微波辅助提取积雪草总黄酮的工艺研究

安徽农业科学，JournalofAnhuiA鲥．Sci．2011。39(3)：1354—1355 责任编辑刘月娟责任校对况玲玲 微波辅助提取积雪草总黄酮的工艺研究 程晓荣，赵晨晨，承伟+ (辽宁医学院药学院，辽宁锦州121000) 摘要[目的]在微波辅助条件下寻找提取积雪草总黄酮的优化条件。[方法]选取单因素试验和正交试验，以微波功率、微波辅助提取 时间、乙醇浓度、固液比为因素，每个因素3个水平，选择k(34)正交，用紫外分光光度法测定的总黄酮含量作为评价指标。[结果]最 佳提取条件为微波功率406W，微波时间90S。乙醇浓度70％，固液比l：20，此时总黄酮含量为5．342％。[结论]该试验提取工艺操作简 单、步骤简洁、方法稳定可行。 关键词积雪草；总黄酮；微波辅助提取；正交试验；紫外分光光度法 中图分类号$37 文献标识码A 文章编号0517—661l(20il)03-01354—02 Microwave．assistedExtractionofTotalnavonoidsfromCente／／aas／at／ca CHENGXiao．tongetal (LiaoningMedicalUniversity，Jinzhoa。Liaoning121000) Abstract『Obiective]TheresearehaimedtostudytheoptimumeonditionofextractionforthetotalflavonoidsinCentellaasiaticabythemi- crowave．『Method]Thesinglefactortestandtheorthogonaltestwereadopted．Thefactorsweremicrowavepower，microwavetime，ethanol concentrationandsolid／liquidratio．k(34)orthogonaltestw船selectedtodeterminethecontentofthetotalflavonoidsbyultravioletspectro- photometer．『Result]r111eoptimumconditionwasasf0Uows：microwavepower406W，microwavetime90s，ethanolconcentration70％，∞l- id／liquidratio1：20．111eflavonoidscontentreached5．342％．IConclusionOptimizedextractiontechnologyWaSsimple，feasibleandstable． KeywordsCentella0．8iatica；Totalflavonoids；Micmwave-assistedextraction；Orthogonaltest；Ultravioletspectrophotometry 积雪草为双子叶植物伞形科积雪草[Centellaasiatica (L．)Urb．]的干燥全草，又称落得打、马蹄草、半边钱等，始载 于《神农本草经》，其味苦，性寒、辛，主治大热、恶疮、痈疽、身 热．被列为中品⋯。2005年版《中国药典》将积雪草收载为 常用中药材，具有清热利湿、解毒消肿的功效，临床上多用于 治疗感冒、传染性肝炎、疔疮肿毒、跌打损伤等疾病B1。积雪 草的化学成分主要为三萜皂苷、挥发油、三萜酸、多炔烯类 等口1。近年来，对积雪草化学成分、药理作用、保健作用及积 雪草苷的提取、分离屡见报道H。1，但积雪草中总黄酮的相 关报道很少。为此，笔者采用微波辅助技术，以积雪草为研 究对象，通过单因素试验和正交试验，确定影响效果的主要 因素和最优工艺条件，为有效提取积雪草中总黄酮开辟新 途径。 1材料与方法 1．1材料供试积雪草由安徽毫州药材公司提供，由辽宁 医学院生药学承伟教授鉴定，粉碎，过筛。 1．2 方法 1．2．1 对照品溶液的制备。精密称取常压干燥至恒重的芦 丁对照品(中国药品生物制品检定所)10．2mg，置于50llIl容 量瓶中，加浓度60％乙醇约351111密塞，超声使其溶解，放 冷，加浓度60％乙醇至刻度线摇匀，得芦丁对照品溶液 (0．204ms／m1)。 1．2．2 曲线的绘制。精密量取芦丁对照品溶液0、1、2、 3、4、5、6IIll，分别置于25rnl容量瓶中，加浓度5％亚硝酸钠溶 液1IId，摇匀放置6min，加浓度10％硝酸铝试液l“，摇匀放 置6min，再加浓度5％氢氧化钠溶液10rIll，摇匀放置15min， 加蒸馏水至刻度线，摇匀后以第l管作空白对照，在波长504 nm处测定吸光度。以吸光度值(A)为纵坐标，芦丁对照品含 量(C)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为A=11．138C+ 作者简介程晓荣(1985一)，女，吉林榆树人，硕士研究生。研究方向： 药物分析、生药学。·通讯作者，教授，博士，硕士生导师， 从事中药新的药用部位及有效部位的研究。E-mail： chen萨553807@126．tom。 收稿日期2010．114)1 0．01387，线性范围为O．01一O．06rn∥IIll，r=O．9992。 1．2．3 总黄酮含量的测定。吸取l砒供试品溶液，然后按 “1．2．2”测定吸光度值，带入芦丁标准曲线方程得出质量浓 度，然后计算各提取液中总黄酮含量(以芦丁计)。 ，、l，I， 总黄酮含量2订U菇7而l v 2订×100％ 式中，C为测定液黄酮质量浓度(mw'na)；形为药品量(g)；K 为提取定容体积(m1)；K为显色反应定容体积(m1)；K为显 色反应取样液体积(IIll)旧1。 2结果与分析 2．1稳定性试验取供试品溶液1TIll，按“1．2．2”操作，并 每隔5min测定吸光度。结果表明，30min以内测定吸光度 RSD1．242％<2．000％，建议定容后立即测定。 2．2重复性试验取6份供试品溶液1IIll，按“1．2．2”测定 总黄酮含量，R．SD为0．276％，表明重复性良好。 2．3回收率试验取供试品溶液6份，分别加入芦丁对照 品溶液适量，按“1．2．2”测定总黄酮含量，平均回收率为 99．17％，RSD为1．622％，结果表明加样回收良好。· 2．4单因素分析 2．4．1固液比。按固液比l：20、l：15、1：10加入适量积雪草 和浓度70％乙醇，在微波功率406W，室温下微波辅助提取 60s，测定吸光度，计算总黄酮含量。结果表明，总黄酮含量 分别为3．432％、3．001％、2．759％。由此可知，固液比为l：20 时提取效率最高。因此，单因素分析及正交试验均采用固液 比为1：200 2．4．2 乙醇浓度。称取经预处理的积雪草5g，固定试验条 件：固液比1：20，提取时间60s，微波功率406W，乙醇浓 度分别为20％、40％、60％和80％。结果表明，总黄酮含量依 次为2．948％、3．298％、3．890％、3．765％。由此可知，浓度 60％乙醇中黄酮含量较高，因此选择浓度60％乙醇进行正交 试验。 2．4．3 微波功率。称取经预处理的积雪草5g，固定试验条 件：乙醇浓度60％，固液比l：20，提取时间608，设计微波功 万方数据 39卷3期 程晓荣等微波辅助提取积雪草总黄酮的工艺研究 1355 率分别为126、252、406、567W。结果表明，总黄酮含量依次 为3．845％、4．375％、4．968％、4．564％，因此选择微波功率 406W为宜。 2．4．4提取时间。称取经预处理的干燥积雪草5g，固定试 验条件：微波功率406w。乙醇浓度60％，固液比l：20，设计 提取时间分别为60、90、120、150s。结果表明，总黄酮含量依 次为3．477％、4．330％、4．079％、3．738％。由此可知，微波辅 助提取90s黄酮含量较高，因此选择提取时间908进行正交 试验。 2．5 正交试验选取微波功率(A)、提取时间(B)、乙醇浓 度(c)、固液比(D)为主要考察因素，各因素及水平设计如表 l所示。正交试验采用4种考察因素3个水平正交表，即 k(34)正交表，见表2。 衷1正交试验的因素水平 TaMe1 FaetorsandIevels 序号 No． 因素 A B C D 总黄酮含量 Thecontentof totalflavonoids|}％ 采用极差法对正交试验结果进行分析。由表2可知，积 雪草中总黄酮的最佳提取条件为A，B：C：D，，即微波功率406 W，微波提取时间90fl,，乙醇浓度70％，固液比l：20。从表中 R值可以看出，4种因素对积雪草中总黄酮提取效果的影响 程度依次为微波功率>固液比>提取时间>乙醇浓度。所 以，该提取工艺中最大的影响因素是微波功率，其次为固液 比、提取时间，最小的是乙醇浓度。 2．6方差分析对表2进行方差分析和，检验。结果表 明，微波功率对总黄酮提取率具有O．05水平显著影响。 2．7最佳工艺验证在最佳提取条件下进行3次重复试 验，所提取的总黄酮含量平均值为5．342％，大于正交设计中 的含量。所以，可以确定试验选取的工艺是最佳工艺。 3结论与讨论 将芦丁对照品、供试品溶液分别按标准品溶液的制备和 标准曲线绘制项下的方法制得后，于波长300—700nm扫 描，均可见在504nm处有最大吸收，因此选择504nm作为芦 丁和供试液测定的最大吸收波长。研究表明，微波功率对提 取效果有0．Ol水平显著的影响。这主要是由于当乙醇浓 度、微波辐射时间、同液比一定时，随着微波功率不断增加， 分子运动越剧烈，细胞内水蒸气汽化产生的压力使细胞膜 (壁)破坏程度加大，细胞内总黄酮的提取率也随之提高。但 是，当微波功率过高时。积雪草总黄酮被分解，导致提取得率 降低。因此，选择微波功率为406W为宜。该研究选取乙醇 作为提取溶剂，节约成本，无污染，具有时间短、操作简便、稳 定高效的优点。 参考文献 [1]赵字新，李曼玲，冯伟红，等．积雪草的研究进展[J]．中国中医药信息 杂志。2002，9(8)：81-84． [2]国家药典委员会．中国药典(20(15年版一部)[s]．北京：化学工业出版 社。2005：200． [3]陈军，华维一丽宏航积雩草酸及期行生物的生物活性研究概况[J]． 中草药，2006，37(3)：458—460． [4]于泉林。高文远，陈向霞，等．HPLC—EI．SD测定积雪草提取物中积雪草 苷的含量[J]．中圈中药杂志，2007，32(6)：503—505． [5]CHENGCL．EffectofC．entel／oas／at／caOilethand·inducedgastricnmco目d lesionsinrats[J]．LifeScience，2006，7(21)：2647—2653． [6]袁春玲。郭伟英．超声循环法提取连钱草总黄酮[j]．中国中药杂志， 2007，32(5)：386． [7】GUOX．CHENGFx，LIAOz，eta1．Preliminaryresearchoftheregular patternbetweenflavonoidsconten!andtheageoferecttypeOphiopogon皿 on&us[J]．AgiculturalScience＆Technology，2008，9(5)：142—144． [8]尚海涛．液质联用分析黄毛耳草中的黄酮类化台物[J】．畜牧与饲料科 学，2009，30(6)：26一刀． [9]LIYw。WA,NCxM，LIANRL，eta1．DeterminationOnheavymetalscoin- 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