雌二醇2-18

K 广州金域医学检验中心 KM-SOP0300·313 Guangzhou Kingmed Center for Clinical Laboratory Edition 3.0 《文件已阅声明表》 《Procedure circulation form》 文件名称:雌二醇检测作业指导书 表号: KM-MP03•02•02 已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。 （I have understood the relevant content of the document.I will keep the document secret and be responsible to properly perform procedure） 阅读人签名表 姓名（NAME） 职务（POSITION） 签名（SIGNATURE） 签名日期（DATE） 《文件修改记录页》 《Procedure amendment form》 表号:KM-MP03•02•03 序号 NO. 页码(Page) 内容更改说明（Description of Modified contents） 审批人 （Approved by ） 批准生效日期 （Approved date） 1 换版 《文件信息表》 《Procedure information form》 表号: KM-MP03•02•04 文件名 Title of doc.(Doc.Code) 雌二醇检测作业指导书（KM-SOP0300.313） 版本号(Edition No.) Edition 3.0 生效日期(Operative date) 2008-3-13 文控部门 (Doc. Control Dept.) 实验室文控室 回顾日期/签名 (Review date /signature ) 回顾日期(Review date) 回顾人员签名( Signature ) 替代文件(Replaces) 雌二醇检测作业指导书（KM-SOP0300.313）Edition 2.0 存放地点(Location)/持有人（Holder） No. Location（Holder） No. Location （Holder） 1 诊断部文控室（陈彬） 2 发光室（段学成） 作者签名/日期(Author signature/date) 陈鲜美 审批人签名/日期(Authorized by : Signature/Date) 陈建波 接收人签名/日期 （Receiptor/Date） 副本数(copy No.) 本文件是第 个文件拷贝 / 共发放 2 个文件拷贝。 雌二醇检测作业指导书 (Analysis of Estradiol(E2）by IMMULITE 2000) 1. 原理（Test principle）: 固相、 竞争法化学发光酶免测定(A solid-phase,competitive chemiluminescent enzyme immunoassay)：包括免疫反应和化学反应,试剂盒中固相（包被珠）包被有兔抗E2多克隆抗体，试剂为碱性磷酸酶标记的E2，酶标记的E2与病人样本中的E2竞争结合包被珠上有限的抗体，然后多余的样本和试剂经离心去除。最后加入化学发光底物，并产生光信号。利用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。 2. 样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）: 标本收集（Specimen collection）:血清(serum);单次用量(volume)200μl，仪器加样量(sampling volume)25μl。 拒收标本（Specimen rejection）：严重脂血样本应拒收。推荐使用超速离心清除脂血（lipoprotein）样本。溶血（hemolysis）样本提示样本在送达实验室之前处理不当，因此检测结果将受到影响，应予以注意。血清（serum）样本在未充分凝集前离心将导致纤维蛋白的存在。为避免纤维蛋白对结果的影响必须确保离心处理前样本已经完全充分凝集。对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。源于不同生产商的血样收集试管，由于原材料和添加剂不同，包括凝胶或物理涂层、促凝剂和/或抗凝剂，可能导致得到不同的结果。本试剂盒没有对所有可能应用的收集管类型进行测试。 标本储存条件(Secimen storage conditions)：2-8℃2天； -20℃2个月；十天后处理标本。 3、试剂(Reagent)： 3.1美国DPC IMMULITE 2000 原装试剂。L2KE22 200T 3.1.1试剂内组份(components)： Ⅰ Estradiol包被珠（L2E212） 包被珠包装带有条码。一个包装200个。包被有多克隆兔抗雌二醇。2～8℃可稳定至失效期。 L2KE22：1个 L2KE26：3个 Ⅱ Estradiol试剂楔（L2E2A2） 试剂楔带有条码。11.5mL碱性磷酸酶标记的雌二醇缓冲液。 2～8℃可稳定保存至失效期。 L2KE22：1个 L2KE26：3个 使用前将试剂楔顶部穿孔部位的胶条撕开，注意不要损坏条码。揭掉试剂楔顶部的铝箔封条，将试剂楔滑盖的顶部搭扣在下方的斜坡上。 Ⅲ Estradiol校正（LE2L，LE2H） 两瓶（低、高）每瓶2.0Ml,含Estradiol的经处理的人血清。开封后2～8℃可稳定保存30天，-20℃可以保存（分装）6个月。 L2KE22：1套 L2KE26：2套 校正前将相应的分装标签（随试剂盒提供）贴于实验管上，以便仪上的读码器能够读取条码。 3.1.2未随试剂盒提供的组分 L2E2Z：E2样品稀释液 用于在机稀释高值样本。1瓶25ml浓缩的(即用型)不含FSH的非人类血清基质（含防腐剂）。其E2含量低于检出限。保存：开封后2～8℃可稳定保存30天，或-20℃可以保存（分装）6个月。其处理应遵守相应的法律规定。 L2E2Z：3个标签 L2SUBM：化学发光底物 L2PWSM：探针清洗液 L2KPM：探针清洗试剂盒 L2RXT：反应管（一次性） L2ZT：250个样品稀释测试管（16X100mm） L2ZC：250个样品稀释管盖 CON6：三水平、多成分的质控 其它必需：蒸馏水或去离子水、实验试管 3.2 试剂准备(Reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time; New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintained consistent results for patient specimens. Record the results. 4 仪器（Instrument）：美国DPC IMMULITE 2000. 仪器准备（Prepare apparatus）：使用前将仪器的液体与固体垃圾清空；加入足够的蒸馏水，清冼液，底物及样本杯。然后运行仪器操作软件。而后排水及底物，防止内有残留气柱。将仪器的试剂盘中加入所需的试剂。 5.（Safety Precautions）： 操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。 6校准（Calibration）： 6.1校准品储存和使用(Calibration material storage and usage)：美国DPC IMMULITE 2000 原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。Stop using overdue calibration material.use it within expiration date,storage in 2-8℃ 6.2校准周期(Recommended Adjustment Interval)：2周(2 weeks)。 6.3当下列任何一种情况出现时，请重新校准：(If one of the two happens, recalibration ) ⑴试剂批号改变 (Reagent lot changes) ⑵根据质控需要进行校准(Recalibration based on quality control problem) 6.4步骤：将两个样本管中分别加入至少500ul的A，B校准品 ，并一一对应分别贴上校准条码，放入样本架上。将样品架推入样品槽中，点击RUN。然后在计算机屏幕上选择Kits项，用扫码器扫描药盒上的条码，选择Worklist项，输入校正信息，输入是需在ADJUSTOR中的Kit lot一栏中输入校正信息，并申请Estradiol检测项目，开始校准。校准同时加上质控品。对校准结果进行判定。 6.5校准结果判断: 仪器自动识别校准是否通过，但是每次做校准后，必须跟做所有浓度的质控，如质控在控则校准通过。 7操作过程：(Procedural Steps) 7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。 7.2取出空样本架，将含有血清的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul。（样本用量25ul）交待清楚实验号与样本架号的对应关系，便于联机。 7.3点击RUN。在[WORKLIST]中输入实验号，在[Assign Tube Position]中指定样品位置，在Tests中指定E2项目。结果出来后，在菜单[tool]中的Export按日期打出结果，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。 7.4数据联机入系统( Send data to LIS ) 数据审核(Data checkup)：联机是否正确？审查结果是否正确?实验号与样本架号的对应，原始导出结果与系统结果是否对应等。 8质量控制(Quality control)： 使用CON6质控品做质控，每工作日至少做两个浓度的值，二个浓度其靶值和SD参阅质控图。最大允许误差ALE为25%，室内质控CV为L:9.00%;H:7.50%，偏移为3.60%,过程稳定性<2%.根据公式:△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 13s/22s/R4s/41s N=2; 高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41s N=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理。 9.稀释(Dilution)： 当结果超过2000时，需要稀释，如果需要手工稀释，按以下标准 稀释材料（Dilution material）:E2 diluent 最大稀释倍数（Dilution times）:1:7(25ul sample: 175ul diluent) 10.计算(Calculations)：N/A 11. 参考范围(Expected values)：95%范围，单位（pg/ml） 成年男性：0-206 健康成年女性： 滤泡期：0——160 滤泡期 2-3天： 0——84 排卵期，左右3天 ：34——400 黄体期：27——246 12. 结果解释（Interpretation of Results）： 1）妊娠样本中含E3高，对E2测定有干扰。 2）新生儿样本可能因存在E2或其他类固醇激素可能对结果产生影响而产生假阳性结果。 3）人血清中的嗜异性抗体与试剂盒组分中的免疫蛋白发生反应，从而干扰体外免疫检测。所以检测结果要与临床检查，病史和其他的检查结合使用 13.方法的局限性（Method Limitations）： 13.1精密度（Precision）： 13.1.1批间精密度： · 低值：65 高值：170 · 算术均数(Mean)= 68 算术均数(Mean)= 174 · 标准差(SD)=7 标准差(SD)=8 · 变异系数(CV)= 11% 变异系数(CV)= 9% 13.1.2批内精密度：选择在医学决定水平点附近的病人样本，在相当短的时间测定10个数据，测定时带质控，且质控在控。经统计得： · 算术均数(Mean, M)= 1420.6000 。 · 标准差(Standare deviation, S)= 57.8988 。 · 变异系数(Coefficient of variation, CV)= 4.08% 。 13.2灵敏度（Sensitivity）：15pg/ml 13.3特异性（Specificity）：N/A 13.4分析测试范围（AMR）：20-2000pg/ml 13.5病人结果报告范围（CRR）：20-16000pg/ml 13.6干扰物质（Interfering Substances）： · 如人血清中嗜异性抗体。 · 脂血影响（Lipoprotein）：样本中甘油三酯的浓度直至5000 mg/dL，在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。 13.7注意事项（Notices）。：仅供体外诊断使用。 · 试剂：2～8℃保存。其处理应遵守相应的法律规定。 · 对于所有组份都要将其视为传染原，按照全球传染病预防法来处理和防范。源自人血的原材料全部经过检验，与梅毒、HIV 1&2抗体、HBsAg和HCV抗体没有反应。 · 加入浓度小于0.1g/dL的叠氮钠作为防腐剂。其处理应采用在铅或铜质容 器中以大量水冲洗，避免易爆的金属叠氮化合物聚集而产生潜在爆炸危险。 · 化学发光底物：避免污染和日光直射。（参见说明） 水：使用蒸馏水或去离子水 14. 临床意义（Clinical Significance）： 人体内雌二醇是雌激素中生物活性最强的雌激素，在男性雌二醇由睾丸产生，女性则由卵巢分泌，对维持女性生殖功能及第二性征有重要作用，测定雌二醇对青春前女性内分泌疾病的诊断，对闭经、月经紊乱、卵巢功能评估有重要意义，是研究生殖生理与诊断不孕的重要的手段。幼女及少女体内雌激素处于较低水平，随年龄增长自青春期至成年女性雌二醇水平不断增长。在正常月经周期中，雌二醇随卵巢内分泌的周期性变化而波动。卵泡期早期雌激素水平最低，以后逐渐上升，至排卵前达高峰，以后又逐渐下降，排卵后达低点，以后又开始上升，排卵后8日出现第二个高峰，但低于第一个峰，以后迅速下降至最低水平。绝经妇女卵巢功能衰退，雌二醇水平低于卵泡期早期，雌激素主要来自雄烯二酮的外周转化。 14.1监测卵巢的功能 14.1.1判断闭经原因：1.激素水平正常的周期变化,表明卵泡发育正常,应考虑为子宫性闭经;2.雌激素水平偏低，闭经原因可能因原发或继发性卵巢功能低下或符合受药物影响而抑制卵巢功能；也可见于下丘脑—垂体功能失调；高催乳激素血症等。 14.1.2诊断无排卵：雌激素无周期性变化，常见于无排卵性功能失调性子宫出血、多囊卵巢综合征、某些绝经后子宫出血。 14.1.3监测卵泡发育：应用药物诱导排卵时，测定血中雌二醇作为监测卵泡发育、成熟的指标之一，用以指导HCG用药及确定取卵时间。 14.1.4女性性早熟：临床多以8岁以前出现第二性征发育诊断性早熟，血E2水平升高>275pmol/L为诊断性早熟的激素指标之一。 14.2监测胎儿—胎盘单位功能。 ● 增高：青春期前若出现E2含量升高，有助于女性性早熟的诊断。双胎、多胎妊 娠，卵巢肿瘤，男性女性化，男性系统性红斑狼疮，糖尿病孕妇，肝硬化，卵巢癌，肾上腺皮质肿瘤。 ● 减低：原发性或继发性卵巢功能不全，卵巢切除后，缺乳，发育低下，垂体-卵巢 性不孕，闭经。其他如下丘脑病变，垂体前叶功能减退，甲低，柯兴氏综合症，阿狄森氏病等。 15.参考文献（References）： 1） Boscato LM，Stuart MC.Heterophilic antibodies：a problem for all immunoassays.Clin Chen 1988：34：27-33 2） IMMULITE 2000试剂说明书 3） 中华医学检验全书 4） IMMULITE 2000 雌二醇（Estuarial）操作说明书 STANDARD OPERATION PROCEDURE page 10/10 雌二醇检测作业指导书（2008-03-13）