软骨瘤中骨形成蛋白_BMP_的免疫组化分析

现代口腔医学杂志 �� 。年第 ! 卷第 ∀ 期 软骨密中骨形成蛋白#∃%&∋的免疫组化分析 第四军医大学 口腔 医学院 金 岩 杨连甲 组典 本文首次以抗骨形成蛋白单克隆抗体为第一抗体 , 用免疫组化方法 #( ∃ )法 ∋对 例领面 部软骨瘤进行染色观察 ∗ 结果显示 + 例软骨瘤内的瘤细胞均为阳性染色 , 幼稚的肿瘤性软骨细 胞及 软骨基质也为阳性染色 ∗ 此外还发现 , 部分生长快 、 生长活跃以及复发的病变中瘤细胞较多 , 且阳性率 高 , 而在成软骨活动低下的标本中阳性反应的瘤细胞相对较少 , 且染色也较浅 ∗ 本实验显示 +软骨瘤的 发生、 发展与∃ % &的存在有一定的内在关系 , 进一步深入此方面的研究将会为软骨瘤的临床诊治及预 后判断提供指标 。 骨形成蛋 白 #∃ , − . % , / 0 1 , 2 . − . 345 & / , 6 切 4− , 简称 ∃% &∋ 是一种高效的骨诱导物质 , 主要存在于动物及人的骨基质 、牙本质基质中 ∗ 在研究 ∃% & 的存在 与机体部分骨疾患的内在 关系时发现 , 骨 肉瘤 、 软骨 肉瘤及骨纤维异常 增殖症等病变组织中含有丰富的∃% & , 且 ∃ %& 的含里多少及有无 与其治疗及预后有着直接的 关系 ‘” 幻 。 软骨瘤也是领面部常见的一 种 良 性肿瘤 , 呈浸润生长 , 易复发 。 为了深入了解 软骨瘤的发生 、 发展及生物学特性 , 本文首次 运用抗骨形成蛋 白单克隆抗 体 #简称 ∃% &一 %, ( 7∋ 作为第一抗体 , 用免疫组化方法 # ( ∃ ) 法∋检测了领面部软骨瘤内∃%&的分布情况 , 并 初步 探 讨了∃% &与这种骨疾患的内 在 关系 。 材 料 与 方 法 选择本院病理科诊断为领面部软骨瘤的标 本 例 , 其中病变位于下领骨体部及裸状突的 8 例 , 位于上领骨的 9 例 。 例中有 ∀ 例为术 后复发 。 患者年龄范围为∀9 、 !∀ 岁 , 平均 8 : ∗ ∀ 岁 ∗ 男性 ; 例 , 女性 ! 例 。 所有标本均为 �� 肠 福尔马林液固定 , 石蜡包埋 。 主要试剂 + 抗骨形成蛋 白单克隆抗体 #∃% & 一% . ( 7 ∋ <妇本室研制 ‘“’ , 为小 鼠=2 > ? ≅ , 工作浓度为 � + ∀� � 。 ( ∃ )试剂盒为美国 Α . 5一 3, /公司产品 。 染色方 法 + ( ∃ ) 染 色 方 法 同 前 文 报 导 #‘’“ ∋ , 主要步骤如下 。 所有标本制作 9 卜Β 切片 , 一切片脱蜡后经 &∃ Χ一Δ Ε Φ Ε 封闭内源酶 并滴加正常血清以消除非特异性染 色 ∗ 然后于 组织面上分别滴加一抗 #∃% &一% , ( 7 , 8 : ’) 孵育 ∀ Γ 8 小时 ∋ 、生物素化的抗 鼠=2 > #8 : ’ ) , 8 �分钟 ∋ 及( ∃ )复合物 # 8 : ’) , 8 � 分 钟 ∋ , 最后用Η ( ∃一Δ Ε Φ + 显色 ; 分钟 , 终止 显色后 以苏木精作对 比染色 。 每次染色都作对照 , 用 &∃ Χ等代替∃% &一% . ( 7 。 结 果 以∃%&一% 。( 7作为第一抗体 , 在所有 例软骨瘤标本中都出现阳性反应 。 对于这些标 本的组织学观察显示 , 肿瘤具有分叶状特点 , 肿瘤组织为透明软骨 , 瘤细胞分布不规则无一 定次序 。 软骨细胞小束中多只有一 个 软 骨细 胞 , 偶而有两个细胞 , 无异形性 。 在肿瘤的外 周 多见有一纤维包膜 , 其纤维组织与肿瘤小叶 的 间质相连 。 ( ∃ ) 法染色显示 , 肿瘤性软骨组织 周围 有较多的阳性着色的瘤细胞 , 这些细胞胞体较 小 , 呈卵圆形 、 圆形 及不规则形状 , 胞膜 及胞 浆均为强阳性着色 # 图 � ∋ 。 在新生的肿瘤 性 软骨组织周围 , 有许多梭形 细胞也 呈 阳 性染 色 , 并可见这些细胞向软骨细胞移行 #图 ∀ ∋ ∗ 在移行的不同阶段的肿瘤性软骨细胞中 , 较幼 稚的软骨细胞胞膜及胞浆均为阳性染色 , 较成 熟及成熟的肥大的软骨细胞染色浅 或 不 着 色 #图 ∀ ∋ 。 部分瘤细胞成片的被基质包绕 , 此 基质及瘤细胞亦为阳性反应 。 肿瘤性软骨组织 中 , 成熟钙化部位的软骨基质不着色 , 而周 围 未钙化的基质均为阳性着 色 。 部分生长速度较侠 , 生长活跃以 及复发的 ∗ Ι ! ∗ 病变中 , 瘤细胞较多 , 且成团聚集 , 这些细胞 均为强阳性反应 , 镜下可见这些瘤胞胞体较大 且更不规则 #图 8 ∋ 。 部分生 一长时间长 、 速度 较慢的标本中阳性着色的瘤细胞相对 数 量 较 少 , 病变中陈旧的软骨组织较多且其中细胞成 份较少 + 染色较浅或不着色 #图 ! ∋ ∗ 在对照染色中 , 用&∃ Χ代替∃% &一% , ( 7 结果均为阴性 ∗ 讨 论 以 ∃% &一 ( , ( 7作为第一抗休 , 用免疫组 织化学方法 ‘( ∃ )法 ∋ 染色显示 , 2 例软 骨 瘤内的方留细胞均为阳性染色 。 在观察中我们发 现 , 在处于成软骨活跃期的病变中阳性着色的 瘤细胞较多 , 且多为强阳性反应 。 而在成软骨 活动低下的标本中阳性反应的瘤细 胞 相 对较 少 ∗ 且染色也较浅 。 我们知道 , ∃% &具 有 高 效的骨诱导活性 , 可 以在软组织及骨缺损区诱 导未分化间充质细胞分化为骨及软骨细胞 #‘’ ∗ 石一些 汾疾患中 , 如骨肉瘸 、 软骨 肉瘤及骨纤 维异常增殖症等 , 病变中形成的肿瘤性骨及软 骨组织 与病变中所含的 ∃% &有 着 直 接 的 关 系 #‘’ ∀ 〕 ∗ 由此可以得知 , 软骨瘤中形 成 的软 骨组织也可能与∃%&的存在有关 ∗ 染 色 结 果 显示 , 新生的肿瘤性软骨组织周围有较多的 阳 性着色的梭形细胞 , 这些细胞类似于未分化 间 充质细胞 。 我们认为 , 曲于瘤细胞具有合成及 分泌∃% &的能力 , 分泌出 ∃% &扩散并作 用 于 邻近的未分化间充质细胞 , 使其分化为软骨细 胞 #‘, 。 软 骨 细胞形成后 , 其合成 ∃% & 的能 力逐渐下降 , 细胞内所含的∃ % &也 逐渐 扩散 至软骨基质内 , 因而此 ϑ讨的软骨基质 内也含有 一定量的 ∃% & , 而成熟及较成熟的软骨细胞内 ∃% &的 含量 较少或没有 ∗ 此外还观察到 , 部 分瘤细胞也可以直接参与软骨组织的形成 ∗ 软骨瘤中的肿瘤 性软骨组织的形成是一个 比较复杂的过程 , 在软骨组织形成过程中除了 ∃%尸 的 作用外 , 尚有其它的因子及因素ϑ沟影 响 , 其形成机理 目前尚不十分清楚 。 因而 , 上述 的一些观点 ∀之推测 琏根据实验 结果而 价出的 , 清楚的认识这些问题还需今后进一步的研究 ∗ Κ , Λ 14 Μ ≅ Ν ≅ #‘》在观察骨肉瘤的生 物学特 性与∃%&的关系时发现 , 有无∃%& 骨诱导活 性对骨肉瘤的诊治及预后都不相同 。他发现 , 产 生∃% & 骨诱导活性的骨肉瘤对于术前 的化疗 效果不佳且近Ι8 肠的有肺转移 , 而无∃%&活性 的骨肉瘤肺转移率为!! 肠 。 软骨瘤虽然是一种 良性肿瘤 , 但呈浸润性增长 , 易复发。 复发后的 肿瘤生长速度较前增快 , 并有转变为软骨肉瘤 的可能 #9∋ 。 本实验证实 , 生长较快及复发后的 软骨瘤其瘤细胞的阳性率较高 , 即瘤细胞中含 有的 ∃%&的量相对较高 , 且此情况下的瘤细胞 的大小及形状接近于软骨 肉瘤 #” 。 而生长较 慢的软骨瘤中阳性反应的瘤细胞相对较少 , 且 肿瘤性软骨组织的生长也不活跃 。由此可见 , 随 着今后进一步的观察并与肿瘤的临床表现相结 合 , 以∃% &一% , ( 7为一抗进行免疫组化检测 , 可为软骨瘤的临床诊断及预后判断提供指标 ∗ 总之 , 现已证实 , 多种骨疾患中 #如骨肉 瘤 、 软骨 肉瘤 、 骨化纤维瘤及骨纤维异常增殖 症等 ∋ 都多少不一的含有 ∃%& , 且病变中∃%& 的有无及含量的多少与骨疾患的生物学特性有 内在的关系 , 进行这方面的研究对于指导临床 上的诊断及预后的判断有较大的意义 #‘ , ∀ , , 》 ∗ 此外 , 我们推测 , 将∃%&一% 5 ( 7 运用于临床 治疗中的前景也是比较乐观的 , 因为我们 已经 知道 , ∃%&含量较多的骨肿瘤其恶 性 度也较 高 , 且肿瘤内的骨组织的生长也多与∃%&的存 在有关 ∗ 因而 , 将∃%&一% , ( 7于术前或术后 用于局部病变区域 , 对于减缓病情或防止复发 将会有一定的意义 ∗ 由此可见 , ∃% &一% 5 ( 7的 研制成功使我们有可能对于 ∃ % & 以及与∃%& 有关的各种骨疾患进行多方面的深入研究 , 将 会大大推进有关 ∃%& 的研究 。 #图见封四 ∋ 今 考 文 献 ϑ 、 金岩 , 等。 骨和软骨肉疲中骨形成蛋白 #∃% &∋的免 疫组化定位 ∗ 第 四军医大学学报 � Ι , � � #; ∋ , ∀ ; ∗ ∀ 、 樊代明 , 等 。 骨形成蛋 白生物活性位点单克晚拢体 的制备及意义 ∗ 第四军医大学学报 � Ι如 ϑ。 ’ ∀ � ;∗ 8 、 金岩 。 骨形成蛋 白 ∗ 国外 医学 口腔医学分册 � Ι卜 � � # 8 ∋ , ∀ � ; 6 ! 、 Κ∗ , 、�一4Μ ≅ Ν ≅ � � , . Ο ≅ ϑ ∗ &/ , 2 /ϑ, Λ3 4. ; � �一4Π4. , ϑ一。. − Π 7 , − . Β , / &1 , 2 . − . 34. ≅ . 3 4Θ 43 Ρ 4− , Λ3. , Λ ≅ / 5 , Β 江 3 4ΛΛΣ . 。 ) ≅ − 5 . / 一。Ι。, : 一 3 ; � 。。 软骨启中骨形成蛋白 #∃ % & ∋ 的免疫组化分析 #正文见 Ι 8页 ∋ 图 � 图 ∀ 图 !娜产以 民6 8图 本期责任编辑 + 肺志峰 邢汝东 主 办 现代 口脸医学杂屯 Τ =( Υ Η ( =ς Ω Ω Ξ =( Υ 好 Κ =Τ Ω Ψ 乙( Ε Δ = =, Σ / − ≅ ϑ , Π % , Ζ . / − Χ 3, 位≅ 3, ϑ, 2 Ρ #季刊 ∋ � �年第!卷第∀期 出版 日期 + 季中月 [ � ∴ 中华医学会河 一化、北京 、天津 、内蒙占 、 [ϑ]ϑ 断五分会暨北京 医科大学 ⊥� 腔医学院 、 化京 市�� 腔医 院 、河北医学院 Π一�腔 系 、 呼和浩特 、 川‘郸市 ϑ」腔医院 编 辑 发 行 总发行处 + 石家_上[1邮局现代日 腔医学杂志编委会 订购处 + 全国各地邮局 出 版 印 用 现代口 腔医学杂志社 河北医学院印刷厂 石家庄槐 北中路 �9 号 何北省期刊 登记 �� ∀ 号 广告许可证 + 典工商 # 石 ∋ “号 每册定 价 / ∗ 。。元