 于 2008 09／2009 02 在东直门医院实验 室完成 。 ： 胎盘 由解放军空 军总医 院妇产科提供 ， 骨髓来源 于健康成 人献髓者 。 方 法 ： 采用密度梯度离心 法 从胎 盘 中分离 、 纯化和传代培养人胎盘源性 间充质干 细胞 ； 骨髓 肝素抗凝后 ， 采用密度 梯度离心 法分离 、 纯 化和传代培养人骨髓基质干 细胞 。 主要观 察指标 ： 用倒置 相差显 微镜观察两种细胞形态 及 细胞 生长情况 ， 流式细胞仪分析第 5 代细 胞表 面标志 的表达 ， V on K ossa 染色及 油红 O 染色检测分化能力 。 结 果 ： 镜下 两种细胞均为贴壁 生长 ， 形态为均 一 成纤维细胞样 ， 传 5 代后细胞 的增殖 能力随传 代 次数的增加 而有所 下 降 ， 体外培养 10 代后细胞 生长速度减慢 ， 但 人胎盘源性 间充质 干 细胞扩增倍数较人骨髓基质干 细胞平均高出两三 个数量级 。 两 种细胞 具有均 一 的细胞表型 ， 均表达 C D 29 ， C D 4 4 ， C D l66 ， 不表达 C D 34 ， C D 4 5 ， H L A — D R 。 两种细胞都具有成骨 、 成 脂分化潜能 ， 但人胎盘源性间充质干细胞分化潜能更强 。 结论 ： 人胎盘源性间充质干 细胞与人骨髓基质干细胞具有相似的生物学特性 ， 且 前者具有更强的增殖 能力 。 关键词 ： 组织工 程 ； 人胎盘问充质干细胞 ： 人骨髓 间充质干 细胞 ： 生物学特性 doi：10． 3969／j． issn． 1673 - 8225 ． 2009 ． 19 ． 021 穆晓红 ， 徐林 ， 赵 子义 ， 李小平 ， 陈江 ． 人胎 盘与骨髓源性 间充质干 细胞体外培养及 生物学特性对 比 [J 】． 中国组织工 程研 究与 临床康 复 ， 2009 ， 13(19)：3708- 3712 ． 【http：／／w w w ． crter． org http：／／cn． zglckf． com 】 R O ． B ox 1200, S henyang 110004 cn zglckf, com 穆跷鲤 ． 等 ． A 稽盘s骨髓源 性惩 充磺于 缀 匏体外培养及 生 物学特性对 比 0 引言 在组 织 工 程 的研 究与应用 中 ， 种 子细 胞 的 选 择 及 其规模化 扩 增研 究 一 直 是骨 组 织 工 程 面临的重 要课题 ¨J 。 骨髓 间充质干 细胞 是 目前 备 受关 注 的 一 类 具 有 多 向分化 潜 能 的组 织 干 细胞 ， 在体 内外适 当的诱导环 境下可 以分化 为 骨 、 软骨 、 脂肪 、 肌 肉 、 神经 、 肌腱及韧带等 多种组 织细胞 。 该细胞群可 在体外大规模扩增 而 不丢 失多 向分化潜能 ， 并且 异 体移植免疫排 斥 反应小 。 对骨髓 间充质干 细胞研 究的不 断深 入 为解决骨 、 软骨组 织工 程细胞来源 这 一 难题 带来 了前所未有 的希望 瞄 。 怕 J 。 利用骨髓 间充质 干 细 胞 进 行 骨 与 软组 织 缺 损 的修 复 也是 目前 研 究 的热 点 。 目前骨髓 间充质干 细胞主要来源 于骨髓 ， 但 人骨髓 中充质干细胞 的含量极低 ， 仅 占骨髓有核 细胞的十万分之 一 。 此外 ， 在衰老和疾病状况下 ， 骨髓 问充质干细胞 的数量和 分化潜能下 降 ， 并且 采集骨髓为创伤性过程 ， 以上 原因限制 了其作为 组织工 程种子细胞的临床应用 【16 - 21 ] o 为满足 组 织 工 程对 问充质干 细胞 的大量 需要 ， 寻找 问充 质干 细胞新 的来源成 为必 然趋判 碰 它 引 。 近 年 来 不 断有 能满 足 临床 各 种 需 要 的不 同来源 的成体干，祖细胞被分离 的报 道 ， 如脂肪 源性间充质干 细胞 、 外周血 源 性间充质干 细胞 等 ， 而最近 报道 的胎盘源 性 问充质干 细胞更 以 其取材不受 限制 、 数量 多 、 能预先 培养储存等 优势而 成 为研 究重 点 。 另外 ， 人胎盘源性问充质干细胞取材几 乎不 受限制 ， 胎盘在胎儿 娩出后就完成使命 ， 成为“ 废 弃 ” 物 ， 只要正 常分娩的健康产妇在知情同意 的 基础 上 ， 都能够提供胎盘 。 与捐献骨髓或采集动 员外周血 相 比 ， 供者无痛苦 ， 污染机会少 ， 不涉 及社会 、 伦理 及法律方 向更多的争论 。 对 人胎盘来源 的间充质干 细胞研 究 已经 展 开 ， F ukuchi掣 1bJ 已从成熟胎盘小叶中获得胎盘 源性问充质干 细胞 ， 可 表达数种干 细胞标志性 基 因 。 实验拟通 过体外细胞培养的对 人胎 盘源 性问充质干 细胞进行分离 、 纯化 ， 比较观 察其与人骨髓基质干 细胞 的生物学特性 ， 为进 一 步进行组织工 程相关研 究提供实验依据 。 1 材料和方 法 设计 ： 细胞学体外对照 观察 。 |S S N 1673 — 8225 C N 21 — 1 539，R coD E N ：zL K H A H 时间及 地 点 ： 于2008— 09／2009 - 02在东直 门 医 院实验室完成 。 材 料 ： 胎 盘 由解 放 军 空 军 总 医 院妇 产科提 供 ， 捐献者知情 同意 ， 实验方 案经 医 院医学伦理 委 员会批准 。 骨髓 来源 于健康成人献髓者 。 试剂与仪器 来源 密度 为1 ． 073 g／m L 的P ercoll分离液 低糖型 D M E M 培养基 胎牛血 清 胰酶 流式细胞仪 P harm acia公 司 G ibico公 司 H yclone公 司 P harm acia公 司 F A C S C alibur， 美 国 实验 方法 ： 人胎 盘 源 性 间 充 质 干 细 胞 的 分 离和 培 养 ‘⋯ ： 胎 盘 分 离 后 ， 立 刻 从 脐 血 管 注 入 肝 素 (1 ：250) 1 50 - 5 00 m L ， 浸泡 于含有 100 U ／m L 青霉 素 、 100 U ／m L 链霉素 P B S 液 中保持无菌 ， 常温 下带 回实验 室 。 4 - 6 h内进 行人胎盘源 性 间充质干 细 胞 分离 ， 取 胎 盘小叶(去 除羊膜及 蜕膜 、 颜色鲜 艳无 瘀 血 )剪碎 ， 置 入 含 0 ． 1 ％ 胶 原酶 Ⅳ 、 O ． 1％ 透 明质 酸 酶 、 0 。 01 ％ D N asel的 D M E M 中 ， 3 7 ℃ 水 浴 1 5 - 25 m in 。 P B S 中和 ， 120 目筛 网过 滤 ， 1 000 r／m in离 ,D 8 m in ， 细胞重悬 ， 1 ． 073 g／m L P ercoll分离液分离 ： 先将 P ercoll分离液置 于试管 的底部 ， 然后按照 1 ：1 的比例缓慢滴加稀释后 的 细胞悬液 ， 使两者 问形成清晰 的界面 ， 2 500 r／m in 离 ,D 30 m in ， 吸取 中间的 白膜层 ， 即单个核细 胞层 ， P B S 漂 洗 ， 1 5 00 r／m in离心 1 0 m in ， 弃 上 清 ， 加 入 含 体 积 分 数 为 10％ 胎 牛 血 清 的 D M E M 培养液 10 m L ， 制成 单细 胞悬 液 ， 接种 于 75 cm 。培养瓶 内 ， 调 整 浓度 为2 ． 0 x 1 05／cm 。 ， 置 于 37 ℃ 、 含体积 分数 为5 ％ 的 C 0 2培养箱 内 孵育 。 4 8 h后 除去非 贴壁 细胞 ， 更 换新鲜培养 液 。 之 后 每 三 四天 换液 一 次 。 待 贴壁 细 胞 生 长 至 9 0％汇 合 时 ， 用 2 ． 5 g／L 胰 蛋 白酶消化 ， 按 1 ： 1 比例传代 ， 第2代 以后 的细 胞 按 1 ：2或 1 ：3 的 比例传 代培养 。 于倒置 相 差显 微 镜下观 察细胞 生 长 情 况 。 人 骨髓 基质 干 细 胞 的分 离和 培养 。⋯ ’： 将采 集到 的 骨 髓 用 1 ：25 0肝 素 抗 凝 处 理 ， 经 L — D M E M 1 ：5稀释后 ， 置 于等体积 P ercoll(密度 1 ． 073 g／L ) 分离液上 ， 1 000 r／m in离 ,D 20 m in ， 吸取 中间的 白膜层 ， 即单个核细胞层 ， P B S 漂洗 ， 1 500 r／m in 离 ,D 10 m in ， 弃上 清 ， 加入 含体积 分数 为 10％ 胎 牛血 清的 D M E M 培养液 10 m L ， 制成单细胞 北 京 中 医 药 大 学 东直 门 医 院 骨 科 中 心 ， 北 京 市 100700 穆 晓 红 ☆ ， 女 ， 1 972 年生 ， 河 南 省 郑 州 市 人 ， 汉 族 ， 北 京 中医 药大 学在读博士 ， 副主 任 医 师 ， 主要 从 事 骨 组 织 工 程 方 面 的研 究 。 M xh 2004 @ 163 ． corn 通 讯 作 者 ： 赵 子 义 ， 博士 后 ， 副主 任 医 师 ， 北 京 中医 药 大 学 东直 门 医 院 骨科 中心 ， 北 京 市 100700 zhaoziyi@ hotm ail． com 国 家 自然 科 学基 金 资 助 项 目 (3060084 7 ) ‘ 中图分类 号：R 394 ． 2 文 献 标 识 码 ：B 文 章编 号：1673 - 8225 (2009)1 9 - 03708- 05 收稿 日 期 ：2009 - 03 ． 27 修 回 日 期：2009-0 4 - 08 (20090305006／Z S r Q ) 3709 《醪疋死露～ c一 ． 。母 悬 液 ， 接 种 于 75 cm 。培 养 瓶 内 ， 调 整 浓 度 为 2 ． 0 × 1 05／cm 。， 置 于37 ℃ 、 体积 分数 为5 ％ 的C 0 2培养箱 内 孵育 。 4 8 h后 除去 非贴壁 细胞 ， 更换新鲜培养液 ， 待 细胞 生 长至 90％融合 时 ， 用2 ． 5 g／L 胰 蛋 白酶 消化 ， 按 1 ：1 比例传代 ， 第2代 以后 的细胞 按 1 ：2或 1 ：3 的 比 例传 代培 养 。 于 倒置 相 差 显 微 镜 下 观 察 细 胞 生 长 情 况 。 细 胞 表 面 抗 原 分 子 流 式 细 胞 仪 检测 ” “ ： 用2 ． 5 g／L 胰 蛋 白酶 消化 第5 代人 胎 盘 源 性 问充质 干 细 胞 细 胞 和 人骨 髓基 质干 细胞细 胞 ， 1 000 r／m in离心 5 m in ， 细 胞 重 悬 。 调 整 细胞浓 度为5 × 10。 一 ， 与抗 C D 29 ， C D 34 ， C D 4 4 ， C D 4 5 ， C D l66 ， H L A — D R 单克隆抗 体室温 反 应 30 m in ， P B S 洗 涤2次后 ， 与 F IT C 或 P E 标 记 的二 抗 避 光作用3 0 m in ， 将洗 涤 后 的细 胞 重 悬 于 P B S 中 ， 待 测 。 细 胞 体 外 扩增 ”“ ： 把新 分 离的人胎盘源性 问充质 干 细 胞 及 入骨 髓 基 质 干 细 胞 分 别接 种 于 含 体积 分数 为 10％胎 牛血 清 的 L ． D M E M 培养液 中培养 。 当细 胞 达 到 90％融合 时 ， 消化细 胞 并检测 细胞扩 增倍 数和 分化潜 能 。 剩余25 ％细胞 重 新接种培养 ， 直至 细胞衰老 停止 增殖 。 细胞 分化潜能检测 ： 成骨分 化 ”“ ’： 将 以上 人胎盘源性间充质干 细胞和人骨 髓基 质干 细胞 以每孔 1 × 10。个细胞浓度分别接种 于 24 孔培养板 ， 进行成骨细胞表型分化测定 。 成骨诱导液使 用含体积分数为 10％胎牛血 清 、 100 nm ol／L 地塞米松 、 10 m m ol，L B 一 磷酸甘油 、 0 ． 05 m m oI／L 2一 磷酸 一 L 一 抗坏 血 酸的L ． D M E M 培养液中 。 诱导液每周更换2次 ， 3周后 去除培养液 ， P B S 冲洗 ， 体积分数为90％ 乙 醇 固定 ， V on K ossa染色检测钙 盐沉积情况 。 成脂肪 分 化 ”“’： 将 以上人胎盘源性问充质干 细胞和人 骨髓 基 质干 细胞 分别接种 于 24 孔培养板进 行成脂肪 诱 导 ， 每孔接种细胞数为4 × 1 0。个 。 脂肪细胞诱导液为含 体积分数为10％胎牛血 清 、 0． 05 m m ol／L 异丁基 一 甲基黄 嘌呤 、 200 lJ - m ol／L n~l哚美辛 、 10七 m ol／L 地塞米松 、 10 g／L 胰 岛素的高糖D M E M 培养液 ， 每周换液2次 。 2周后用体 积分数为 10％ 的甲醛 固定 ， 油红 O 染色 。 主要 观 察指标 ： ①细 胞形态观察及 生长情况 。 ②细 胞表面抗原分子的表达 。 ③细胞体外增殖特性 。 ④细胞 体外分化潜能 。 设计 、 实施 、 评估者 ： 设计为第三 作者 ， 实施 为第 一 作者 ， 评估为第二 作者 ， 均经过系统培训 ， 未使用盲 法评估 。 2 结果 2 ． 1 两种 细 胞形 态观 察及 生长情况 3710 人胎盘 源性 间充质干 细胞 ： 密度梯度离心 法分离的人胎盘 源性 问充质干 细胞 大 多为圆 形 单核 细胞 ， 混 有少量红 细胞 。 接种72 h， 培养瓶底约25％ 区域 出现贴壁细胞 ， 为梭形 ， 胞浆丰富， 核染色质深 ， 核1_ 明显 ， 呈平行排列或漩涡样生长 ， 形态类似 成纤 维细胞 。 贴壁细胞约2周接近 80％ 一 90％汇 合 ， 出现 致密 的贴壁层 ， 细胞生长 旺盛 ， 增殖迅 速 ， 呈 集落方式生长 ， 见图1 。 传代细胞 四五 天 可增殖 1倍 ， 培养细胞可 稳定生长传代 ， 传 至 1 0代 后细 胞 生长速度减慢 。 人骨髓基质干细胞 ： 密度梯度离心 法分离的人骨髓基质干细胞大多为圆形 即核细胞 ， 混 有红 细 胞数量略多于人胎盘源性 间充质干细胞 。 细胞经 换液与传代纯 化 ， 24 h后 出现较多细胞贝占壁 ， 贴壁细胞接近 80％ - 90％汇 合后 出现 致 密 的贴壁层 。 四五 天 后开 始 以细胞集落方式生长 ， 数量增多 ， 细 胞 呈长梭形 ， 排 列紧密 ， 见 图2 。 2． 2 两种 细 胞表面抗原分子的表达 流式细胞仪分析细 胞表面抗原结果表 明 ， 实验 中分离扩增 的人胎盘源性间 充质干 细 胞 与人骨髓 基 质干 细 胞都 具有 均 一 的细 胞 表 型 ， 表 明细胞纯度较高； 两种细胞均表达C D 29 ， C D 4 4 ， P O ． B ox 1200, S henyang 110004 cn ． zglckf, com 穆晓红 ． 等 。 A 黔盘 s嚣髓源 性 阃充质 干 镪 匏 体外培养及 生物学特性列 眈 W W W ． C R T E R ． org C D l66， 不表达 C D 34 ， C D 4 5 ， H L A - D R ， 见 图3 。 2 ．4 两种 细 胞体 外分化 潜能 比 较 2 ． 3 两种 细 胞 体 外增殖 特性 比 较 在使用含体积 分数 为10％胎牛血 清培养液 、 未添加 生长 因子 的情况下 ， 人 胎 盘源 性 问充质干 细胞 与 人骨 髓 基质干 细 胞均在 体外 扩增 10周 以上 ， 但人胎盘源 性 问充质干 细胞扩增倍数较 人骨髓基质干 细胞平均高出两三 个数量 级 ， 见 图4 。 0 2 4 6 8 10 12 tlw k F igure 4 G row thcurve ofhum an placenta m esenchym alstem cells fH P M S C s)versus hum an bone m arrow m esenchym alstem cells (H B M S C s) 图 4 人胎 盘源 性间充质 干 细 胞和 入骨髓摹质 于细胞 的生 长 曲线 比较 ，S S N 1673 — 8225 C N 21 — 15 39／R C O D E N ：Z L K H A H 成骨细 胞 表型 分 化 ： 人胎盘 源性 间充质干 细胞 和 人 骨髓 基质干 细胞经 过 3周成骨诱导培 养 后 ， V on K ossa染 色后 均有钙盐 沉积 。 与人骨 髓 基质干细胞 比较 ， 人胎盘源 性 间充质干细胞钙盐 沉积面积 明 显增加 ， 并且 着色 强度增 强 。 提示 两种细 胞都具有成骨 分化潜能 ， 但 人胎盘 源性 间充质干 细 胞较 人骨 髓 基 质干 细胞 具有更 强 的成骨 分化 能力 ， 见 图5 。 。 脂肪 细 胞 表 型分 化 ； 在脂 肪 诱导条件下培养2周后 ， 人胎盘源性 间充质干细胞分化形 成 的脂肪 细胞连接成片 ， 胞浆 内形成大的脂肪液滴 ： 人骨髓基质 干细 胞亦能够分化为脂肪细胞 ， 胞 浆 内有脂肪液滴形 成 ， 脂肪液滴相对 较 小 。 表 明两种细 胞都具有成脂 肪分化能力 ， 但人胎盘源性 间充质干 细胞 较人骨髓基 质干 细胞具有更强的成脂分化 能力 ， 见 图6 。 一懑麟 a：H P M S C s group b：H B M S C s group F igure 5 A fter3 w eeks ofo~ eogenic jnduction， calcium salt m ineralization area w as Iarger in the hum an place nta m esenchym alstem cells (H P M S C s)than in the hum an bone m arrow m esenchym alstem cells fH B M S C s)． andthe strengthw as greater in the form erthan in the later(V on K ossa staining， x 200) 图 5 成骨诱导 3 周后 ， 人胎盘源性 间充质干 细胞钙盐沉 积 面积 大于人骨髓基质干 细胞 ， 且 前音着色强度 也 高于 后 者(Y on K ossa 染 色 ， × 200) ◆ 一篡藿 。 ：奄 鼍 溥 0 a：H P M S C s group b：H B M S C s group F igure 6 A fter2 w eeks ofadipogenic induction， a greater num berofadipocytes w ere found in the hum an placenta m esenchym alstem cells (H P M S C s)group than in the hum an bone m arrow m esenchym alstem cells (H B M S C s)group(O ilred— O staining， x 200) 图 6 成脂肪诱导 2 周 后 ， 人胎盘 源性 间充质干 细胞较人骨 髓 基质干 细胞 有 更 多脂 肪细胞 形成 (油红 O 染色 ， × 200) 3711 " w " " " " ” Ⅶ " 2死2 w w w ． C R T E R ． 0 rg 穆晓红 ． 等 。 人骆盘s骨髓源性同充质干 细匏体外培养及 生物学特性对 比 3 讨论 研 究发现 ， 胎盘组织 中也存在 问充质干 细胞 陋 。 引 ， 而 且 人胎盘源性 问充质干 细胞具有来源 丰 富 ， 增殖 能力 强 ， 体内移植引发的免疫排斥反应小 ， 并可 以表达多种 造血 相关 因子等优点 。 实验采用密度梯度离心 法分离培养人胎盘源性问充 质干细胞 ， 通过 P ercoll分离液(密度1 ． 073 g／m L )分离人胎 盘源性 问充质干 细胞 ， 以此法可 以获得 比较单 一 的细胞 群 。 从实验 中可 以看出 ， 人胎盘源性间充质干细胞具有与 人骨髓基质干 细胞极为相似的细胞形态 ， 均呈平行排列或 漩涡样生长 ， 形态类似成纤维细胞 。 传代细胞 四五天可增 殖 1倍 ， 培养细胞可稳定生长传代 ， 人胎盘源性问充质干 细胞扩增倍数较人骨髓基质干 细胞平均高出两三 个数量 级 ， 提示胎盘来源 的多能细胞可 能是非常原始的细胞群 ， 比成体干 细胞具有更强的 自我更新和 多系分化能力 。 此外 ， 在 一 定 的诱导条件下 ， 人胎盘源 性问充质干 细胞可 分化为成骨细胞 、 脂肪细胞 ， 诱导体系与人骨髓 基质干 细胞没有 明显差别 ， 表 明人胎盘源性 问充质干 细 胞 同样具有广泛 的分化潜能 ， 对其分化 的进 一 步探索也 是今后研 究的重 点方 向 。 通 过对 人胎 盘源 性 问充质干 细 胞 的生物学特 性观 察和细胞鉴定 ， 提示人胎盘源 性问充质干 细胞与人骨髓 基 质干 细 胞有相 似 的细 胞表 面标 志 ， 两种细 胞均 表达 C D 29 ， C D 4 4 ， C D l66 ， 不表达 C D 34 ， C D 4 5 ， H L A — D R ， 说 明两种细胞 具有相似的生物学特性 。 实验 结果证 明人胎盘源 性 问充质干 细 胞 具 有 与人 骨髓基质干 细胞媲美的生物学特性 ， 并且 具有较人骨髓 基 质干细胞更优越 的潜能 ， 有可 能作为组织工 程理 想种 子细胞 的重要来源 。 4 参考文献 【4 】 37 12 Y ao w x． P eiG X ．L iu Y ．etalS hengw u Y ixue G ongcheng yu L inchuang． 2007；11f2)：85 — 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