HPIC法测定血清文拉法辛浓度

2005年9月 第17卷第9期 中国民康医学杂志 MedicalJournalofChinesePeoplegHealth Sep，2005 V01．17No．9 【论 著】 HPIC法测定血清文拉法辛浓度 钟薇1，张石宁2 (1广东省广州市番禺区岐山医院，广东广州511483；2南京脑科医院研究所) 【摘要】 目的：建立用高效液相法(HPLC)测定血清中文拉法辛浓度的方法。方法：HPLC测定，流动相为甲醇：乙腈：水：1mol／L醋酸 铵：5mol／L氨水(350：50：100：5：1)的混合液体，pH8．7，流速1ml／min，ODScol柱，紫外检测波长229nm，以外标法定量。结果：线性范围25～ 700ng·ml～，最低检测限2ng·ml～，平均提取回收率96．59％，日内和日间精密度平均分别为3．44％和3．77％。结论：用HPLC可以较好 的对血清中文拉法辛进行定性和定量。 【关键词】 高效液相；文拉法辛 [中图分类号】 R446．112 [文献标识码]A [文章编号]0369(2005)09—0499—02 ToestablishaHPLCassaymethodforthedeterminationof VeIllafaxinelevelinhumanserum ZHONGWeil，ZI-IANGShi—nin92 (1．QishanHospitalofGuangzhou，Panyu，Guangdong511483China；2．InstituteofNanjingBrainHospital) 【Abstract】Objective：ToestablishaHPLCassaymethodforthedeterminationofVenlafaxinelevelinhumanserum．Methods： UsingamixtureliquidofAeetonitrile：Methanol：Water：Imol／L—AmmoniumAcetate：5mol／L—NH40H(50：350：100：5：1)asmobile phase，pH8．7，flowspeedwaslml／min，ODScolumn，thewavelengthofdetectionwas229nm，Venlafaxinelevelwasdeterminedby meansofexternalstandardmethod．Results：Alinearitywasobtainedfrom25～700ngom]一1ofVenlafaxinelevelinsernmwithagood correlation(r=：0．998)．Detectionlimitwas2ngoml～1．TheaverageextractionrecoveryWas96．59％．ThecoefficientsOfinter—day andintra—dayvariationswere3．44％and3．77％respectively．Conclusions：UsingHPLCcandetectVenlafaxineinserumwell． 【Keywords】HPLC；Venlafaxine 文拉法辛(Venlafaxine)是近年在我国才正式应 用于临床的第二代非三环类抗抑郁药物，国内外研 究明其能有效治疗抑郁症¨“j，由于在较大剂量 其同时作用于5羟色胺能和去甲肾上腺素能系统， 因此起效快疗效好聆、4、5]。但其治疗窗药物浓度，副 作用与药物浓度的关系，中毒浓度均不清楚，尤其是 在较高剂量时可能引起患者血压升高，限制了其在 临床的使用。为此我们建立了高效液相法测定血清 文拉法辛浓度的方法。为今后进一步研究奠定基 础。 1仪器和材料 1．1 仪器 美国沃特斯公司高效液相色谱仪 Breeze操作系统，2487双波长检测器，717自动进样 器。紫外检测器检测波长229Ilm，ODS柱，4ITlm× 25cm，颗粒度5斗m，淮阴汉邦公司生产。柱温箱温 度40度。 1．2试剂和血样文拉法辛标准品由成都大西南 制药股份有限公司提供。水为本所生产的双蒸水。 乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。空白血清购自 收稿日期：2005一．03—15 广东省血站。病人血样本采自本院患者肘静脉血， 要求患者每天服用文拉法辛50mg一225mg(推荐治 疗剂量范围)，持续一周。早晨服药前采血3ml，置 干试管分离血清备用。 1．3标准曲线的制备在空白血清中加入文拉法 辛标准品配制成浓度为25、50、100、200、300、500、 700ng／ml系列各取lml。加入0．5M硼酸钠O．5IIll 和正己烷(含1．5％异戊醇)3m1，震荡3min，3，000 r·min～，离心5min，充分吸取有机相置于一试管 内，80度水浴蒸干。残渣用200斗l甲醇溶解备用。 流动相为甲醇：乙腈：水：1mol／L醋酸铵：5mol／L氨 水(350：50：100：5：1)的混合液体，pH8．7。过滤脱 气后冲洗，流速1ml·min一。待基线平稳后进样 40出。以血清药物浓度对峰面积作标准曲线，求出 回归方程为A=1．03×103C+1．15×103。相关系 数0．998。线性范围25ng·ml～～700ng·ml～。 最低检出浓度2ng·ml。1(按信效比I>3计)。 2结果 2．1 回收率实验在空白血清中加入标准品(如表 1)制成标准血清，按2．1节方法处理测定峰面积，计 算回收率。平均提取回收率为(96．59±3．45)％，见 499 万方数据 2005年9月 第17卷第9期 中国民康医学杂志 MedicalJournalofChinesePeople§Health Sep，2005 V01．17No．9 表1；平均方法回收率为(100．07±3．68)％，见表2。 表2平均方法回收率(n=5) 表1萃取回收率(n=5) 2．2精密度实验用空白血清配制标准血清(浓度 如表3)，分别于同一日内和不同日间按2．I节方法 处理，测定浓度，计算出日内、13间精密度，见表3。 表3 日内。日间精密度(n=5) 加入浓度 日内 日间 l竖：型：：2 型堡整廑f竖：型：：2 堕旦l丝2 垩塑堕旦!丝2 型堡整廑(竖：熊：：2 墅里I丝2 垩望堕旦!丝2 100 100．94±2．87 2．87 99．76±3．52 3．52 200 198．674-6．24 3．12 3．44 197．544-7．08 3．54 3．77 300 295．56土2．96 4．32 296．38-I-12．694．26 2．3血清药物浓度测定12名患者每天分别服用 文拉法辛50～225mg，连续1周后，早晨服药前取 肘静脉血3IIll，分离血清后，用上述方法进行定性、 定量。查明患者药物浓度为32～315ng·ml～。 3讨论 文拉法辛的最大紫外吸收值是229nm，在此短 波长区很多杂质紫外吸收度很大，容易对文拉法辛 的峰形成干扰，我们尝试用过乙醚、乙酸乙脂、正己 烷等几种抽提方法，发现只有正己烷能充分提取文 拉法辛，而且在文拉法辛峰开始前和结束后的1分 钟左右无干扰峰出现。由于正己烷与血清震荡混匀 时有部分样本会出现乳化的现象，影响了提取率，所 以我们在正己烷中加入少量异戊醇防止乳化的发 生。 文拉法辛的代谢主要是通过细胞色素P一450 酶的2D6和3A4进行，此两种酶均存在基因的多形 性，尤其是3A4的表达在不同人身上差异很大，文 拉法辛还能抑2D6的活性∞J，因此有可能患者服用 的药量虽小，而血清浓度却过大，因而引起较严重的 副作用；或者已达推荐剂量的上限而血药浓度并不 高，达不到很好地治疗效果。在我们测定的十几个 样本中，我们也发现患者血药浓度与剂量虽然大体 呈现相关，也有偏离度较大的个例。 500 目前常用的抗抑郁和抗精神病药物如阿米替 林，多虑平，氟西汀，舒必利，维思通，奥氮平，氟哌啶 醇，奋乃静，氯丙嗪，泰尔登，奎的平等在此色谱条件 下均不会对文拉法辛峰形成干扰，因此，此方法可以 用在联合用药时或在筛查服药自杀患者所用药物的 定性和定量上。 参考文献 [1]ClercCE，Ru!myP，Verdeau—PaillosJ．Adouble—blindeompar- isonofvenlafaxineandfluoxetineinpatientshospitalizedformajor depressionandmelancholia[J]．IntClinPsyehopharmaeology， 1994，9：139—143． [2]HollidaySM，BenfieldPVenlafaxine：Areviewofitspharmacology andtherapeuticpotentialindepmssion[J]．Drugs，1995，49：280— 294． [3]叶青，顾小静，刘建峰，等．文拉法辛与帕罗西汀治疗抑郁症 对照观察[J]．临床精神医学杂志，2002，12：84—85． [4]逢晓云，贡ib燕．文拉法辛的药理学与临床应用[J]．中国新药 与临床杂志，2000，19：280—294． [5]RedrobeJP，BourinM，ColombelMC，eta1．Dose—dependent noradrenergicandserotonergicpropertiesofVerdafaxineinanimal modelsindicativeofantidepressantactivity[J]．PsyChopharmacol· ogy，1998，138：1—8． [6]RobertLB，DianaB．PharmacologicalManagementofAcuteand ChronicPain[J]．SouthMedJ，2001，94：756-812． 欢迎投稿 欢迎订阅 万方数据