酶联免疫吸附试验检测人血浆中纤维蛋白原含量

中国实用医药2011年 6月第 6卷第 17期 China Prac Med，Jun 2011，Vo1．6，No．17 2 结果 术前检测结果：48例检测结果范围5～33 mg／L，其中在5 ～ 9 mg／L范围36例，占75％；在 12～33 mg／L范围 12例，占 25％。术后检测结果：48例检测结果范围 3l～143 mg／L，其 中在 31～50 mg／L范围9例 ，占 18．75％；51～100 mg／L范围 32例，占66．67％ ；101—143 mg／L范围7例，占14．58％。 3 讨论 随着科学技术的快速发展，CRP检测的特异性和灵敏度 不断提高。近年来发现，CRP可用于外科严重感染、术后并 发症的早期检测及判断疾病的预后 J。本试验48例患者中， 术前检测75％患者在正常范围，虽有25％的升高，但均在低 水平范围，这与肿瘤的生长、侵润周围组织、机体的反应有关。 术后检测发现 1o0％升高，其中51—100 mg／L范围32例，占 · 97 · 66．67％，没有明确的临床感染指征，与手术创伤直接相关。 我们重点对 CRP在 101～143 mg／L范围的7例患者进行了临 床随访观察，临床资料显示均有合并细菌感染的证据。因此， CRP可作为感染性手术、大手术后观察的一项指标 j。食管 癌手术就是一种大手术，手术创伤较重，为了防止术后合并细 菌感染及鉴别手术创伤 ，检测 CRP具有重要的临床意义。 参 考 文 献 [1] 《全国临床检验操作规程》．第3版 ，2006：590． [2] 刘长安，龚林 ．外科严重感染时炎性反应物测试的临床意义国 外医学：临床生物化学与检验学分册，1991，1：21． [3] 储怡星，张景锋．C反应蛋白水平对判断炎症和创伤转归的价 值 ．上海医学检验杂志，2000，15(3)：155—156． 酶联免疫吸附试验检测人血浆中纤维蛋白原含量 姜国亮 【摘要】 目的 探讨酶联免疫吸附试验在检测人血浆中纤维蛋白原含量中的应用价值。方法 采 用竞争抑制 ELISA法测定人血浆中纤维蛋白原含量，并探索凝血酶、第二抗体最佳稀释倍数及适宜反应 时间。在最适宜条件下测定人血浆中纤维蛋白原含量。结果 第二抗体稀释 1000倍为适宜的稀释倍 数，10 IU／ml为最适宜凝血酶作用浓度，室温1．5 h为较理想的作用条件。FPA品稀释至60 ng／ml， 20 ng／ml，5 ng／ml，回收率分别为 107．2％、98％、110％。结论 用建立起来的竞争抑制性 ELISA法测定 人血浆蛋白原中，纤维蛋白肽 A的含量 ，回收率高，操作简单方便 ，值得推广应用。 【关键词】 酶联免疫吸附试验；血浆；纤维蛋白原；检测 纤维蛋白原(fibrinogen，FIB)为肝脏合成的一种重要的 血浆糖蛋白，是由健康人血浆分离，经提纯冻干制成。可提高 血中纤维蛋白原浓度，促进血液凝固进而止血，缺乏、消耗过 多或纤维蛋白酶亢进易导致凝血障碍。临床多用于妊娠中 毒、死胎、产后出血、胎盘早期剥离、大手术、严重大出血等所 引起的纤维蛋白原缺乏导致的凝血障碍。血浆中纤维蛋白原 检测方法按原理可分为热／盐沉淀法，可凝 固蛋 白法和免疫 法⋯。纤维蛋 白原释放纤维蛋 白肽 A(FPA)的能力可反映纤 维蛋白原分子结构、生物学功能完整性。本研究采用竞争抑 制 ELISA法测定 FPA浓度 ，为检测纤维蛋白原生物学活性唯 一 方法。 1 资料与方法 1．1 一般资料 (1)0．05 mol／L PH9．6碳酸盐缓冲液包被 液(2)O．01 mol／L P肿．4 PBS-Tween 20稀释液(3)洗涤液，同 稀释液(4)10％BSA封闭液(5)TMB工作液(6)FPA(SIGMA) (7)羊抗人 FPA抗体(8)辣根过氧化物酶标记的驴抗羊抗体 (9)Superblock溶液。 1．2 方法 1．2．1 原理 其原理是标本与凝血酶作用释放 出 FPA抗 原，加入过量的FPA抗体(一抗)，FPA与部分抗体结合。将 抗原抗体复合物加入包被有FPA的酶标板，混合液中未被结 合的第一抗体与酶标板上的FPA结合，再加入酶标记的第二 抗体，最后加酶底物显色。标本中抗原量含量愈多，结合在固 相上的酶标抗原愈少 ，最后的显色也愈浅。小分子抗原或半 抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点 ，因此不能用双抗 作者单位：344000 江西博雅生物制药股份有限公司 体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。小分子激素、药物 等 ELISA测定多用此法。 1．2．2 实验步骤 参考任跃明 等的方法进行，略有改动。 稀释至 10 g／lnl的FPA抗原包被 96孔板，4~C过夜 ，包被体 积100 L／孔。洗甩5次后，加 10％200 L／孔 BSA 37℃封 闭2 h。用 10％的Superblock溶液将样品稀释 10倍后，加入 等体积的凝血酶混匀，37~C放置 30 min。然后用 10％Super- block溶液将复溶的 FPA稀释为 2．5 ng／ml，10 ng／m1，40 ng／ m1，80-g／ml，160 ng／ml。然后取稀释标准液、悬液、及 10％ Superblock溶液各75 ，加人300 用生理盐水稀释750倍 的羊抗人 FPA，37~C水浴 1 h。加 100 L／孔于酶标板 ，37~C孵 育 1 h。洗甩5次后，加酶标二抗(辣根过氧化物酶标记的驴 抗羊抗体 1：5000)100 I／孔 37~C孵育 1 h。洗甩 5次后， 加底物 TMB显色 5 min(100 L／孔)。最后每孔加 50 LH： SO 终止反应。492 nm酶标仪下读 OD值。 1．3 结果判定 参考任跃 明 等的方法进行 ，略有改动。 将 FPA含量、对 INVA做双对数直线 回归 ，求得回归方程，计 算样品的FPA含量，r应大于等于0．9 9。 INV A=1一(A样品一 A空白)／(A样品稀释液-A空白) 2 结果 2．1 第二抗体稀释倍数选择 生理盐水将第二抗体稀释至 500倍、1000倍、1300倍，用竞争抑制性 ELISA法测定，根据 测得A值绘制曲线，结果显示稀释1000倍为适宜的第二抗体 稀释倍数。 2．2 凝血酶稀释度选择 4O mmol／LCaCl2稀释凝血酶至 2．5、5、10、20、40、80、100、150 IU／ml，ELISA测定，根据测得 A 值绘制曲线，结果表明10 IU／ml为最适宜凝血酶作用浓度。 · 98· 中国实用医药2011年6月第6卷第 17期 China Prac Med，Jun 2011，Vo1．6，No．17 2．3 反应温度 、时间选择 选择 FPA抗原-第一抗体混合液 分别选择作用45 min、1．5 h，选择室温，20℃、37~C三种不 同 温度，ELISA棋盘法测定，同上绘制曲线，结果表明室温 1．5 h 为较理想的作用条件。 2．4 人血浆中纤维蛋白原含量回收率 样品稀释液将 FPA标准品稀释至 60 ng／ml，20 ns／rrd，5 ng／ml，结果分别为 64．3、19．6、5．5 ng／ml，回收率分别为 107．2％、98％、110％。 3 讨论 人纤维蛋 白原为我 国新近研制的产 品，纤维蛋 白肽 A (FPA)的释放直接反映凝血酶活性 ，对于血清中 FP的监测具 有十分重要的意义。通常血浆中 FP含量很低，如何建立灵 敏度高、特异性好的检测方法显得尤为重要。临床主要采用 放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)及高效液 相层析法 J。 ELISA法设备要求低，无辐射污染，样品用量少，灵敏度 高、特异性好，在临床上应该广泛。本组试验在探索最佳实验 条件后 ，用建立起来的竞争抑制性 ELISA法测定人血浆蛋白 原中，纤维蛋白肽A的含量，回收率高，操作简单方便，值得 推广应用。 参 考 文 献 [1] 段樱 ，刘树业 ．纤维蛋白原及其检测进展 ．哈尔滨医药，2008， 28(1)：50-53． [2] 任跃明，侯继锋 ．竞争抑制 ELISA法检测 FPA．中国实验诊断 学，2009，13(11)：1605—1607． [3] 王德明，李晓红，余蓉 ．纤维蛋白肽的研究进展 ．中国输血杂 志，2005，18(4)：348-350． 43例重度子痫前期的临床诊治分析 张寒英 【摘要】 目的 对重度子痫前期的诊治及效果进行分析。方法 回顾性分析43例重度子痫前期 患者的病例资料。结果 早发型重度子痫前期组的死胎和围生儿死亡率为 45．5％，并发症发生率为 72．7％；晚发型重度子痫前期组的死胎和围生儿死亡率为 13．6％，并发症发生率为 18．2％。早发型重度 子痫前期组死胎和围生儿死亡率、并发症发生率均显著高于晚发型重度子痫前期组。结论 严格监测 患者及胎儿情况，对于病情稳定且无产科并发症的患者进行期待治疗，以提高治疗的效果 ，降低并发症 和死亡率。 【关键词】 重度子痫前期；早发型；晚发型；治疗 重度子痫前期是影响母婴健康的一个重要疾病。有学者 将孕 34周作为划分早发型重度子痫前期和晚发型重度子痫 前期的分界线⋯。本文对我院 2010年 1—12月住院的43例 重度子痫前期患者进行回顾性分析 ，现如下。 1 资料与方法 1．1 一般资料 将我院2010年住院的43例重度子痫前期 患者患者作为研究对象。年龄在 24—4l岁，平均(29．2± 4．5)岁。均符合《妇产科学》(第 7版)中重度子痫前期的诊 断标准 J。其中，初产妇 28例 ，经产妇 15例。所有患者均有 不同程度的视物模糊、头晕、胸闷和双下肢水肿的症状。 1．2 分组 根据患者发病的孕周分为两组，其中，孕 28～34 周发病的称为早发型重度子痫前期患者 11例；孕 >34周发 病的称为晚发型重度子痫前期患者 22例。 1．3 治疗 患者入院后进行全面的检查和化验，如血常规、 肝肾功能、尿液检查、凝血功能、心电图及眼底检查等。①一 般治疗：让患者取左侧卧位，充分睡眠和休息。给予高蛋白饮 食，吸氧，适当补充体液，以防止疲劳和纠正酸中毒。②解痉、 利尿治疗：采用硫酸镁和葡萄糖混合液静脉推注或滴注治疗。 ③降压治疗：若患者舒张压≥110 mm Hg或收缩压≥160 mm Hg，利用硝苯地平或拉贝洛尔进行降压处理。④若患者出现 脑水肿时应快速静脉滴注250 m120％的甘露醇，出现急性心 力衰竭、肺水肿或全身I生水肿，则静脉缓慢推注20～40 mg速 尿，并防止水电解质紊乱。⑤右旋糖苷40氯化钠及丹参改善 微循环。⑥促胎肺成熟：用 10 mg地塞米松肌内注射，1次／ 作者单位：476100 商丘市睢阳区妇幼保健院 d，共3次。⑦镇静治疗：对子痫或即将发生抽搐的先兆子痫 患者用镇静剂治疗。⑧适时终止妊娠。若患者病情恶化，或 出现肾功能衰竭、胎盘早剥、子痫等严重并发症，则应终止妊 娠。在终止妊娠前 ，应用地塞米松促胎儿肺成熟。 1．4 观察指标 观察并比较两组患者治疗效果以及并发症 情况有无差异。 1．5 统计学方法 采用 SPSS 13．0进行统计分析，用检验进 行比较 ，P<0．05为差异有统计学意义。 2 结果 2．1 治疗效果 11例早发型重度子痫前期组 2例死胎，3例围 生儿死亡，死胎、死亡率为 45．5％；22例晚发型重度子痫前期 组 2例死胎，1例围生儿死亡 ，死胎、死亡率为 13．6％。对两 组死亡率比较 =4．04，P=0．O44<0．05。 2．2 并发症情况 11例早发型重度子痫前期组，8例发生并 发症，并发症发生率为 72．7％。其中，胎盘早剥 4例(其中胎 死宫内2例)，肾功能损害 1例，心功不全 1例，子痫 1例， HELLP综合征1例。22例晚发型重度子痫前期组，7例发生 并发症，并发症发生率为18．2％。其中，胎盘早剥2例，肾功 能损害 1例，子痫 1例。对两组并发症发生率进行 比较 = 9．43，P=0．002<0．05。 3 讨论 有研究指出，近年来早发型重度子痫前期患者胎盘早剥 等并发症的发病率明显升高。当前医学界认为对于早发型重 度子痫前期患者可以采用期待疗法，推迟患者的分娩时间，以 延长胎儿出生时的胎龄，减少围生儿死亡，提高新生儿的存活 率。Hall等 研究指出，重度子痫前期患者若孕周延长 10—